一种盐酸替罗非班注射液有关物质的检测方法技术

本发明专利技术属于药物分析领域，涉及一种盐酸替罗非班注射液有关物质的检测方法，具体是用高效液相色谱法进行检测，固定相是十八烷基键合硅胶为填料的色谱柱，以pH为2.0‑3.0的缓冲溶液为流动相A，以有机溶剂为流动相B，检测波长为222～240nm。本发明专利技术的检测方法可以有效的检测盐酸替罗非班注射液有关物质，专属性强，灵敏度高，适用盐酸替罗非班注射液的有关物质检测。

A method for the determination of related substances in tirofiban hydrochloride injection

【技术实现步骤摘要】
一种盐酸替罗非班注射液有关物质的检测方法
本专利技术属于药物分析领域，涉及一种盐酸替罗非班注射液有关物质的检测方法。
技术介绍
盐酸替罗非班由美国Merck公司研制开发，于1998年5月首次在美国上市，目前已在众多国家上市。盐酸替罗非班是一种高效、高选择性的GPⅡb/Ⅲa受体拮抗剂，用于治疗不稳定型心绞痛或非Q波心肌梗塞病人，预防心脏缺血事件，同时也适用于冠脉缺血综合征病人进行冠脉血管成形术或冠脉内斑块切除术，以预防与经治冠脉突然闭塞有关的心脏缺血并发症。杂质是影响药品质量的一个重要因素，在药品质量研究过程中，必须确认杂质的结构和控制杂质的含量。在药品申报注册中，根据FDA及NMPA的要求必须对成品中的杂质进行严格的控制，对出现在最终产品的杂质必须进行结构分析及质量控制，其来源和去除需要在注册文件中进行描述。现有检测技术中，国家标准(标准号：YBH08272009)中所述的方法是以辛烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以0.2％辛烷磺酸钠溶液(磷酸调节pH至3.0)和乙腈为流动相进行梯度洗脱，检测波长为227nm，注入适当浓度的供试品溶液和对照溶液进行分析检测，按不加校正因子的主成分自身对照法计算有关物质的含量。该方法所用辛烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱，保留行为弱，不利于有关物质的分离，而且所用方法为梯度方法，在日常检测过程中基线易漂移，而且比较容易受到所用流动相纯度影响，如乙腈、甲醇等，可能引入不可预见的鬼峰，干扰有关物质的检测。另一现有检测技术，进口药品注册标准(标准号：JX20080265)中所述的方法是以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以0.01％磷酸二氢钾溶液(磷酸调节pH值至2.3)和乙腈(78:22)为流动相，流速为1.0ml/min；检测波长为227nm；柱温为35℃，等度洗脱。该方法要求主峰的拖尾因子不得过2.0，理论塔板数不小于7500，按照该方法筛选时，选用不同品牌的十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱，主峰的保留时间很长，峰拖尾严重，不能满足系统要求。综上，提供一种简便、专属性好、准确度高的适用盐酸替罗非班注射液的有关物质检测方法是非常必要的。
技术实现思路
针对现有技术存在的问题，本专利技术人通过多次试验，筛选不同的色谱柱以及组合其他不同的色谱条件，成功开发出一种更适合于检测盐酸替罗非班注射液有关物质的方法。本专利技术提供了一种盐酸替罗非班注射液有关物质检测的高效液相(HPLC)质量控制方法，该方法较现有技术公开的方法更具有分离度更高，检出的杂质更多，专属性强，灵敏度高，准确性好。本专利技术提供一种盐酸替罗非班注射液有关物质检测方法。具体的，本专利技术采用如下技术方案：一种盐酸替罗非班注射液有关物质检测方法，采用HPLC法进行检测，色谱条件如下：以十八烷基硅烷键合硅胶为色谱柱；流动相A为0.01mol/L磷酸二氢钾溶液(磷酸调节pH至2.5)；流动相B为乙腈；等度洗脱条件如下：所述缓冲液中的无机盐为钾盐中的一种或多种，优选为磷酸二氢钾。所述缓冲液中无机盐的浓度为0.005mol/L～0.03mol/L，优选为0.005mol/L～0.015mol/L，更优选0.01mol/L。所述缓冲液pH的范围为2.0～3.0，优选为2.5。所述流动相B中有机溶剂为甲醇、乙腈中的一种或多种，更优选为乙腈。所述流动相为0.01mol/L磷酸二氢钾溶液-乙腈的混合溶液，二者体积比为68:32～75:25，优选70:30。等度洗脱条件如下：更优选的，所用柱温为30℃～40℃，优选为35℃。所用色谱柱为C18，ApolloC18和AgelaVenusilMPC18，优选为AgelaVenusilMPC18，规格为4.6mm×250mm，5μm。所述流动相的流速为0.8ml/min～1.2ml/min，优选为1.0ml/min。进样量为20～50μL，优选为50μL。检测波长为222nm～240nm，更优选检测波长为227nm。进一步地，可将待测样品用溶剂稀释制成待测样品溶液，以浓度为25μg/ml。本专利技术方法可对存在的杂质进行有效分离并定量测定，从而有效控制产品的质量，专属性强，灵敏度高，准确度良好。附图说明图1供试品溶液高效液相色谱图(色谱柱AgelaVenusilMPC184.6×250mm5μm)图2供试品溶液高效液相色谱图(色谱柱ApolloC184.6×250mm5μm)图3系统适用性试验溶液高效液相色谱图图4空白溶液高效液相色谱图图5供试品溶液高效液相色谱图图6供试品溶液(氧化破坏)高效液相色谱图图7自制制剂供试品溶液高效液相色谱图图8参比制剂供试品溶液高效液相色谱图具体实施方式以下是本专利技术的具体实施例，对本专利技术的技术方案做进一步作描述，但是本专利技术的保护范围并不限于这些实施例。本专利技术所使用的试剂均可以从市场上购得或者可以通过本专利技术所描述的方法制备而得。盐酸替罗非班对照品可在中国食品药品检定研究院购买。实施例1盐酸替罗非班注射液及制备制备方法为先将枸橼酸、枸橼酸钠溶于10～50％的水中制备成枸橼酸-枸橼酸钠缓冲液，然后将盐酸替罗非班、海藻酸钠溶于水中，两液混合；调节pH，然后过滤、分装、灭菌、灯检、包装即得。实施例2(对比实验1)采用进口药品注册标准(标准号：JX20080265)中有关物质检测方法，选择不同品牌的色谱柱测定实施例1所得盐酸替罗非班注射液，记录色谱图，如图1、图2。实施例3专属性试验系统适用性试验溶液：取盐酸替罗非班对照品与杂质A对照品适量，分别精密称定，加水稀释溶解并制成每1ml中约含替罗非班25μg，杂质A0.5μg的混合溶液，作为系统适用性试验溶液。空白溶液：量取空白辅料溶液5ml置25ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液即得。取实施例1中的样品适量，用水稀释制成每1ml中约含替罗非班25μg的溶液，作为供试品溶液。供试品溶液(氧化破坏)：精密量取样品溶液2ml，置20ml量瓶中，加10％的双氧水溶液2ml，混匀，95℃水浴加热30分钟，冷却，用水稀释至刻度，摇匀，滤过，即得。色谱条件：仪器：Waterse2695检测器：DAD检测器，检测波长为227nm色谱柱：AgelaVenusilMPC18，规格为4.6mm×250mm，5μm流速：1.0ml/min运行时间：40min柱温：35℃进样量：50μl流动相：0.01mol/L的磷酸二氢钾溶液(磷酸调节pH2.5)：乙腈＝70:30，等度洗脱分别注入系统适用性试验溶液、空白溶液、供试品溶液、供试品溶液(氧化破坏)测定，记录色谱图，检测图谱如图3、图4、图5、图6。实施例4精密度试本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种盐酸替罗非班注射液有关物质的检测方法，其特征在于，所述方法包括：/n采用HPLC法进行检测，色谱条件如下：以C18为色谱柱；/n所述高效液相色谱的流动相由流动相A和流动相B组成，流动相A为磷酸盐缓冲液，流动相B为乙腈和/或甲醇；/n其中，磷酸盐缓冲液中无机盐的浓度为0.005mol/L～0.03mol/L，并用磷酸调节pH为2.0～3.0，/n所述流动相A和流动相B的体积比在68:32～75:25之间；/n依次进样，检测波长为222nm～240nm；柱温为30℃～40℃。/n

