一种养血清脑水提浸膏中毛蕊花糖苷的测定方法技术

本发明专利技术涉及一种养血清脑水提浸膏中毛蕊花糖苷的测定方法，所述方法包括以下步骤：1)对照品制备方法：称取毛蕊花糖苷对照品，加甲醇配制成标准对照溶液；2)供试品溶液的制备方法：称取养血清脑水提浸膏，加甲醇溶解，上固相萃取柱，用甲醇溶液洗脱，收集洗脱液，用甲醇定容；3)测定方法：分别取对照品溶液和供试品溶液，注入超高效液相色谱仪，记录色谱图，根据峰面积使用外标法计算供试品溶液毛蕊花糖苷含量，经换算得到养血清脑水提浸膏中毛蕊花糖苷的含量。

A method for the determination of Mullein glycoside in Yangxueqingnao water extract

【技术实现步骤摘要】
一种养血清脑水提浸膏中毛蕊花糖苷的测定方法
本专利技术属于检测分析技术，具体涉及一种养血清脑水提浸膏中毛蕊花糖苷的测定方法。
技术介绍
养血清脑颗粒和养血清脑丸为天士力集团开发的中成药，分别记载于《中国药典》2015年版一部的1281-1282页、1280-1281页。养血清脑颗粒和养血清脑丸在制备过程中，需要对熟地黄、钩藤、鸡血藤、夏枯草、珍珠母、细辛等中药材进行提取，制备成药物提取物浸膏，进而以该浸膏为药物的活性物质制备成养血清脑颗粒和养血清脑丸，所述药物提取物浸膏的制备方法为：熟地黄、钩藤、鸡血藤、夏枯草、珍珠母、细辛六位药材，加水煎煮二次，滤过，滤液浓缩至清膏，加乙醇适量，静置，回收乙醇，浓缩既得。熟地为玄参科植物地黄的块茎经加工炮制而成。通常以酒等为辅料经蒸晒制成，色黑油润，柔软粘腻。熟地的主要功效为滋阴、补血，益精填髓。用于阴虚血少、目昏耳鸣，腰膝酸软，盗汗遗精，内热消渴，眩晕，耳鸣，须发早白。《中国药典》2015年版一部125-126，熟地黄项下明确写明：以毛蕊花糖苷做为主要鉴别成分，其含量不少于0.020％，其检测方法为高效液相色谱法，其中：色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-0.1％醋酸溶液(16：84)为流动相；检测波长为334nm。理论板数按毛蕊花糖苷峰计算应不低于5000。对照品溶液制备：取毛蕊花糖苷对照品适量，精密称定，加流动相制成每lml含10pg的溶液，即得。供试品溶液制备取本品最粗粉约2g，精密称定，置圆底烧瓶中，精密加人甲醇100ml，称定重量，加热回流30分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液50ml，减压回收溶剂近干，残渣用流动相溶解，转移至10ml量瓶中，加流动相至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。熟地黄的化学成分主要是毛蕊花糖苷，该成分也是熟地的主要药效成分，通过测定方法得知，毛蕊花糖苷是熟地黄通过甲醇回流提取获得，是脂溶性成分。养血清脑颗粒和养血清脑丸制备过程中得到养血清脑水提浸膏，它是养血清脑颗粒和养血清脑丸的制剂中间体。养血清脑水提浸膏中毛蕊花糖苷含量只有对照文献中供试品的约五分之一，且是混合提取物，采用《中国药典》2015年版一部中熟地黄的检测方法，各种成分相互干扰，分析时间长，效率较低，无法达到检测目的，为此需要更好的分离纯化方法对毛蕊花糖苷含量进行检测。目前，针对养血清脑水提浸膏的检测，都没有对其中的毛蕊花糖苷进行含量测定的。
技术实现思路
为了提高质量控制能力，针对养血清脑水提浸膏，本专利技术建立了一种养血清脑水提浸膏中毛蕊花糖苷测定方法，并进行了方法学验证，验证结果表明，本专利技术方法优于现有技术，符合含量测定要求。作为养血清脑颗粒和养血清脑丸的一种制剂中间体，为熟地黄、钩藤、鸡血藤、夏枯草、珍珠母、细辛等中药材的浸膏提取物，本专利技术称为养血清脑水提浸膏。本专利技术提供一种养血清脑水提浸膏中毛蕊花糖苷的测定方法，所述方法包括以下步骤：1)对照品制备方法：称取毛蕊花糖苷对照品，加甲醇配制成标准对照溶液；2)供试品溶液的制备方法：称取养血清脑水提浸膏，加甲醇溶解，上固相萃取柱，用甲醇溶液洗脱，收集洗脱液，用甲醇定容；3)测定方法：分别取对照品溶液和供试品溶液，注入超高效液相色谱仪，记录色谱图，根据峰面积使用外标法计算供试品溶液毛蕊花糖苷含量，经换算得到养血清脑水提浸膏中毛蕊花糖苷的含量；其中的色谱条件如下：色谱柱：C18色谱柱，流动相：以0.3-0.4％甲酸水溶液为流动相A，乙腈为流动相B，洗过方法：梯度洗脱，检测波长：300-350nm。