肌肉谱系细胞的改善产生及其治疗用途制造技术

本文提供了用于产生成熟肌管的方法和组合物。在一些情况下，该方法包括使体外培养物中的成肌细胞与化合物接触，其中所述体外培养物中的成肌细胞与化合物的接触导致成熟肌管或肌管样细胞的生成。在一些情况下，提供了治疗方法，其包括用诸如Chk1抑制剂的化合物治疗受试者以便治疗肌肉缺乏。该化合物可以作为独立疗法施用或与细胞疗法联合施用，例如引入肌肉前体细胞如卫星细胞或成肌细胞。本文还提供了鉴定可诱导从成肌细胞形成成熟肌管或肌管样细胞的化合物的方法，以及使用所鉴定的化合物治疗受试者的方法。

Improved production and therapeutic use of muscle lineage cells

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】肌肉谱系细胞的改善产生及其治疗用途相关申请本申请要求于2016年10月26日提交的第62/413,416号美国临时专利申请的权益，该美国临时申请通过引用整体并入本文。
技术介绍
在健康的肌肉发育过程中，成肌细胞(通常是原始肌细胞)可以增殖和/或分化，然后融合形成被称为肌管的多核纤维。成熟的或成体样肌管通常是高度多核的并且相对较厚且较长，特别与未成熟的肌管相比。成熟的肌管也可以形成分支结构，并且一般具有被细胞核和肌浆占据的中心核心，这可以使细胞具有管状外观。有趣的是，体内的成熟肌管往往在对生理需求变化的响应或对疾病的响应方面具有高度适应性，并且能够经历大小(肥大或萎缩)和代谢能力的表型变化(例如，从依赖于高度氧化途径到高度糖酵解途径)。体内的肌纤维也可以表现为慢颤搐或快颤搐形式。慢颤搐纤维往往依赖于有氧呼吸(糖酵解和Krebs循环)来促进肌肉收缩，并且对于长期耐力(例如，长跑)和姿势支撑是理想的。慢颤搐纤维通常具有相对较高的氧需求，并且通常具有大量的线粒体和高浓度的肌红蛋白——在血液中发现的一种氧结合蛋白质，其使肌肉呈现微红色。相反，快颤搐纤维往往依赖本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种产生成熟肌管的方法，该方法包括：/na.提供一个或多个成肌细胞，其中所述成肌细胞来源于人；以及/nb.在包含具有一种或多种为了促进成熟肌管产生而特别选择的化合物的培养基的培养物中体外培养所述一个或多个成肌细胞，从而产生表现出两种或更多种以下特征的成熟肌管：(i)每个肌管多于15个细胞核；(ii)长度大于0.5mm；(iii)直径大于6μm；并且(iv)肌管面积大于3,000μm

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20161026 US 62/413,4161.一种产生成熟肌管的方法，该方法包括：
a.提供一个或多个成肌细胞，其中所述成肌细胞来源于人；以及
b.在包含具有一种或多种为了促进成熟肌管产生而特别选择的化合物的培养基的培养物中体外培养所述一个或多个成肌细胞，从而产生表现出两种或更多种以下特征的成熟肌管：(i)每个肌管多于15个细胞核；(ii)长度大于0.5mm；(iii)直径大于6μm；并且(iv)肌管面积大于3,000μm2。


2.根据权利要求1所述的方法，其进一步包括将所述一个或多个成肌细胞在包含一种或多种为了促进成熟肌管产生而特别选择的化合物的培养基中孵育至少12小时。


3.根据权利要求1所述的方法，其进一步包括检测所述培养物中的成熟肌管。


4.根据权利要求1-3中任一项所述的方法，其中所述成熟肌管表现出每个细胞有超过30个细胞核。


5.根据权利要求1-4中任一项所述的方法，其中所述成熟肌管表现出大于4,000μm2的肌管面积。


6.根据权利要求1-5中任一项所述的方法，其中所述成熟肌管表现出大于5,000μm2的肌管面积。


7.根据权利要求1-6中任一项所述的方法，其中所述培养物含有平均肌管面积大于1,000μm2的肌管。


8.根据权利要求1-7中任一项所述的方法，其中所述培养物含有平均肌管面积大于2,000μm2的肌管。


9.根据权利要求1-8中任一项所述的方法，其中所述成熟肌管表现出大于6μm的直径。


10.根据权利要求1-8中任一项所述的方法，其中所述成熟肌管表现出大于10μm的直径。


11.根据权利要求1-8中任一项所述的方法，其中所述成熟肌管表现出大于12μm的直径。


12.根据权利要求1-11中任一项所述的方法，其中所述一种或多种为了促进成熟肌管产生而特别选择的化合物包括一种或多种针对一种或多种以下途径的化合物：细胞周期信号传导途径、DNA修复途径、MAPK信号传导途径、RTK/PI3K/Akt信号传导途径、mTOR信号传导途径、G蛋白偶联受体(GPCR)途径和毒蕈碱乙酰胆碱受体(mAChR)途径。


