【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】软骨细胞的质量保证
本专利技术涉及具有高质量的软骨细胞组合物，以及用于质量保证和质量控制软骨细胞组合物的方法。背景关节透明软骨的损害具有有限的固有的损伤后愈合能力。这会导致加速的关节退化和早发性骨关节炎。现今，保留天然关节软骨以延缓关节置换术的需求不断增长。人类成年关节软骨细胞是一种独特的细胞类型，其已经达到完全分化的状态作为发育的终点。在软骨基质内，软骨细胞调节软骨的内稳态，并使基质成分保持在平衡的低转换状态。软骨细胞，软骨中唯一的细胞类型，表达多种不同的整联蛋白。整联蛋白是介导细胞-细胞和细胞-基质相互作用的跨膜糖蛋白的一大家族。此超家族的所有已知成员都是由α-和β-亚基组成的非共价缔合的异二聚体。整联蛋白α10β1是软骨细胞上主要的结合胶原蛋白的整联蛋白。它由分化的软骨细胞以及由具有软骨形成分化潜能的MSC表达。另一方面，整联蛋白α11β1是由成纤维细胞(包括滑液成纤维细胞)表达的。整联蛋白α11β1也可以由单层培养物中的软骨细胞中表达，该单层培养物可能已部分去分化并产生I型纤维性胶原蛋白而不是II型软骨胶...
【技术保护点】
1.一种包含软骨细胞的组合物，其中所述组合物具有的整联蛋白α10与整联蛋白α11表达比率为至少4比1。/n
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20170629 SE 1750849-01.一种包含软骨细胞的组合物，其中所述组合物具有的整联蛋白α10与整联蛋白α11表达比率为至少4比1。
2.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其中所述整联蛋白α10与整联蛋白α11表达比率为至少4比1，诸如至少5比1，诸如至少10比1，诸如至少15比1，诸如至少20比1，诸如至少25比1，诸如至少30比1，诸如至少35比1，诸如至少40比1，诸如至少45比1，诸如至少50比1，诸如至少60比1，诸如至少70比1，诸如至少80比1，诸如至少90比1，诸如至少100比1，诸如至少150比1，诸如至少200比1。
3.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其中所述整联蛋白α10和/或整联蛋白α11表达为与整联蛋白β1亚基组合的异二聚体。
4.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其中所述组合物包含分化的软骨细胞，且其中所述分化的软骨细胞表达整联蛋白α10并且基本上不表达整联蛋白α11。
5.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其中所述组合物包含部分去分化的软骨细胞，且其中所述部分去分化的软骨细胞表达整联蛋白α10和整联蛋白α11二者。
6.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其中所述组合物选自软骨组织制剂、包含软骨细胞的组织制剂、单层软骨细胞细胞培养物和三维软骨细胞细胞培养物，其中所述三维软骨细胞细胞培养物是球体、沉淀、细胞片层或在支架中培养的软骨细胞。
7.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其中所述组合物衍生自软骨组织、包含软骨细胞的组织、单层软骨细胞细胞培养物和三维软骨细胞细胞培养物，其中所述三维软骨细胞细胞培养物是球体、沉淀、细胞片层或在支架中培养的软骨细胞。
8.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其中所述组合物中的细胞是哺乳动物细胞。
9.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其中所述组合物中的细胞是人的。
10.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其中所述组合物中的细胞是马的。
11.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其中所述组合物中的细胞是犬的。
12.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其中所述整联蛋白α10和/或整联蛋白α11在哺乳动物软骨细胞或成纤维细胞样细胞的细胞表面上表达。
13.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其中所述组合物基本上不含污染的细胞，其中所述污染的细胞表达整联蛋白α11但不表达整联蛋白α10。
14.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其中所述组合物包含占总细胞组合物或群体的至少80％，诸如至少85％，诸如至少90％，诸如至少95％，诸如至少98％，诸如至少99％，诸如100％的软骨细胞。
