针对MADCAM的抗体制造技术

本公开内容涉及抗体(包括人抗体)及其抗原结合部分，其与MAdCAM(优选人MAdCAM)特异性结合并具有抑制MAdCAM的功能。本公开内容还涉及人抗MAdCAM抗体及其抗原结合部分。本公开内容还涉及抗体，其是嵌合、双特异性、衍生化、单链抗体或融合蛋白的部分。本公开内容还涉及衍生自人抗MAdCAM抗体的分离的重链和轻链免疫球蛋白以及编码此类免疫球蛋白的核酸分子。本公开内容还涉及制备人抗MAdCAM抗体的方法、包含这些抗体的组合物以及使用该抗体和组合物进行诊断和治疗的方法。本公开内容还提供了使用编码包含人抗MAdCAM抗体的重链和/或轻链免疫球蛋白分子的核酸分子的基因治疗方法。本公开内容还涉及包含本公开内容的核酸分子的转基因动物或植物。

Antibodies against MAdCAM

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】针对MADCAM的抗体相关申请的交叉引用本申请要求2017年7月14日提交的U.S.S.N.62/532,809的利益和优先权，其内容整体并入本文。序列表的通过引用并入于2017年7月14日创建的大小为197KB的文本文件名“SHR-1258A_ST25.txt”的内容通过引用整体并入本文。专利技术背景粘膜地址素细胞粘附分子(MAdCAM)是细胞粘附受体的免疫球蛋白超家族的成员。淋巴细胞归巢对胃肠道的专门淋巴组织和粘膜部位的选择性由MAdCAM的内皮表达决定(Berlin,C.等人,Cell,80:413-422(1994)；Berlin,C.等人,Cell,74:185-195(1993)；和Erle,D.J.等人,J.Immunol.,153:517-528(1994))。MAdCAM独特地表达在有组织的肠淋巴组织(例如Peyer斑块和肠系膜淋巴结)的高内皮小静脉的细胞表面上(Streeter等人,Nature,331:41-6(1988)；Nakache等人,Nature,337:179-81(1989)；Briskin等人,Am.J.Pathol.151-97-110(1997))，但也存在于其他淋巴器官(例如胰腺、胆囊和脾小静脉以及脾脏白髓的边缘窦)中(Briskin等人(1997)，同上；Kraal等人,Am.J.Path.,147:763-771(1995))。尽管MAdCAM在肠道免疫监视中起着生理作用，但它似乎在慢性胃肠道炎症的条件下促进炎性肠病中过多的淋巴细胞外渗。TNFα和其他促炎细胞因子增加内皮MAdCAM的表达，并且在克罗恩病和溃疡性结肠炎患者的活检标本中，在炎症部位存在MAdCAM表达的约2-3倍的病灶增加(Briskin等人(1997),Souza等人,Gut,45:856-63(1999)；Arihiro等人,PatholInt.,52:367-74(2002))。在结肠炎的实验模型中已经观察到类似的表达水平升高的模式(Hesterberg等人,Gastroenterology,111:1373-1380(1997)；Picarella等人,J.Immunol.,158:2099-2106(1997)；Connor等人,JLeukocBiol.,65:349-55(1999)；Kato等人,JPharmacolExpTher.,295:183-9(2000)；Hokari等人,ClinExpImmunol.,26:259-65(2001)；Shigematsu等人,AmJPhysiolGastrointestLiverPhysiol.,281:G1309-15(2001))。在炎性病况的其他临床前模型中，例如胰岛素依赖性糖尿病(Yang等人，Diabetes,46:1542-7(1997)；等人,JImmunol.,160:6018-25(1998))、移植物抗宿主病(Fujisaki等人,ScandJGastroenterol.,38:437-42(2003),Murai等人,NatImmunol.,4:154-60(2003))、慢性肝病(Hillan等人,Liver,19:509-18(1999)；Grant等人,Hepatology,33:1065-72(2001))、炎性脑病(Stalder等人,AmJPathol.,153:767-83(1998)；Kanawar等人,ImmunolCellBiol.,78:641-5(2000))和胃炎(Barrett等人,JLeukocBiol.,67:169-73(2000)；Hatanaka等人,ClinExpImmunol.,130:183-9(2002))，在疾病的发病机理中还存在胎儿MAdCAM表达的唤醒和活化的α4β7+淋巴细胞的参与。在这些炎症模型以及半抗原介导的(例如TNBS、DSS等)或过继转移(CD4+CD45Rb高)小鼠结肠炎模型中，大鼠抗小鼠MAdCAM单克隆抗体(mAb)(MECA-367，其阻断α4β7+淋巴细胞与MAdCAM的结合)减少淋巴细胞募集、组织外渗、炎症和疾病严重程度。还已经报道了针对人MAdCAM的小鼠单克隆抗体(mAb)(参见例如WO96/24673和WO99/58573)。鉴于MAdCAM在炎性肠病(IBD)和与胃肠道或其他组织相关的其他炎性疾病中的作用，需要抑制α4β7结合和MAdCAM介导的白细胞募集的手段。还期望具有这样的治疗手段，其具有有利的性质，包括但不限于患者中不存在与其他药物的不想要的相互作用以及有利的理化性质，例如人中的pK/pD值、溶解度、稳定性、保质期和体内半衰期。治疗性蛋白质例如抗体将有利地不含不需要的翻译后修饰或聚集体形成。因此，迫切需要治疗性抗MAdCAM抗体。专利技术概述本文提供了特异性结合MAdCAM的分离的抗体或所述抗体的抗原结合部分，其中至少所述抗体的CDR序列是人CDR序列。在实施方案中，抗体是人抗体，优选是用作MAdCAM拮抗剂的抗体。还提供了包含所述抗体或部分的组合物。本公开内容还提供了一种组合物，其包含所述抗MAdCAM拮抗剂抗体的重链和/或轻链或其可变区或其他抗原结合部分或编码上述任何一种的核酸分子和药学上可接受的载体。本专利技术的组合物可以进一步包含另一种成分，例如治疗剂或诊断剂。本专利技术还提供了诊断和治疗方法。本公开内容进一步提供了分离的细胞系，其产生所述抗MAdCAM抗体或其抗原结合部分。本公开内容还提供了编码所述抗MAdCAM抗体的重链和/或轻链或其可变区或其抗原结合部分的核酸分子。本公开内容提供了包含所述核酸分子的载体和宿主细胞，以及重组产生由所述核酸分子编码的多肽的方法。还提供了表达所述抗MAdCAM抗体的重链和/或轻链或其抗原结合部分的非人转基因动物或植物。在实施方案中，提供了与粘膜地址素细胞粘附分子(MAdCAM)特异性结合的人单克隆抗体或其抗原结合部分。在实施方案中，人单克隆抗体或抗原结合部分具有以下特性中的至少一种：(a)与人细胞结合；(b)相对于VCAM或纤连蛋白，对MAdCAM具有至少100倍的选择性；(c)以3×10-10M或更小的Kd结合人MAdCAM；或(d)抑制表达α4β7的细胞与人MAdCAM的结合；(e)抑制淋巴细胞向胃肠道淋巴组织的募集。在实施方案中，人单克隆抗体或抗原结合部分以3×10-10M或更小的Kd结合人MAdCAM，并抑制α4β7与人MAdCAM的结合。在实施方案中，重链包含与SEQIDNO:148至少80％、85％或90％相同的氨基酸序列。在实施方案中，重链包含与SEQIDNO:148相同的氨基酸序列。在实施方案中，与SEQIDNO:148相比，重链包含1至25个氨基酸取代。在实施方案中，与SEQIDNO:148相比，重链包含1至10个氨基酸取代。在实施方案中，轻链包含与SEQIDNO:150至少80％、85％或90％相同的氨基酸序列。在实施方案中，轻链包含与SEQIDNO:1本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种人单克隆抗体或其抗原结合部分，其特异性结合粘膜地址素细胞粘附分子(MAdCAM)。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20170714 US 62/532,8091.一种人单克隆抗体或其抗原结合部分，其特异性结合粘膜地址素细胞粘附分子(MAdCAM)。