13.根据权利要求1-12中任一项所述的方法，其中所述一种或多种化合物包括式(I)的化合物：



或其盐，其中
R1选自甲基、氟代、氯代、三氟甲基和二氟甲基；
R2选自苯并咪唑基、苯并噁唑基、苯并噻唑基、3H-吲哚基、苯并呋喃基、苯并噻吩基和1H-茚基；且
R3选自奎宁环基和1,4-二氮杂双环[2.2.2]辛基。


14.根据权利要求1-12中任一项所述的方法，其中所述一种或多种化合物包括式(II)的化合物：



或其盐，其中
R1选自甲基、卤素和卤代甲基；且
R2是包含0-4个独立地选自O、S或N的杂原子的5+6双环稠合环系。


15.根据权利要求1-12中任一项所述的方法，其中所述一种或多种化合物包括式(III)的化合物：



或其盐。


16.根据权利要求1-15中任一项所述的方法，其中在没有针对成熟肌管进行纯化或选择的情况下，表现出所述两种或更多种特征的成熟肌管构成培养物的至少50％。


17.根据权利要求16所述的方法，其中在没有针对成熟肌管进行纯化或选择的情况下，表现出所述两种或更多种特征的成熟肌管构成培养物的至少70％。


18.根据权利要求1所述的方法，其中在没有针对成熟肌管进行纯化或选择的情况下，表现出所述两种或更多种特征的成熟肌管构成培养物的至少60％，并且表现出大于10μm的直径。


19.根据权利要求1所述的方法，其中在没有针对成熟肌管进行纯化或选择的情况下，表现出所述两种或更多种特征的成熟肌管构成培养物的至少60％，并且表现出大于12μm的直径。


20.根据权利要求1、18或19所述的方法，其中在没有针对成熟肌管进行纯化或选择的情况下，表现出所述两种或更多种特征的成熟肌管构成培养物的至少60％，并且每个肌管包含至少20个细胞核。


21.根据权利要求1-20中任一项所述的方法，其中所述一种或多种为了促进成熟肌管产生而特别选择的化合物包括一种或多种Chk1抑制剂。


22.根据权利要求21所述的方法，其中所述一种或多种Chk1抑制剂包括CHIR-124。


23.根据权利要求1-20中任一项所述的方法，其中所述一种或多种为了促进成熟肌管产生而特别选择的化合物选自：mTOR抑制剂、MEK抑制剂、Raf抑制剂、GPR119激动剂、聚ADP-核糖聚合酶(PARP)抑制剂、S1P1激动剂和mAChR激动剂。


24.根据权利要求1-20中任一项所述的方法，其中所述一种或多种为了促进成熟肌管产生而特别选择的化合物选自：雷帕霉素、MEK162、索拉非尼、GSK1292263、TC-G1006、匹鲁卡品、阿托品和talazoparib。


25.根据权利要求1-24中任一项所述的方法，其中所述一个或多个成肌细胞是原代成肌细胞。


26.根据权利要求1-25中任一项所述的方法，其中所述一个或多个成肌细胞是通过在体外分化卫星细胞而生成的。


27.根据权利要求1-26中任一项所述的方法，其中所述成熟肌管是成熟的肌管样细胞。


28.根据权利要求26所述的方法，其中所述卫星细胞是通过在体外分化多能干细胞而生成的。


29.根据权利要求1-28中任一项所述的方法，其进一步包括使卫星细胞与化合物接触以生成所述一个或多个成肌细胞。


30.根据权利要求29所述的方法，其进一步包括使多能干细胞与一种或多种化合物接触以生成所述卫星细胞。


31.根据权利要求30所述的方法，其中所述成熟肌管在使所述多能干细胞与所述一种或多种化合物接触以生成所述卫星细胞起不到30天生成。


32.根据权利要求30所述的方法，其中所述成熟肌管在使所述多能干细胞与所述一种或多种化合物接触以生成所述卫星细胞起25天内生成。


33.根据权利要求30所述的方法，其中所述成熟肌管在使所述多能干细胞与所述一种或多种化合物接触以生成所述卫星细胞起不到30天生成，并且其中所述成熟肌管以每个多能干细胞至少五个成熟肌管的速率生成。


34.根据权利要求30所述的方法...

【专利技术属性】
技术研发人员：乌利·施密特，安娜贝尔·德拉加尔萨，亚历山大·基谢廖夫，
申请(专利权)人：索尼克马斯特有限公司，
类型：发明
国别省市：英属维尔京群岛;VG