一种血管紧张素转换酶校准品的制备方法技术

本发明专利技术公开了一种血管紧张素转换酶校准品的制备方法，通过将猪肺加入缓冲液进行研磨匀浆、离心，取上清液，获得第一混合液；将第一混合液静置，取第一混合液的上清液，往上清液中加入硫酸铵，获得第二混合液；将第二混合液静置、离心，取第二混合液的沉淀物，在沉淀物中加入缓冲液进行溶解，后透析去除硫酸铵，获得血管紧张素转换酶粗液；将血管紧张素转换酶粗液加入含有蛋白稳定保护剂的缓冲液中稀释，获得血管紧张素转换酶校准品，通过对所述缓冲液种类及所述蛋白稳定保护剂的筛选，制备出了稳定性能好、工艺简单，成本低，使用方便，具有广阔的应用前景和市场价值的血管紧张素转换酶检测试剂液体校准品。

【技术实现步骤摘要】
一种血管紧张素转换酶校准品的制备方法
本专利技术涉及医学检测
，尤其涉及一种血管紧张素转换酶校准品的制备方法。
技术介绍
血管紧张素转换酶(AngiotensinConvertionEnzyme，ACE；EC.3.4.15.1)也叫激肽酶Ⅱ，是一种二肽羧基的糖蛋白酶，内含有30％的果糖、甘露糖、N-乙酰葡糖胺和唾液酸等糖组分。ACE在全身多组织的血管内皮细胞及上皮细胞中均有分布，主要位于肺毛细血管的内皮细胞中。血管紧张素转换酶主要由肺内皮细胞产生，是肾素-血管紧张素系统、激肽释放酶-激肽系统中的重要组成成分，具有调节血压的重要作用。ACE可以将血管紧张素I转化为血管紧张素Ⅱ，而血管紧张素Ⅱ是一种强效的血管收缩剂，具有收缩血管促进血压升高的作用；同时ACE可以将缓激肽转变为缓释肽，使缓激肽失去血管舒张能力，因此ACE活力的升高是引起高血压的一个重要因素。且血管紧张素转换酶的活性，与结节病有一定的相关性。哮喘发作、急性心原性肺水肿、慢性阻塞性肺疾患、自发性气胸、肺纤维化、成人呼吸窘迫综合征等患者的血管紧张素转换酶活性均有不同程度下降，而肺结核患者的酶活性升高，因此血管紧张素转换酶在肺部疾病诊断及鉴别诊断中具有重要的辅助诊断价值。因此，测定血清中血管紧张素转换酶的活性，具有重要的意义。而作为试剂盒核心组件的校准品，它的性能稳定性则为确保试剂检测结果的恒定提供了充足的保障。目前制备的校准品大多采用纯酶作为酶源通过真快冷冻干燥所得。商品化的血管紧张素转换酶价格昂贵，不利于血管紧张素转换酶测定试剂盒的工业化生产。且目前ACE的分离纯化主要采用硫酸铵分级沉淀，亲和层析，离子交换柱层析，羟基磷灰石柱层析，凝胶过滤层析等多种蛋白纯化方法相结合的方式进行，分离提纯过程繁琐，操作复杂，耗时长，且成本高。同时在保持酶的稳定性方面多采用真空冻干方式，冻干品使用及保存较液体更为复杂。因此需要一种成本低廉、操作简单、性能稳定的液体校准品在血管紧张素转换酶活性测定中发挥作用。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种血管紧张素转换酶校准品的制备方法，旨在制备出稳定性能好、制作工艺简单，使用方便，同时具有广阔的应用前景和巨大的市场价值的血管紧张素转换酶检测试剂液体校准品。为实现上述目的，本专利技术提供了一种血管紧张素转换酶校准品的制备方法，包括如下步骤：配制缓冲液；将猪肺加入所述缓冲液中进行研磨匀浆获得猪肺匀浆液，将所述猪肺匀浆液离心，取上清液获得第一混合液；在所述第一混合液中加入硫酸铵，获得第二混合液；将所述第二混合液静置、离心，取第二混合液的沉淀物，在所述沉淀物中加入配制的所述的缓冲液进行溶解，透析去除硫酸铵，获得血管紧张素转换酶粗液；将蛋白稳定保护剂加入配制的所述缓冲液中，获得含有蛋白稳定保护剂的缓冲液；将所述血管紧张素转换酶粗液加入所述含有蛋白稳定保护剂的缓冲液中稀释，获得血管紧张素转换酶校准品。其中，所述缓冲液为三羟甲基氨基甲烷缓冲液、磷酸缓冲液、硼酸缓冲液、MES缓冲液中的一种或几种组合。其中，所述缓冲液pH为7～9，浓度为20mmol/L～80mmol/L。其中，在所述猪肺匀浆液离心步骤中，离心速度为6000rpm～10000rpm，离心时间为20min～40min。其中，在所述第一混合液中加入硫酸铵步骤中，所述硫酸铵的终浓度为2.6mol/L。其中，在获得血管紧张素转换酶粗液步骤中，先对所述第二混合液静置过夜，再对其进行离心，离心速度为8000rpm，离心时间为30min，后取沉淀物。其中，在获得血管紧张素转换酶粗液步骤中，所述缓冲液的温度为2℃～8℃。其中，在获得含有蛋白稳定保护剂的缓冲液步骤中，所述蛋白稳定保护剂是由无机盐、糖类、多元醇及防腐剂组成。其中，所述蛋白稳定保护剂中的无机盐为氯化钠，其终浓度为0.1mol/L～0.5mol/L，所述蛋白稳定保护剂中的糖类为葡萄糖、蔗糖、海藻糖、葡聚糖中的一种或几种组合，其终浓度为1g/L～50g/L。其中，所述蛋白稳定保护剂中的多元醇为甘露醇、甘油、山梨醇中的一种或几种组合，其终浓度为1g/L～50g/L，所述蛋白稳定保护剂中的防腐剂为叠氮钠、Proclin300、硫酸新霉素中的一种或几种组合，其终浓度为0.1g/L～5g/L。本专利技术的有益效果体现在：通过配制缓冲液；将猪肺加入缓冲液进行研磨匀浆、离心，取上清液，获得第一混合液；将第一混合液静置，取第一混合液的上清液，往上清液中加入硫酸铵，获得第二混合液；将第二混合液静置、离心，取第二混合液的沉淀物，在沉淀物中加入缓冲液进行溶解，后透析去除硫酸铵，获得血管紧张素转换酶粗液；将血管紧张素转换酶粗液加入含有蛋白稳定保护剂的缓冲液中稀释，获得血管紧张素转换酶校准品，其中以所述缓冲液为基质，以经粗分离的酶粗液为原料，通过对所述缓冲液种类及所述蛋白稳定保护剂的筛选，制备出了稳定性好、均一性好、准确度高的血管紧张素转换酶检测试剂液体校准品。本专利技术工艺简单，成本低，使用方便，具有广阔的应用前景和巨大的市场价值。附图说明为了更清楚地说明本专利技术实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本专利技术的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。图1是本专利技术的血管紧张素转换酶校准品的制备方法的实施例一的流程图。图2是本专利技术的血管紧张素转换酶校准品的制备方法的实施例二的流程图。图3是本专利技术的血管紧张素转换酶校准品的制备方法的实施例三的流程图。具体实施方式下面详细描述本专利技术的实施例，所述实施例的示例在附图中示出，其中自始至终相同或类似的标号表示相同或类似的元件或具有相同或类似功能的元件。下面通过参考附图描述的实施例是示例性的，旨在用于解释本专利技术，而不能理解为对本专利技术的限制。在本专利技术的描述中，需要理解的是，术语“长度”、“宽度”、“上”、“下”、“前”、“后”、“左”、“右”、“竖直”、“水平”、“顶”、“底”“内”、“外”等指示的方位或位置关系为基于附图所示的方位或位置关系，仅是为了便于描述本专利技术和简化描述，而不是指示或暗示所指的装置或元件必须具有特定的方位、以特定的方位构造和操作，因此不能理解为对本专利技术的限制。此外，在本专利技术的描述中，“多个”的含义是两个或两个以上，除非另有明确具体的限定。实施例一：请参阅图1，本专利技术提供的一种血管紧张素转换酶校准品的制备方法，包括如下步骤：S101：配制pH为7.5，浓度为20mmol/L的三羟甲基氨基甲烷缓冲液；S102：将猪肺加入所述缓冲液中进行研磨匀浆获得猪肺匀浆液、将所述猪肺匀浆液离心，离心速度为8000rpm，离心时间为30min，后取上清液获得第一混合液；S103：在所述第一混合液中加入硫酸铵使其终浓度为2.6mol/L，获得第二混合本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种血管紧张素转换酶校准品的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：/n配制缓冲液；/n将猪肺加入所述缓冲液中进行研磨匀浆获得猪肺匀浆液，将所述猪肺匀浆液离心，取上清液获得第一混合液；/n在所述第一混合液中加入硫酸铵，获得第二混合液；/n将所述第二混合液静置、离心，取第二混合液的沉淀物，在所述沉淀物中加入配制的所述的缓冲液进行溶解，透析去除硫酸铵，获得血管紧张素转换酶粗液；/n将蛋白稳定保护剂加入配制的所述缓冲液中，获得含有蛋白稳定保护剂的缓冲液；/n将所述血管紧张素转换酶粗液加入所述含有蛋白稳定保护剂的缓冲液中稀释，获得血管紧张素转换酶校准品。/n