其中，步骤1加甲醇配制成每毫升含毛蕊花糖苷为0.002-0.006mg的溶液。其中，步骤2称取养血清脑水提浸膏0.20-0.30g，加15-35％甲醇10ml，溶解。步骤2上固相萃取柱，先用25％甲醇5ml洗涤，弃去，再用40％甲醇溶液5mL洗脱，收集洗脱液，加40％甲醇至5ml。步骤2的固相萃取柱为ProElutC18-U型或Sep-PakVacC18型固相萃取柱；固相萃取柱规格为500mg/6mL。其中，步骤3，分别取对照品溶液和供试品溶液1-10ul，注入超高效液相色谱仪，记录色谱图。优选的，本专利技术所述方法包括以下步骤：1)对照品制备方法：称取毛蕊花糖苷对照品适量，加甲醇配制成每毫升含毛蕊花糖苷为0.002-0.006mg的溶液，既得；2)供试品溶液的制备方法：精密称取养血清脑水提浸膏0.20-0.30g，加15-35％甲醇10ml，超声溶解，摇匀，上至固相萃取柱，用25％甲醇5ml洗涤，弃去，用40％甲醇溶液5mL洗脱，收集洗脱液，加40％甲醇至5ml，摇匀，既得；3)测定方法：分别取对照品溶液和供试品溶液各2ul，注入超高效液相色谱仪，记录色谱图，根据峰面积使用外标法计算供试品溶液毛蕊花糖苷含量，经换算得到养血清脑水提浸膏中毛蕊花糖苷的含量；其中色谱条件如下：C18色谱柱为ACQUITYUPLCHSST3C18色谱柱；梯度洗脱表如下：最优选的，本专利技术所述方法包括以下步骤：1)对照品制备方法：称取毛蕊花糖苷对照品适量，加甲醇配制成每毫升含毛蕊花糖苷为0.004mg的溶液，既得；2)供试品溶液的制备方法：精密称取养血清脑水提浸膏约0.25g，加25％甲醇约10ml，超声溶解，摇匀，上至固相萃取柱，用25％甲醇5ml洗涤，弃去，用40％甲醇溶液5mL洗脱，收集洗脱液，加40％甲醇至5ml，摇匀，既得；3)测定方法：分别取对照品溶液和供试品溶液各2ul，注入超高效液相色谱仪，记录色谱图，根据峰面积使用外标法计算供试品溶液毛蕊花糖苷含量，经换算得到养血清脑水提浸膏中毛蕊花糖苷的含量；色谱条件：C18色谱柱，以0.2％甲酸水溶液为流动相A，乙腈为流动相B，梯度洗脱，检测波长：334nm，梯度洗脱如下：经方法学验证，本测定方法符合含量测定要求，可以用于养血清脑水提浸膏中毛蕊花糖苷的含量测定。本专利技术优选的实验方法、色谱条件和样品前处理方法，是经过筛选得到的。色谱条件采用超高效液相色谱法，流动相等度洗脱，方法简单，提高了分析效率。筛选过程如下：(一)样品前处理方法的筛选样品前处理方法采用了固相萃取技术，通过对固相萃取材料的筛选，能够精确高效的去除干扰成分，同时可以对毛蕊花糖苷进行有效富集，体现了本申请的创造性。1、固相萃取材料和规格筛选：养血清脑水提浸膏由六味中药提取制成，成分非常复杂。同时，熟地在处方中的占比不足10％，毛蕊花糖苷在药材中的含量很低，造成毛蕊花糖苷在养血清脑水提浸膏中的含量极低(约为0.01％)，为含量测定带来了极大地难度。为了去除杂质干扰，对毛蕊花糖苷进行有效富集以便使得检测更为准确，需要采用有效的分离纯化技术将毛蕊花糖苷分离出来。分别采用硅胶键合和高分子聚合物为吸附剂的本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种养血清脑水提浸膏中毛蕊花糖苷的测定方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：/n1)对照品制备方法：称取毛蕊花糖苷对照品，加甲醇配制成标准对照溶液；/n2)供试品溶液的制备方法：称取养血清脑水提浸膏，加甲醇溶解，上固相萃取柱，用甲醇溶液洗脱，收集洗脱液，用甲醇定容；/n3)测定方法：分别取对照品溶液和供试品溶液，注入超高效液相色谱仪，记录色谱图，根据峰面积使用外标法计算供试品溶液毛蕊花糖苷含量，经换算得到养血清脑水提浸膏中毛蕊花糖苷的含量；/n其中的色谱条件如下：色谱柱：C18色谱柱，流动相：以0.3-0.4％甲酸水溶液为流动相A，乙腈为流动相B，洗过方法：梯度洗脱，检测波长：300-350nm。/n