15.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其中所述软骨细胞还表达第二标志物，该第二标志物选自CEP-68/CRTAC1、GP-39软骨糖蛋白、CD44、CD166、IIA型胶原蛋白、IIB型胶原蛋白、聚集蛋白聚糖、AlizarianRed(neg)、阿尔新蓝(AlcianBlue)、CRTAC1、CEP-68、CD146、CD90、CD49e、CD63和Sca-1。
16.一种用于确定包含软骨细胞的组合物的质量的方法，其中所述质量确定包括以下标准中的一个或多个：
·软骨细胞的同一性，
·软骨细胞的分化状态，
·软骨细胞的纯度，和
·软骨细胞的潜能，
该方法包括以下步骤：
a)提供包含软骨细胞的候选组合物；
b)分析所述组合物中整联蛋白α10和整联蛋白α11的表达水平；
c)比较整联蛋白α10的表达水平与整联蛋白α11的表达水平，其中整联蛋白α10与整联蛋白α11表达比率为至少4比1指示：
·所述软骨细胞组合物中软骨细胞的软骨细胞同一性，
·所述软骨细胞组合物中软骨细胞的分化状态，
·所述软骨细胞组合物的纯度，和/或
·所述软骨细胞组合物的软骨细胞的潜能，
且从而指示高质量软骨细胞组合物。
17.一种用于分离高质量软骨细胞群体的方法，该方法包括以下步骤：
a)提供包含软骨细胞的候选组合物；
b)分析所述组合物中整联蛋白α10和整联蛋白α11的表达；和
c)富集软骨细胞，该软骨细胞具有的整联蛋白α10与整联蛋白α11表达比率为至少4比1，
因此获得分离的高质量软骨细胞群体。
18.一种用于制备高质量软骨细胞群体的方法，该方法包括以下步骤：
a)提供包含软骨细胞的候选组合物；
b)分析所述组合物中整联蛋白α10和整联蛋白α11的表达；和
c)扩增软骨细胞，该软骨细胞具有的整联蛋白α10与整联蛋白α11表达比率为至少4比1，
因此制备高质量软骨细胞群体。
19.根据权利要求16-18中任一项所述的方法，其中所述整联蛋白α10与整联蛋白α11表达比率为至少4比1，诸如至少10比1，诸如至少15比1，诸如至少20比1，诸如至少25比1，诸如至少30比1，诸如至少35比1，诸如至少40比1，诸如至少45比1，诸如至少50比1，诸如至少60比1，诸如至少70比1，诸如至少80比1，诸如至少90比1，诸如至少100比1，诸如至少150比1，诸如至少200比1。
20.根据权利要求16-19中任一项所述的方法，其中所述整联蛋白α11表达最多为整联蛋白α10表达的25％，诸如最多为整联蛋白α10表达的20％，诸如最多为整联蛋白α10表达的15％，诸如最多为整联蛋白α10表达的10％，诸如最多为整联蛋白α10表达的5％，诸如最多为整联蛋白α10表达的4％，诸如最多为整联蛋白α10表达的3％，诸如最多为整联蛋白α10表达的2％，诸如最多为整联蛋白α10表达的1％。
21.根据权利要求16-20中任一项所述的方法，其中整联蛋白α10和整联蛋白α11二者的表达指示部分去分化的软骨细胞组合物。
22.根据权利要求16-21中任一项所述的方法，其中整联蛋白α10的表达和整联蛋白α11的基本上无表达指示分化的软骨细胞组合物。
23.根据权利要求16-22中任一项所述的方法，其中所述软骨细胞组合物中至多20％的细胞表达α11且基本上不表达整联蛋白α10指示所述软骨细胞组合物的纯度。
24.根据权利要求16-23中任一项所述的方法，其中所述软骨细胞组合物中至多20％，诸如至多15％，诸如至多10％，诸如至多5％，诸如至多4％，诸如至多3％，诸如至多2％，诸如至多1％，诸如至多0.5％的细胞表达α11且基本上不表达整联蛋白α10指示所述软骨细胞组合物的纯度。
25.根据权利要求16-24中任一项所述的方法，其中在所述软骨细胞组合物或群体中基本上不表达整联蛋白α11。
26.根据权利要求16-25中任一项所述的方法，其中所述候选组合物选自软骨组织制剂、包含软骨细胞的组织制剂、单层软骨细胞细胞培养物和三维软骨细胞细胞培养物，其中所述三维软骨细胞细胞培养物是球体、沉淀、细胞片层或在支架中培养的软骨细胞。
27.根据权利要求16-26中任一项所述的方法，其中所述候选组合物衍生自软骨组织、包含软骨细胞的组织、单层软骨细胞细胞培养物和三维软骨细胞细胞培养物，其中所述三维软骨细胞细胞培养物是球体、沉淀、细胞片层或在支架中培养的软骨细胞。
28.根据权利要求16-27中任一项所述的方法，其中表达分析是通过选自下组的方法进行的：流式细胞术、ELISA、蛋白质印迹、免疫沉淀、斑点印迹、qPCR、免疫测...
【专利技术属性】
技术研发人员：E·伦德格伦·阿克兰，K·希米拉斯卡·马苏米，
申请(专利权)人：辛特拉股份公司，
类型：发明
国别省市：瑞典;SE
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