一种从叶下珠中分离制备鞣花酸的球磨辅助提取方法技术

本发明专利技术公开了一种从叶下珠中分离制备鞣花酸的球磨辅助提取方法，将叶下珠药材干燥、粉碎、过筛，所得叶下珠粉末置于行星式球磨仪中研磨处理，处理后的粉末与提取溶剂按比例混合，于30℃~40℃的水浴中超声提取15 min~120 min，得叶下珠单宁提取液；向提取液中加入硫酸，于20℃~90℃的水浴中搅拌酸解，酸解液冷却至室温后，过滤，滤液蒸除溶剂并冷冻干燥，得到棕黑色鞣花酸粗产物，粗产物经大孔吸附树脂XDA‑8D吸附纯化，洗脱得到淡黄色鞣花酸单体产品。本发明专利技术的方法成本低廉，原料易得，制备鞣花酸的过程快速、高效，产物鞣花酸含量较高，可为叶下珠药用资源的综合利用提供技术依据。

A ball milling assisted extraction method for the separation and preparation of ellagic acid from Phyllanthus

【技术实现步骤摘要】
一种从叶下珠中分离制备鞣花酸的球磨辅助提取方法
本专利技术涉及天然产物化学
，具体涉及一种从叶下珠中分离制备鞣花酸的球磨辅助提取方法。
技术介绍
叶下珠(PhyllanthusurinariaL.)，大戟科油柑属植物，又名珍珠草、夜合草、阴阳草等。因果实扁圆且结在叶下而得名。常见于我国浙江、江苏南部、安徽、江西、福建等地，多生长于温暖湿润的棕壤或沙质土壤中。研究表明，叶下珠富含鞣花单宁，是一种常见、易得的鞣花酸来源。(程艳刚.叶下珠化学成分和药理作用研究进展[J].辽宁中医药大学学报,2016,18(4):240-241.)鞣花酸(Ellagicacid)，淡黄色粉末，化学名为2,3,7,8-四羟基-[1]-苯并吡喃并[5,4,3-CDE]苯并吡喃-5,10-二酮，是没食子酸的二聚衍生物，其结构式如下所示。作为一种天然植物多酚，多以缩合形式(如鞣花单宁、苷等)广泛存在于如石榴皮、蔓越莓、草莓、坚果等各种植物组织中，具有抗氧化、抗癌、抑菌、抗增殖、美白等多种药理活性。(谢勇平.叶下珠化学成分及药理作用的研究进展[J].化学工程与装备,2015,7:217-218.)。鞣花酸的化学结构式为：目前，鞣花酸的制备方法主要有以下几种：1)提取法：即直接提取鞣花酸。中国专利(CN107163059)公开了一种从芒果核中提取制备鞣花酸的方法，通过水醇提取、大孔吸附树脂和硅胶柱层析分离纯化得到了含量大于85％的鞣花酸产品。鞣花酸多作为鞣花单宁的结构单元存在于植物组织中，因此直接提取得率往往较低，且难以达到较高含量。2)合成法：中国专利(CN110066284A)公开了一种一锅法合成鞣花酸的工艺过程，即使用没食子酸酯类化合物与过氧化物在酸性溶剂中进行氧化聚合反应和分子内酯化反应。该过程较为繁琐，耗时较长，且过程中使用大量的有机溶剂和较高的温度，能耗高且造成环境污染。3)酶降解法：中国专利(CN101701234A)公开了一种用生物酶提取石榴皮渣中的鞣花酸的方法，即采用生物复合酶对石榴皮渣中的鞣花单宁进行酶解，并以碱液终止和萃取鞣花酸产品。该方法实现了环境友好，但对酶的种类有一定的要求，且所得鞣花酸提取率仅有10％-20％，不适合大规模生产。近年来，球磨辅助提取技术已被越来越多地应用于植物有效成分的提取中(CN108403739A，CN103380837A)。它可通过机械力作用，使植物细胞产生破壁效应，从而促进有效成分的释放。球磨辅助提取技术不仅能够缩短提取时间，还能显著提高有效成分的提取率。因此，本专利技术采用球磨辅助提取技术从叶下珠中分离制备鞣花酸，在不造成进一步环境污染的前提下充分提高叶下珠的利用率，以期获得较高的产率和产物含量，并且拓展其应用领域。
