一种拮抗枯萎病和促生长的芽孢杆菌及其应用制造技术

本发明专利技术提供了一种拮抗枯萎病和促生长的芽孢杆菌及其应用，该菌株为简单芽孢杆菌FJAT‑47158，学名为Bacillus simplex FJAT‑47158，保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号CGMCC NO.15946。本发明专利技术的芽孢杆菌不仅可以抑制尖孢镰刀菌、地毯草黄单胞菌等植物病原菌，还可以提高植物种子的活力，促进种子生长，可用于枯萎病的防治，是一种对环境友好、经济有效的防治病害的生防菌。

An Antagonistic Bacillus against Fusarium oxysporum and its application

【技术实现步骤摘要】
一种拮抗枯萎病和促生长的芽孢杆菌及其应用
本专利技术属于微生物
，具体涉及一株拮抗枯萎病和促生长的芽孢杆菌菌株。
技术介绍
枯萎病是一种系统感染病害，是来蒙、大豆、小麦、番茄、棉花、草莓等植物的常见土传病害，在美国、加拿大、澳大利亚、中国等是一个日益突出的问题。植株由于枯萎病，叶片变小，缺少光泽，枝条矮化，果实瘦小，或叶片变黄萎蔫，严重时植株逐渐枯死。枯萎病的主要病原种群是尖孢镰刀菌Fusariumoxysporum和腐皮镰刀菌Fusariumsolani，防治的方法有化学试剂、真菌剂、生物防治、植物性治疗药物、优化施肥等，而采用生防菌控制枯萎病是综合防治的一条重要措施。多种真菌、细菌和一些放线菌都可应用于真菌病害的生物防治，拮抗性细菌有短短芽孢杆菌、绿叶假单胞菌、贝莱斯芽孢杆菌等。细菌在植物生物防治中的应用研究已广泛开展，并取得良好的应用效果。但是，这些细菌对植物枯萎病却没有很好的防治效果。因此，筛选到防效好、适应性广的生防菌是植物枯萎病生物防治工作面临的关键问题。如果在植物生长早期就能使用的生防菌，可以对植物病原菌进行及早预防，减少枯萎病等植物病害的发生，提高农作物产量。
技术实现思路
为此，需要提供一种拮抗枯萎病的生防菌，解决枯萎病的生物防治问题。为实现上述目的，专利技术人提供了如下技术方案：一种拮抗枯萎病和促生长的芽孢杆菌，其特征在于：所述的芽孢杆菌为简单芽孢杆菌FJAT-47158，学名为BacillussimplexFJAT-47158，保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号CGMCCNO.15946，保藏日期为2018年6月19日，保藏地址为中国北京市中国科学院微生物研究所。芽孢杆菌FJAT-47158的菌落形态为：圆形，淡黄色，边缘整齐，表面褶皱，不透明，粘稠的中等大小菌落。芽孢杆菌FJAT-47158对尖孢镰刀菌有较强的拮抗作用，包括番茄寄主尖孢镰刀菌FJAT-30512、香蕉寄主尖孢镰刀菌FJAT-370和西瓜寄主尖孢镰刀菌FJAT-30265，对地毯草黄单胞菌FJAT-10151也有很强的拮抗作用。进一步的，所述的拮抗枯萎病和促生长的芽孢杆菌在拮抗植物病原菌中的应用。具体的，将所述的芽孢杆菌制成抑菌溶液，采用灌根法浇灌于植物幼苗根系，或者喷洒于植物叶片或果实上。所述的抑菌溶液的制备方法是将所述的芽孢杆菌菌株接种到固体培养基平板上，挑取一菌环单菌落接种到相应的液体培养基中，25-35℃恒温培养36-60h；对芽孢杆菌发酵液进行离心，弃菌体，取上清，即可得到抑菌溶液。进一步的，所述的拮抗枯萎病和促生长的芽孢杆菌在促进植物种子生长中的应用。具体的，用所述的芽孢杆菌的菌悬液浸种6-8h，用湿纱布包盖于25-28℃下催芽2-3天，有1/2-2/3种子露白时，即可播种，基质可用育苗土或育苗块。所述的芽孢杆菌的菌悬液的制备方法是将芽孢杆菌菌株接种到固体培养基平板上，再挑取一菌环单菌落接种到相应的液体培养基中，25-35℃恒温培养36-60h，将培养后的菌液稀释至菌浓为1-4×105cfu·mL-1即可。进一步的，所述的固体培养基为LB固体培养基，相应的液体培养基为LB液体培养基。本专利技术的有益效果是：(1)从西藏申扎县巴拥附近草原土壤样品筛选到的芽孢杆菌FJAT-47158，对枯萎病主要病原菌镰刀菌具有很强的抑制效果，可专门用于防治枯萎病。(2)芽孢杆菌FJAT-47158是枯萎病主要病原菌的拮抗菌，是一种对环境友好、经济有效的防治病害的生防菌。它能产生具有较强抗逆性的内生孢子(芽孢)，能耐盐、耐酸、耐高温且易于保存和运输，有利于快速实现商品化生产。(3)芽孢杆菌FJAT-47158除了有显著的抑菌效果外，还具有明显促进植物生根长茎的作用，可缩短种子萌发时间，在植物种子阶段就进行应用，还可及早预防植物病害的发生。附图说明图1为具体实施方式所述的芽孢杆菌FJAT-47158的菌落形态，左图为FJAT-47158菌株在整块平板上的菌落生长状态，右图为左图菌落的局部放大图。图2为具体实施方式所述的芽孢杆菌FJAT-47158的16SrRNA序列鉴定结果的进化树。图3为具体实施方式所述的芽孢杆菌FJAT-47164对绿豆种子萌发的发芽影响。图4为具体实施方式所述的芽孢杆菌FJAT-47164对绿豆种子根长和绿豆芽茎长的影响。图5为具体实施方式所述的绿豆种子生长的盆栽结果。具体实施方式为详细说明技术方案的