2.根据权利要求1所述的人单克隆抗体或抗原结合部分，其中所述抗体或部分具有以下特性的至少一种：
(a)与人细胞结合；
(b)相对于VCAM或纤连蛋白，对MAdCAM具有至少100倍的选择性；
(c)以3×10-10M或更小的Kd结合人MAdCAM；或
(d)抑制表达α4β7的细胞与人MAdCAM的结合，
(e)抑制淋巴细胞向胃肠道淋巴组织的募集。


3.根据权利要求2所述的人单克隆抗体或抗原结合部分，其中所述抗体或部分以3×10-10M或更小的Kd结合人MAdCAM，并抑制α4β7与人MAdCAM的结合。


4.根据权利要求1-3中任一项所述的人单克隆抗体，其中重链包含与SEQIDNO:148至少80％、85％或90％相同的氨基酸序列。


5.根据权利要求4所述的人单克隆抗体，其中重链包含与SEQIDNO:148相同的氨基酸序列。


6.根据权利要求4所述的人单克隆抗体，其中与SEQIDNO:148相比，重链包含1至25个氨基酸取代。


7.根据权利要求6所述的人单克隆抗体，其中与SEQIDNO:148相比，重链包含1至10个氨基酸取代。


8.根据权利要求1-7中任一项所述的人单克隆抗体，其中轻链包含与SEQIDNO:150至少80％、85％或90％相同的氨基酸序列。


9.根据权利要求8所述的人单克隆抗体，其中轻链包含与SEQIDNO:150相同的氨基酸序列。


10.根据权利要求8所述的人单克隆抗体，其中与SEQIDNO:150相比，轻链包含1至25个氨基酸取代。


11.根据权利要求10所述的人单克隆抗体，其中与SEQIDNO:150相比，轻链包含1至10个氨基酸取代。


12.根据权利要求1-3中任一项所述的人单克隆抗体，其中重链包含与SEQIDNO:148至少80％、85％或90％相同的氨基酸序列，并且轻链包含与SEQIDNO:150至少80％、85％或90％相同的氨基酸序列。