【技术特征摘要】
1.一种血管紧张素转换酶校准品的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
配制缓冲液；
将猪肺加入所述缓冲液中进行研磨匀浆获得猪肺匀浆液，将所述猪肺匀浆液离心，取上清液获得第一混合液；
在所述第一混合液中加入硫酸铵，获得第二混合液；
将所述第二混合液静置、离心，取第二混合液的沉淀物，在所述沉淀物中加入配制的所述的缓冲液进行溶解，透析去除硫酸铵，获得血管紧张素转换酶粗液；
将蛋白稳定保护剂加入配制的所述缓冲液中，获得含有蛋白稳定保护剂的缓冲液；
将所述血管紧张素转换酶粗液加入所述含有蛋白稳定保护剂的缓冲液中稀释，获得血管紧张素转换酶校准品。


2.如权利要求1所述的血管紧张素转换酶校准品的制备方法，其特征在于，
所述缓冲液为三羟甲基氨基甲烷缓冲液、磷酸缓冲液、硼酸缓冲液、MES缓冲液中的一种或几种组合。


3.如权利要求1所述的血管紧张素转换酶校准品的制备方法，其特征在于，
所述缓冲液pH为7～9，浓度为20mmol/L～80mmol/L。


4.如权利要求1所述的血管紧张素转换酶校准品的制备方法，其特征在于，
在所述猪肺匀浆液离心步骤中，离心速度为6000rpm～10000rpm，离心时间为20min～40min。


5.如权利要求1所述的血管紧张素转换酶校准品的制备方法，其特征在于，
在所述第一混合液中加入硫酸...

【专利技术属性】
技术研发人员：黄艳妮，叶志杰，
申请(专利权)人：桂林优利特医疗电子有限公司，
类型：发明
国别省市：广西;45