【技术特征摘要】
1.一种盐酸替罗非班注射液有关物质的检测方法，其特征在于，所述方法包括：
采用HPLC法进行检测，色谱条件如下：以C18为色谱柱；
所述高效液相色谱的流动相由流动相A和流动相B组成，流动相A为磷酸盐缓冲液，流动相B为乙腈和/或甲醇；
其中，磷酸盐缓冲液中无机盐的浓度为0.005mol/L～0.03mol/L，并用磷酸调节pH为2.0～3.0，
所述流动相A和流动相B的体积比在68:32～75:25之间；
依次进样，检测波长为222nm～240nm；柱温为30℃～40℃。


2.根据权利要求1所述的盐酸替罗非班注射液有关物质的检测方法，其特征在于所述C18色谱柱为ApolloC18和AgelaVenusilMPC18，优选AgelaVenusilMPC18。


3.根据权利要求1所述的盐酸替罗非班注射液有关物质的检测方法，其特征在于所述磷酸盐缓冲液中的无机盐为钾盐中的一种或多种，优选为磷酸二氢钾。


4.根据权利要求1所述的盐酸替罗非班注射液有关物质的检测方法，其特征...

【专利技术属性】
技术研发人员：张贵民，崔芹芹，
申请(专利权)人：鲁南制药集团股份有限公司，
类型：发明
国别省市：山东;37