【技术特征摘要】
1.一种养血清脑水提浸膏中毛蕊花糖苷的测定方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：
1)对照品制备方法：称取毛蕊花糖苷对照品，加甲醇配制成标准对照溶液；
2)供试品溶液的制备方法：称取养血清脑水提浸膏，加甲醇溶解，上固相萃取柱，用甲醇溶液洗脱，收集洗脱液，用甲醇定容；
3)测定方法：分别取对照品溶液和供试品溶液，注入超高效液相色谱仪，记录色谱图，根据峰面积使用外标法计算供试品溶液毛蕊花糖苷含量，经换算得到养血清脑水提浸膏中毛蕊花糖苷的含量；
其中的色谱条件如下：色谱柱：C18色谱柱，流动相：以0.3-0.4％甲酸水溶液为流动相A，乙腈为流动相B，洗过方法：梯度洗脱，检测波长：300-350nm。


2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤1对照品制备方法中，加甲醇配制成每毫升含毛蕊花糖苷为0.002-0.006mg的溶液。


3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤2供试品溶液的制备方法中：称取养血清脑水提浸膏0.20-0.30g，加15-35％甲醇10ml，溶解。


4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤2供试品溶液的制备方法中：上固相萃取柱，先用25％甲醇5ml洗涤，弃去，再用40％甲醇溶液5mL洗脱，收集洗脱液，加40％甲醇至5ml。


5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤2供试品溶液的制备方法中：固相萃取柱为ProElutC18-U型或Sep-PakVacC18型固相萃取柱；
固相萃取柱规格为500mg/6mL。


6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤3测定方法，分别取对照品溶液和供试品溶液1-10ul，注入超高效液相色谱仪，记...

【专利技术属性】
技术研发人员：牛涛，陈红，徐波，张学敏，
申请(专利权)人：天津天士力现代中药资源有限公司，
类型：发明
国别省市：天津;12