技术实现思路
针对现有技术存在的上述问题，本专利技术的目的在于提供一种从叶下珠中分离制备鞣花酸的球磨辅助提取方法，它是一种高效的球磨辅助超声提取方法，以价廉易得的叶下珠为原料，经球磨处理，以乙醇和水混合溶剂作为提取溶剂，通过超声提取和酸解获得鞣花酸粗提物，并通过大孔吸附树脂进行进一步纯化，从而获得更高产率和含量的鞣花酸产品。所述的一种从叶下珠中分离制备鞣花酸的球磨辅助提取方法，以叶下珠为原料，经球磨粉碎处理、超声提取及酸解制备得到淡黄色鞣花酸产品，其特征在于包括以下步骤：1)将叶下珠干燥全草粉碎，得到叶下珠粉末备用；2)将步骤1)所得叶下珠粉末进行球磨粉碎处理，处理过程为：将所述叶下珠粉末置于行星式球磨仪中进行研磨，球磨转速为100～300rpm，球磨时间5～20min，得到球磨处理后的叶下珠粉末；3)将步骤2)所得球磨处理后的叶下珠粉末与提取溶剂以1:10～40的料液比混合，料液比单位为g/mL，然后置于30～40℃的水浴中超声提取15～120min，得到叶下珠单宁提取液；4)向步骤3)所得单宁提取液中滴加酸溶液，水浴加热搅拌进行酸解，将酸解后的提取液放冷至室温，过滤，滤液蒸除溶剂并冷冻干燥，得到棕黑色鞣花酸粗产物；5)步骤4)所得棕黑色鞣花酸粗产物经大孔吸附树脂吸附纯化，收集洗脱液，洗脱液蒸除溶剂并冷冻干燥，得到淡黄色鞣花酸产品，称重并计算得率；6)将步骤5)所得淡黄色鞣花酸产品以色谱级乙醇复溶，经0.22μmPTFE微孔滤膜过滤，以超高效液相色谱法进行分析，计算产品含量。所述的一种从叶下珠中分离制备鞣花酸的球磨辅助提取方法，其特征在于步骤1)中，粉碎后的叶下珠粉末过80目筛，得到目数在80目以上的叶下珠粉末。所述的一种从叶下珠中分离制备鞣花酸的提取方法，其特征在于步骤2)中，球磨转速为100～300rpm，球磨时间5～20min，优选球磨转速为100rpm，球磨时间为5min；以加入的不锈钢球磨珠总体积与球磨罐容积的比值计算填充率，行星式球磨仪的填充率为5.2％～25％，优选为20.9％。所述的一种从叶下珠中分离制备鞣花酸的球磨辅助提取方法，其特征在于步骤3)中，提取溶剂为正己烷、石油醚、乙酸乙酯、乙醇、水或任意体积比的乙醇水溶液，优选为乙醇水溶液，乙醇水溶液中，乙醇与水的体积比优选为50:50。所述的一种从叶下珠中分离制备鞣花酸的球磨辅助提取方法，其特征在于步骤3)中，叶下珠粉末与提取溶剂的料液比为1:10，料液比单位为g/mL，超声提取的温度为30℃，超声提取的时间为30min。所述的一种从叶下珠中分离制备鞣花酸的球磨辅助提取方法，其特征在于步骤4)中，用于酸解的酸为无机酸和有机酸，如盐酸、硫酸和甲酸等，优选为硫酸，其浓度为0.5％～5％，v/v，优选为3％，v/v；酸解温度为20～90℃，优选为40℃；酸解时间为0.5～4h，优选为0.5h。