【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及体外诊断试剂化学发光，尤其涉及一种hcgab检测试剂磁珠工作液的制备方法。
技术介绍
1、人绒毛膜促性腺激素(hcg)是人类受孕后胎盘滋养层细胞分泌的由α、β两个亚基组成的一种糖蛋白。其主要功能是刺激激素分泌，对维持妊娠、母婴屏障起关键作用。在流产史、促排卵史人群中，hcg可能作为抗原刺激机体产生抗人绒毛膜促性腺激素抗体(hcgab)；hcgab具有阻断hcg的作用，hcg浓度降低不能维持配子着床和维持妊娠，引起流产。研究表明抗人绒毛膜促性腺激素抗体和免疫性不孕症的发病存在明显的相关性，检测抗hcg抗体是免疫性不孕症辅助诊断的重要手段之一。
2、在不孕不育的诊断中，抗人绒毛膜促性腺激素抗体在临床上主流检测方法为酶联免疫吸附分析法，但不可忽略其操作繁琐、灵敏度差的问题。目前，化学发光法采用间接法检测，以hcg为抗原捕获hcgab，与偶联碱性磷酸酶的二抗形成可催化amppd的免疫复合物。虽该方法能解决前述酶免法的痛点，但临床低端灵敏度差仍是难点。然针对抗人绒毛膜促性腺激素抗体检测盒的相关研究甚少。中国专利cn107561293a提供了一种抗人绒毛膜促性腺激素抗体检测试剂盒的制备方法，简单的使用hcg抗原包被羧基磁珠，为磁珠的包被提供了一种选择，但具备生物活性的原料在生产过程中不可避免带来的生物安全风险值得关注。
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于提供一种hcgab检测试剂磁珠工作液的制备方法，旨在解决现有的hcg抗原包被羧基磁珠的原料在生产过程中会带来的生
2、为实现上述目的，本专利技术提供了一种hcgab检测试剂磁珠工作液的制备方法，包括以下步骤：
3、使用缓冲液稀释抗原hcgβcf至2mg/ml，得工作液；
4、用巯基修饰traut’s试剂与所述工作液在37℃密闭条件下反应30min，脱盐纯化浓缩得反应液；
5、使用二甲基亚砜水溶液稀释所述反应液至1mg/ml,在室温条件下反应4h，换液浓缩纯化，得hcgβcf偶联体；
6、将所述hcgβcf偶联体使用sa磁珠偶联技术、羧基磁珠偶联技术和tosyl磁珠偶联技术中的任意一种进行包被，得到hcgab检测试剂磁珠工作液。
7、其中，所述将所述hcgβcf偶联体使用羧基磁珠偶联技术进行包被，包括：
8、使用ph范围5～7的偶联缓冲液洗涤磁珠3次，稀释至10mg/ml；
9、按5～40μg/mg的包被比例加入所述hcgβcf偶联体孵育15min，并加入0.05％表面活性剂做催化；
10、加入edc催化反应，室温下旋转反应4h,反应结束后除去上清液；
11、加入1％封闭剂进行封闭，室温下旋转反应2h，反应结束后除去上清液，等体积加入含伯氨基缓冲液淬灭反应，重复洗涤3次；
12、除去上清液，使用磁珠工作液洗涤3次，并稀释成0.2mg/ml磁珠浓度工作液，得到hcgab检测试剂磁珠工作液。
13、其中，所述缓冲液含有0.9％氯化钠的pb缓冲液、mes缓冲液或cb缓冲液，ph范围7～8；
14、所述巯基修饰traut’s试剂与所述工作液的反应质量比为1：0.5～1：8；
15、所述二甲基亚砜水溶液浓度为5％～30％。
16、其中，所述偶联缓冲液为ph＝6.0的100mm的mes缓冲液；
17、所述包被比例为10μg/mg，所述表面活性剂为s21；
18、edc反应质量比1：15～1：3；
19、封闭剂为blockmaster db1130或酪蛋白；
20、所述含伯氨基缓冲液包括25mm的tris缓冲液，ph＝7、含有0.2％的s14、0.9％的氯化钠和1％甘油；
21、所述磁珠工作液为10mm的mes缓冲液，ph＝6.5，含有0.9％氯化钠、0.5％～1％海藻糖、0.5％～1％牛血清白蛋白、0.2％表面活性剂s14、0.05％～0.2％防腐剂和0.05％l-胱氨酸。
22、其中，所述防腐剂pc300、pc950、bnd-10和krovin 300中的任意两种或多种。
23、本专利技术的一种hcgab检测试剂磁珠工作液的制备方法，通过使用缓冲液稀释抗原hcgβcf至2mg/ml，得工作液；用巯基修饰traut’s试剂与工作液在37℃密闭条件下反应30min，脱盐纯化浓缩得反应液；使用二甲基亚砜水溶液稀释反应液至1mg/ml,在室温条件下反应4h，换液浓缩纯化，得hcgβcf偶联体；将hcgβcf偶联体使用sa磁珠偶联技术、羧基磁珠偶联技术和tosyl磁珠偶联技术中的任意一种进行包被，得到hcgab检测试剂磁珠工作液，本专利技术提供原料方案，制备低价、安全的捕获抗原，降低企业生产成本，降低生产中生物安全风险，提高临床灵敏性，改善临床符合率，解决了现有的hcg抗原包被羧基磁珠的原料在生产过程中会带来的生物安全风险的问题。
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1.一种HCGAb检测试剂磁珠工作液的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.如权利要求1所述的HCGAb检测试剂磁珠工作液的制备方法，其特征在于，
3.如权利要求1所述的HCGAb检测试剂磁珠工作液的制备方法，其特征在于，
4.如权利要求2所述的HCGAb检测试剂磁珠工作液的制备方法，其特征在于，
5.如权利要求4所述的HCGAb检测试剂磁珠工作液的制备方法，其特征在于，
【技术特征摘要】
1.一种hcgab检测试剂磁珠工作液的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.如权利要求1所述的hcgab检测试剂磁珠工作液的制备方法，其特征在于，
3.如权利要求1所述的hcgab检测试...
【专利技术属性】
技术研发人员：刘红平，陈婷，石小琪，
申请(专利权)人：桂林优利特医疗电子有限公司，
类型：发明
国别省市：
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