牙周疾病检测试剂盒及使用方法技术

一种牙周疾病检测试剂盒及使用方法，可透过免疫学方法检测唾液中的白细胞介素‑1β及白细胞介素‑18判断牙周相关疾病，并区别牙周表面软组织及硬组织炎症(即牙龈炎与牙周炎)的发病进展及治疗效果。本发明专利技术提出操作简单且容易判别的试剂盒及检测方法，可突破性的运用科学的方法，对于牙周组织相关炎症的进展程度进行识别，不但为临床提供精确的客观证据，也扩展了自检预防牙周疾病的应用效益。

Periodontal disease detection kit and its application

【技术实现步骤摘要】
牙周疾病检测试剂盒及使用方法
本专利技术涉及一种生物检测领域的试剂盒，特别是一种涉及牙周疾病检测试剂盒及其使用方法。
技术介绍
目前牙科在临床上对于牙周疾病的检查方法是由医师综合临床症状、口腔探诊和牙周组织检查(比如出血、口臭、牙龈外观肿胀、测定牙菌斑附着状况、牙周袋的深度、出血或牙齿的松动度)及X光图像等多种结果，进行牙周疾病的评估和诊断，都需从病理型态上观察和判断病情。牙周疾病的早期症状通常不明显，其中牙龈炎为牙周炎的早期阶段，患者经常不自觉或往往忽视初期牙龈炎，当患者因剧烈疼痛或牙龈出血等症状到医院就诊时，病情多半已经严重，甚至有些患者盲目吃消炎药，不及时就医，导致其他口腔疾病的发生，比如智齿冠周炎、牙周炎、牙龈乳头炎等等。在牙科临床现场，也经常可见到患者的牙龈明显退缩、牙齿松动，严重者则出现牙槽骨大量吸收甚至感染，最后可能必须拔牙无法保留牙齿或牙齿脱落，严重影响患者的生活质量。因此，早期发现牙周疾病和及时治疗更显得十分重要。然而，现有牙周疾病检查方式包括以下缺陷：主要由医生判断，而医生诊治经验丰富程度有别，无法排除主观因素，在病情的判断上仍有不够客观的疑虑；现有检测牙龈炎方式，弱点是医生只能通过临床症状诊断，导致疾病发现晚；目前尚无成熟技术及指标，判断牙周炎是否处于进展期，因此牙周炎往往错最佳控制的时机，导致其恶化到不可控制的程度。此外，就患者自身居家的口腔卫生管理而言，若是有可供患者自行检测的工具，有助于患者在家自检，及早预防牙周疾病或及时就诊治疗。因此，在牙周疾病的检测领域里，急需开发操作简单且容易判别的试剂盒及检测方法，可供医生在临床现场快速检测，取得客观的证据判断病情；另一方面，也能让患者在家自检使用，及早察觉牙周的异常并就诊治疗。此外，在牙周疾病的检测上，由于每个人对于疾病的病征表现可能不同，而且因为牙周炎进展期的临床炎性症状不明显，临床检测很难判断进展程度，所以用需要利用精确的分子检测，以直观反映牙周的免疫反应，防止炎症发生进一步侵染。
技术实现思路
综合上述现有技术的缺陷，本专利技术提供一种试剂盒与其使用方法，以解决前述的技术问题。本专利技术提出的试剂盒及其使用方法，除了判断是否存在牙周疾病之外，还可以检测牙周炎是否在进展期，提供了代表性的临床证据，操作简便、快速且精确，从而提升临床预防与早期干预治疗牙周疾病的效果。为解决上述技术问题，本专利技术采用的技术方案是提供一种牙周疾病检测试剂盒，包括：白细胞介素-1β特异抗体、白细胞介素-18特异抗体及至少一种固相载体。本专利技术的另一目的在于提供可靠且精确的牙周疾病检测与区别牙周疾病疾病进展的试剂盒。根据上述目的，本专利技术涉及一种牙周疾病检测试剂盒，其特征是：白细胞介素-1β特异抗体及白细胞介素-18特异抗体分别固定于具有不同粒径的固相载体。其中，固相载体为微米级聚苯乙烯小珠，白细胞介素-1β特异抗体及白细胞介素-18特异抗体分别与微米级聚苯乙烯小珠共价连接。此外，试剂盒进一步包括生物素耦联检测抗体及荧光素标记的链霉亲和素。根据上述目的，本专利技术还提供了上述牙周疾病检测试剂盒的使用方法，包括如下步骤：将生物样本加入共价连接白细胞介素-1β特异抗体及白细胞介素-18特异抗体的微米级聚苯乙烯小珠混合，以形成第一溶液；将生物素耦联检测抗体加入第一溶液并予以混合，以形成第二溶液；将荧光素标记的链霉亲和素加入第二溶液予以混合，以形成第三溶液；通过流式细胞仪区分第三溶液中的微米级聚苯乙烯小珠；以及，依据第三溶液中的荧光强度以定量分析的方式分别得到生物样本中的白细胞介素-1β及白细胞介素-18的浓度来进行牙周病的评估及诊断。根据本专利技术以细胞因子浓度判断牙周疾病程度的目的，本专利技术在测得白细胞介素-1β和白细胞介素-18的浓度范围后，进一步以下列定义范围判断牙周疾病的病程：当白细胞介素-1β浓度大于1000pg/ml，则判断属于牙龈炎；当白细胞介素-18浓度小于70pg/ml，且所述白细胞介素-18浓度除以所述白细胞介素-1β的比值小于0.3，则判断属于牙周炎进展期；或是当白细胞介素-18浓度小于70pg/ml，且所述白细胞介素-18浓度除以所述白细胞介素-1β浓度的比值大于0.3且小于0.5，则判断属于牙周炎的炎症期。本专利技术的再一目的在于提供可靠、操作简易方便又快速的牙周疾病检测与区别牙周疾病疾病进展的试剂盒。根据上述目的，本专利技术涉及一种牙周疾病检测试剂盒，其特征是：其中的固相载体为硝酸纤维膜。其中，牙周疾病检测试剂盒进一步包括胶体金标记白细胞介素-1β抗体与胶体金标记白细胞介素-18抗体；白细胞介素-1β特异抗体及白细胞介素-18特异抗体分别固定在硝酸纤维膜的不同位置。根据上述目的，本专利技术还提供了上述牙周疾病检测试剂盒的使用方法，包括如下步骤：(1)制备胶体金标记白细胞介素-1β抗体；(2)制备胶体金标记白细胞介素-18抗体；(3)将生物样本接触胶体金标记白细胞介素-1β抗体与胶体金标记白细胞介素-18抗体，使生物样本中的白细胞介素-1β或白细胞介素-18分别与胶体金标记白细胞介素-1β抗体与胶体金标记白细胞介素-18抗体结合，形成样品液；(4)将样品液接触作为固相载体的硝酸纤维膜，使已结合胶体金标记白细胞介素-1β抗体的白细胞介素-1β及已结合胶体金标记白细胞介素-18抗体的白细胞介素-18，分别与硝酸纤维膜上固定的白细胞介素-1β特异抗体及白细胞介素-18特异抗体结合，从而显示对应的颜色；以及(5)依据颜色的深浅，分别确定白细胞介素-1β及白细胞介素-18的浓度范围。附图说明图1表示本案第一实施例的流程示意图。图2表示本案第一实施例流式细胞仪检测的数据示意图。图3表示本案第一实施例检测牙周炎患者治疗前后唾液中IL-18变化。图4表示本案第二实施例的流程示意图。图5表示本案第二实施例的检测试纸条配置示意图。图6表示本案第二实施例检测试纸条检测结果的类型示意图。具体实施方式为了使本专利技术的目的、技术特征及优点，能更为相关
人员所了解，并得以实施本专利技术，在此配合所附的附图、具体阐明本专利技术的技术特征与实施方式，并列举较佳实施例进一步说明。以下文中所对照的附图，为表达与本专利技术特征有关的示意，并未亦不需要依据实际情形完整绘制。而关于本案实施方式的说明中涉及本领域技术人员所熟知的
技术实现思路
，亦不再加以陈述。本专利技术提供一种检测牙周疾病的试剂盒及对应的使用方式，通过免疫学方法检测唾液中的两种细胞因子：白细胞介素-1β(interleukin-1beta、interleukin-1β；以下简称IL-1β)及白细胞介素-18(interleukin-18，以下简称IL-18)的浓度，据此可以判别牙龈炎或其他牙周疾病；同时根据检测到的两种细胞因子的浓度范围，可以进一步判别牙龈炎或牙周炎进展及被控制程度。本专利技术的检测牙周疾病的试剂盒可依需求应用于临床诊断或病人居家自检。本专利技术所指的牙周病主要包括但不限于牙龈炎和牙周炎。牙周本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种牙周疾病检测试剂盒，其特征在于，包括：白细胞介素-1β特异抗体、白细胞介素-18特异抗体及至少一种固相载体。/n