13.根据权利要求12所述的人单克隆抗体，其中重链包含与SEQIDNO:148相同的氨基酸序列，并且轻链包含与SEQIDNO:150相同的氨基酸序列。


14.一种核酸序列，其编码根据权利要求4-13中任一项所述的氨基酸序列。


15.一种细胞，其产生根据权利要求1-14中任一项所述的人单克隆抗体。


16.一种细胞，其包含根据权利要求14所述的核酸序列。


17.一种杂交瘤细胞系，其产生根据权利要求1所述的人单克隆抗体，其中所述杂交瘤选自1.7.2(ECACC登录号03090901)、1.8.2(ECACC登录号03090902)、6.14.2(ECACC登录号03090903)、6.22.2(ECACC登录号03090904)、6.34.2(ECACC登录号03090905)、6.67.1(ECACC登录号03090906)、6.73.2(ECACC登录号(03090907)、6.77.1(ECACC编号03090908)、7.16.6(ECACC编号03090909)、7.20.5(ECACC编号03090910)、7.26.4(ECACC编号03090911)和9.8.2(ECACC登录号03090912)。


18.由根据权利要求17所述的杂交瘤细胞系产生的人单克隆抗体或所述单克隆抗体的抗原结合部分。


19.根据权利要求18所述的人单克隆抗体，其中重链C末端赖氨酸被切割。


20.根据权利要求1或18所述的人单克隆抗体或其抗原结合部分，其中所述抗体或抗原结合部分抑制人MAdCAM与α4β7的结合，并且其中所述抗体或其部分具有以下特性的至少一种：
(a)与参考抗体交叉竞争结合MAdCAM；
(b)与参考抗体竞争结合MAdCAM；
(c)与参考抗体结合相同的MAdCAM表位；
(d)以与参考抗体基本上相同的Kd结合MAdCAM；
(e)以与参考抗体基本上相同的解离速率结合MAdCAM；
其中参考抗体选自：单克隆抗体1.7.2、单克隆抗体1.8.2、单克隆抗体6.14.2、单克隆抗体6.22.2、单克隆抗体6.34.2、单克隆抗体6.67.1、单克隆抗体6.73.2、单克隆抗体6.77.1、单克隆抗体7.16.6、单克隆抗体7.20.5、单克隆抗体7.26.4、单克隆抗体9.8.2、X481.2单克隆抗体、单克隆抗体6.22.2-mod、单克隆抗体6.34.2-mod、单克隆抗体6.67.1-mod、单克隆抗体6.77.1-mod和单克隆抗体7.26.4-mod。


21.一种特异性结合MAdCAM的单克隆抗体，其中所述抗体选自：
(a)一种抗体，其包含SEQIDNO:2和SEQIDNO:4所示的氨基酸序列，并且没有信号序列；
(b)一种抗体，其包含SEQIDNO:6和SEQIDNO:8所示的氨基酸序列，并且没有信号序列；
(c)一种抗体，其包含SEQIDNO:10和SEQIDNO:12所示的氨基酸序列，并且没有信号序列；
(d)一种抗体，其包含SEQIDNO:14和SEQIDNO:16所示的氨基酸序列，并且没有信号序列；
(e)一种抗体，其包含SEQIDNO:18和SEQIDNO:20所示的氨基酸序列，并且没有信号序列；
(f)一种抗体，其包含SEQIDNO:22和SEQIDNO:24所示的氨基酸序列，并且没有信号序列；
(g)一种抗体，其包含SEQIDNO:26和SEQIDNO:28所示的氨基酸序列，并且没有信号序列；
(h)一种抗体，其包含SEQIDNO:30和SEQIDNO:32所示的氨基酸序列，并且没有信号序列；
(i)一种抗体，其包含SEQIDNO:34和SEQIDNO:36所示的氨基酸序列，并且没有信号序列；
(j)一种抗体，其包含SEQIDNO:38和SEQIDNO:40所示的氨基酸序列，并且没有信号序列；
(k)一种抗体，其包含SEQIDNO:42和SEQIDNO:44所示的氨基酸序列，并且没有信号序列；
(l)一种抗体，其包含SEQIDNO:46和SEQIDNO:48所示的氨基酸序列，并且没有信号序列；
(m)一种抗体，其包含SEQIDNO:52和SEQIDNO:54所示的氨基酸序列，并且没有信号序列；
(n)一种抗体，其包含SEQIDNO:56和SEQIDNO:58所示的氨基酸序列，并且没有信号序列；
(o)一种抗体，其包含SEQIDNO:60和SEQIDNO:62所示的氨基酸序列，并且没有信号序列；
(p)一种抗体，其包含SEQIDNO:64和SEQIDNO:66所示的氨基酸序列，并且没有信号序列；和
(q)一种抗体，其包含SEQIDNO:42和SEQIDNO:68所示的氨基酸序列，并且没有信号序列；
(r)一种抗体，其包含SEQIDNO:148和SEQIDNO:150所示的氨基酸序列，并且没有信号序列。