技术实现思路
、所实现目的及效果，以下结合具体实施例并配合附图详予说明。实施例1拮抗菌株的筛选1.土样采集与芽孢杆菌分离纯化将西藏申扎县巴拥附近草原土壤样品制成土壤悬浊液，再经过无菌水适当稀释，涂布LB平板(LB：胰蛋白胨10g·L-1，氯化钠10g·L-1，酵母粉5g·L-1，琼脂粉1.5％，pH7.0-7.2)；30℃培养48h，挑取单菌落，甘油保存，作为待测菌株。采用稀释涂板法分离纯化得到了60株菌株作为待测菌株。2.枯萎病生防菌株的筛选(1)对峙法初筛供试菌株，于LB平板上活化，30℃恒温培养48h。尖孢镰刀菌FJAT-30512(陈倩倩,刘波,刘国红,车建美,龚海艳.华重楼根际土芽胞杆菌多样性研究[J].热带农业科学,2015,35(12):103-107+112.)、FJAT-370(陈梅春等.地衣芽孢杆菌FJAT-4脂肽结构鉴定及其对尖孢镰刀菌的抑制作用.微生物学报,2017,57(12).)、FJAT-30265(肖荣凤,刘波,朱育菁,等.尖孢镰刀菌磷脂脂肪酸的遗传多样性分析[J].植物保护学报,2017,44(5):763-770.)，保藏在福建省农业科学院农业生物资源研究所(刘国红等.芽胞杆菌分类与应用研究进展.微生物学通报，2017，44(4):949-958)。尖孢镰刀菌FJAT-30512、FJAT-370、FJAT-30265于马铃薯葡萄糖琼脂培养基(PDA：马铃薯200.0g·L-1，蔗糖20.0g·L-1，琼脂15g·L-1)上活化，28℃恒温培养48h。将活化后的尖孢镰刀菌接种于PDA平板上，28℃培养120h至菌丝长满整个平板，然后在菌饼上打下直径9mm的小菌圈，置于PDA平板的正中间，再在距离小菌圈外围22mm的地方划长为40mm线接种供试菌株。28℃恒温培养120h，观察菌株对各尖孢镰刀菌的抑制效果。从西藏地区分离纯化得到的60株菌株，进行平板对峙法初筛获得了1株对不同寄主尖孢镰刀真菌FJAT-30512、FJAT-370和FJAT-30265均有拮抗作用的菌株FJAT-47158。(2)抑菌圈法复筛将供试菌株FJAT-47582接种到LB平板上，再挑取1菌环单菌落接到10mLLB液体培养基(胰蛋白胨10g·L-1，氯化钠10g·L-1，酵母粉5g·L-1，pH7.0-7.2本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种拮抗枯萎病和促生长的芽孢杆菌，其特征在于：所述的芽孢杆菌为简单芽孢杆菌FJAT-47158，学名为Bacillus simplex FJAT-47158，保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号CGMCC NO.15946，保藏日期为2018年6月19日，保藏地址为中国北京市中国科学院微生物研究所。/n

【技术特征摘要】
1.一种拮抗枯萎病和促生长的芽孢杆菌，其特征在于：所述的芽孢杆菌为简单芽孢杆菌FJAT-47158，学名为BacillussimplexFJAT-47158，保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号CGMCCNO.15946，保藏日期为2018年6月19日，保藏地址为中国北京市中国科学院微生物研究所。


2.一种如权利要求1所述的拮抗枯萎病和促生长的芽孢杆菌在植物病原菌防治中的应用。


3.根据权利要求2所述的拮抗枯萎病和促生长的芽孢杆菌在植物病原菌防治中的应用，其特征在于：将所述的芽孢杆菌制成抑菌溶液，采用灌根法浇灌于植物幼苗根系，或者喷洒于植物叶片或果实上。


4.根据权利要求3所述的拮抗枯萎病和促生长的芽孢杆菌在植物病原菌防治中的应用，其特征在于：所述的抑菌溶液的制备方法是将所述的芽孢杆菌菌株接种到固体培养...

【专利技术属性】
技术研发人员：朱育菁，郑梅霞，陈峥，刘波，许炼，潘志针，肖荣凤，邓文琼，李慧敏，
申请(专利权)人：福建省农业科学院农业生物资源研究所，
类型：发明
国别省市：福建;35