一种猪流行性腹泻病毒IgA抗体ELISA试剂盒的制备及应用制造技术

本发明专利技术提供了一种猪流行性腹泻病毒IgA抗体ELISA检测试剂盒，其中，该试剂盒包括包被了猪流行性腹泻病毒抗体‑抗原复合物的支持介质，该猪流行性腹泻病毒抗体‑抗原复合物为猪流行性腹泻病毒IgG单克隆抗体‑灭活抗原复合物，酶标记的抗猪IgA二抗，以及用于对猪IgA和该猪流行性腹泻病毒抗体‑抗原复合物抗原抗体反应进行检测的检测试剂、阳性对照、阴性对照。本发明专利技术的试剂盒灵敏度高，能对乳汁、血清、唾液、肛拭子、粪便样品多中靶标样品就进行准确检测。

Preparation and application of an ELISA kit for IgA antibody of porcine epidemic diarrhea virus

【技术实现步骤摘要】
一种猪流行性腹泻病毒IgA抗体ELISA试剂盒的制备及应用
本专利技术涉及一种猪流行性腹泻病毒IgA抗体ELISA试剂盒的制备及应用，属于免疫测定法领域。
技术介绍
猪流行性腹泻(Porcineepidemicdiarrhea，PED)是由猪流行性腹泻病毒(PEDVirus，PEDV)引起猪的一种高度接触性、病毒性肠道传染病，以水样腹泻、呕吐、脱水、食欲下降及哺乳仔猪的高死亡率为特征。该病对各种年龄阶段的猪均易感，哺乳仔猪、架子猪、育肥猪的发病率达100％，尤以哺乳仔猪最为严重，病死率达100％。实践中，血清学检测仍是临床诊断及免疫评价的常用方法。目前PEDV抗体检测技术主要集中在血液中PEDVIgG抗体水平的检测，而临床检测发现，尽管疫苗免疫后血清中存在较高水平的PEDVIgG抗体，猪群仍时常发生PED。因此，传统检测血清中的PEDVIgG抗体水平不能真实反映PEDV疫苗的免疫保护状况。PEDV引起的免疫应答主要以肠道黏膜免疫为主，粘膜免疫系统主要是通过产生分泌型IgA(sIgA)和IgM发挥作用，对于肠道病毒来说，IgA是病原体感染本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种猪流行性腹泻病毒IgA抗体ELISA检测试剂盒，其中，所述试剂盒包括包被了猪流行性腹泻病毒抗体-抗原复合物的支持介质，所述猪流行性腹泻病毒抗体-抗原复合物为猪流行性腹泻病毒IgG单克隆抗体-灭活抗原复合物，酶标记的抗猪IgA二抗，以及用于对猪IgA和所述猪流行性腹泻病毒抗体-抗原复合物抗原抗体反应进行检测的检测试剂、阳性对照、阴性对照；优选地，所述猪流行性腹泻病毒IgG单克隆抗体为8A3A10、PEDV-McAB1或PEDV-McAB2。/n

【技术特征摘要】
1.一种猪流行性腹泻病毒IgA抗体ELISA检测试剂盒，其中，所述试剂盒包括包被了猪流行性腹泻病毒抗体-抗原复合物的支持介质，所述猪流行性腹泻病毒抗体-抗原复合物为猪流行性腹泻病毒IgG单克隆抗体-灭活抗原复合物，酶标记的抗猪IgA二抗，以及用于对猪IgA和所述猪流行性腹泻病毒抗体-抗原复合物抗原抗体反应进行检测的检测试剂、阳性对照、阴性对照；优选地，所述猪流行性腹泻病毒IgG单克隆抗体为8A3A10、PEDV-McAB1或PEDV-McAB2。


2.根据权利要求1所述的试剂盒，其中，所述灭活抗原为CV777株、HN1301株、HN1302株、HN1303株，Iowa18984株、AJ1102株、ZJ08株、LW/L株、SD10株或其培养物的灭活抗原；
所述灭活抗原通过先离心后灭活制备；优选地，所述离心条件为5000～15000转/分钟离心5～30分钟，所述灭活步骤为甲醛灭活、或β-丙内酯灭活，甲醛浓度范围0.05％～0.5％(v/v)，25～37℃静置或摇床50～200转/分钟，灭活时间24～48小时；β-丙内酯(β-PL)BPL灭活，BPL浓度范围0.01％～0.05％，灭活时间8～16小时。


3.根据权利要求2所述的试剂盒，其中，所述猪流行性腹泻病毒IgG单克隆抗体8A3A10包被量为30～1000ng/孔；优选地，所述猪流行性腹泻病毒IgG单克隆抗体8A3A10包被量为50～500ng/孔；更优选地，所述猪流行性腹泻病毒IgG单克隆抗体8A3A10包被量为50～300ng/孔；
所述HN1301株灭活抗原添加量为10～160μg/孔；优选地，所述HN1301株灭活抗原添加量为20～12...

【专利技术属性】
技术研发人员：田克恭，王治平，
申请(专利权)人：洛阳普泰生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：河南;41