22.一种单克隆抗体或其抗原结合部分，其中所述抗体或其部分的重链包含选自1.7.2、1.8.2、6.14.2、6.22.2、6.34.2、6.67.1、6.73.2、6.77.1、7.16.6、7.20.5、7.26.4、9.8.2、X481.2、6.22.2-mod、6.34.2-mod、6.67.1-mod、6.77.1-mod和7.26.4-mod的单克隆抗体的重链CDR1、CDR2和CDR3，或其中轻链包含选自1.7.2、1.8.2、6.14.2、6.22.2、6.34.2、6.67.1、6.73.2、6.77.1、7.16.6、7.20.5、7.26.4、9.8.2、X481.2、6.22.2-mod、6.34.2-mod、6.67.1-mod、6.77.1-mod和7.26.4-mod的单克隆抗体的轻链CDR1、CDR2和CDR3。


23.根据权利要求22所述的单克隆抗体或抗原结合部分，其中所述抗体或部分包含利用人VH1-18基因、人VH3-15基因、人VH3-21基因、人VH3-23基因、人VH3-30基因、人VH3-33基因或人VH4-4基因的重链。


24.根据权利要求23所述的单克隆抗体或其抗原结合部分，其中所述抗体或部分包含利用人VKA2基因、人VKA3基因、人VKA26基因、人VKB3基因、人VKO12基因或人VKO18基因的轻链。


25.根据权利要求1所述的人单克隆抗体或抗原结合部分，其中重链可变区、轻链可变区或两者在氨基酸序列上与选自以下的单克隆抗体的相应区域至少90％相同：单克隆抗体1.7.2、单克隆抗体1.8.2、单克隆抗体6.14.2、单克隆抗体6.22.2、单克隆抗体6.34.2、单克隆抗体6.67.1、单克隆抗体6.73.2、单克隆抗体抗体6.77.1、单克隆抗体7.16.6、单克隆抗体7.20.5、单克隆抗体7.26.4、单克隆抗体9.8.2、单克隆抗体X481.2、单克隆抗体6.22.2-mod、单克隆抗体6.34.2-mod、单克隆抗体6.67.1-mod、单克隆抗体6.77.1-mod和单克隆抗体7.26.4-mod。


26.一种特异性结合MAdCAM的单克隆抗体或其抗原结合部分，其中：
(a)重链包含选自以下的参考抗体的重链CDR1、CDR2和CDR3氨基酸序列：1.7.2、1.8.2、6.14.2、6.22.2、6.34.2、6.67.1、6.73.2、6.77.1、7.16.6、7.20.5、7.26.4、9.8.2、X481.2、6.22.2-mod、6.34.2-mod、6.67.1-mod、6.77.1-mod和7.26.4-mod
(b)轻链包含选自以下的参考抗体的轻链CDR1、CDR2和CDR3氨基酸序列：1.7.2、1.8.2、6.14.2、6.22.2、6.34.2、6.67.1、6.73.2、6.77.1、7.16.6、7.20.5、7.26.4、9.8.2、X481.2、6.22.2-mod、6.34.2-mod、6.67.1-mod、6.77.1-mod和7.26.4-mod
(c)所述抗体包含(a)的重链和(b)的轻链；
和
(d)(c)的抗体，其中重链和轻链CDR氨基酸序列选自相同的参考抗体。


27.根据权利要求26所述的单克隆抗体或抗原结合部分，其中所述重链、轻链或两者包含从参考抗体的分别重链、轻链或两者的CDR1的开端至CDR3的末端的氨基酸序列。


28.根据权利要求26所述的单克隆抗体或抗原结合部分，其中所述抗体包含：
(a)包含选自以下的抗体的重链可变区氨基酸序列的重链：1.7.2(SEQIDNO:2)；1.8.2(SEQIDNO:6)；6.14.2(SEQIDNO:10)；6.22.2(SEQIDNO:14)；...

【专利技术属性】
技术研发人员：K·安德森，
申请(专利权)人：辉瑞大药厂，
类型：发明
国别省市：美国;US