【技术特征摘要】
1.一种牙周疾病检测试剂盒，其特征在于，包括：白细胞介素-1β特异抗体、白细胞介素-18特异抗体及至少一种固相载体。


2.如权利要求1所述的牙周疾病检测试剂盒，其特征在于，所述白细胞介素-1β特异抗体及所述白细胞介素-18特异抗体分别固定于两种粒径不同的所述固相载体。


3.如权利要求1或2所述的牙周疾病检测试剂盒，其特征在于，所述固相载体为微米级聚苯乙烯小珠。


4.如权利要求3所述的牙周疾病检测试剂盒，其特征在于，所述白细胞介素-1β特异抗体及所述白细胞介素-18特异抗体分别与所述微米级聚苯乙烯小珠共价连接。


5.如权利要求4所述的牙周疾病检测试剂盒，其特征在于，进一步包括生物素耦联检测抗体及荧光素标记的链霉亲和素。


6.如权利要求1或2所述的牙周疾病检测试剂盒，其特征在于，所述固相载体为硝酸纤维膜。


7.如权利要求6所述的牙周疾病检测试剂盒，其特征在于，进一步包括胶体金标记白细胞介素-1β抗体与胶体金标记白细胞介素-18抗体；其中，所述白细胞介素-1β特异抗体及所述白细胞介素-18特异抗体分别固定在所述硝酸纤维膜的不同位置。


8.一种使用如权利要求1所述的牙周疾病检测试剂盒的方法，其特征在于，包括如下步骤：将生物样本加入共价连接所述白细胞介素-1β特异抗体及所述白细胞介素-18特异抗体的所述微米级聚苯乙烯小珠混合，形成第一溶液；将生物素耦联检测抗体加入所述第一溶液混合，形成第二溶液；将荧光素标记的链霉亲和素加入所述第二溶液混合，形成第三溶液；通过流式细胞仪区分所述第三溶液中的所述微米级聚苯乙烯小珠；以及依据所述第三溶液中的荧...

【专利技术属性】
技术研发人员：不公告发明人，
申请(专利权)人：陈洁，
类型：发明
国别省市：河北;13