所述的一种从叶下珠中分离制备鞣花酸的球磨辅助提取方法，其特征在于步骤5)中，用于吸附纯化的大孔吸附树脂类型包括HPD450、LXA-8、LX-8、HP-20、DA201、XAD-2、LSA-21、AB-8、HPD826或XDA-8D中的任意一种，优选为XDA-8D。所述的一种从叶下珠中分离制备鞣花酸的球磨辅助提取方法，其特征在于步骤5)中，XDA-8D大孔吸附树脂上样量为300～500mg鞣花酸粗产物，上样体积为30～50mL。所述的一种从叶下珠中分离制备鞣花酸的球磨辅助提取方法，其特征在于步骤5)中，用以10％作为一个浓度梯度的乙醇水溶液洗脱至树脂柱出口端液体为无色透明时，停止收集洗脱液。所述的一种从叶下珠中分离制备鞣花酸的球磨辅助提取方法，其特征在于步骤6)中，用超高效液相色谱法进行分析的过程为：色谱柱为WatersAcquityUPLCHSST3柱，2.1mm×100mm，1.8μm；流速0.2mL/min；进样量1.0μL；柱温30℃；检测波长250nm；流动相A为0.1％HCOOH水溶液，流动相B为乙腈；梯度洗脱程序：0.0-3.5min，97％-96％A；3.5-5.0min，96％-92％A；5.0-9.0min，92％-90％A；9.0-14.0m本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种从叶下珠中分离制备鞣花酸的球磨辅助提取方法，以叶下珠为原料，经球磨粉碎处理、超声提取及酸解制备得到淡黄色鞣花酸产品，其特征在于包括以下步骤：/n1）将叶下珠药材原料粉碎，得到叶下珠粉末备用；/n2）将步骤1）所得叶下珠粉末进行球磨粉碎处理，处理过程为：将所述叶下珠粉末置于行星式球磨仪中进行研磨，球磨转速为100~300 rpm，球磨时间5~20 min，得到球磨处理后的叶下珠粉末；/n3）将步骤2）所得球磨处理后的叶下珠粉末与提取溶剂以1 : 10~40的料液比混合，料液比单位为g/mL，然后置于30~40℃的水浴中超声提取15~120 min，得到叶下珠单宁提取液；/n4）向步骤3）所得单宁提取液中滴加酸溶液，水浴加热搅拌进行酸解，将酸解后的提取液放冷至室温，过滤，滤液蒸除溶剂并冷冻干燥，得到棕黑色鞣花酸粗产物；/n5）步骤4）所得棕黑色鞣花酸粗产物经大孔吸附树脂吸附纯化，收集洗脱液，洗脱液蒸除溶剂并冷冻干燥，得到淡黄色鞣花酸产品；/n6）将步骤5）所得淡黄色鞣花酸产品以色谱级乙醇复溶，经0.22 μm PTFE微孔滤膜过滤，以超高效液相色谱法进行分析，计算产品含量，称重并计算得率。/n...

【技术特征摘要】
1.一种从叶下珠中分离制备鞣花酸的球磨辅助提取方法，以叶下珠为原料，经球磨粉碎处理、超声提取及酸解制备得到淡黄色鞣花酸产品，其特征在于包括以下步骤：
1）将叶下珠药材原料粉碎，得到叶下珠粉末备用；
2）将步骤1）所得叶下珠粉末进行球磨粉碎处理，处理过程为：将所述叶下珠粉末置于行星式球磨仪中进行研磨，球磨转速为100~300rpm，球磨时间5~20min，得到球磨处理后的叶下珠粉末；
3）将步骤2）所得球磨处理后的叶下珠粉末与提取溶剂以1:10~40的料液比混合，料液比单位为g/mL，然后置于30~40℃的水浴中超声提取15~120min，得到叶下珠单宁提取液；
4）向步骤3）所得单宁提取液中滴加酸溶液，水浴加热搅拌进行酸解，将酸解后的提取液放冷至室温，过滤，滤液蒸除溶剂并冷冻干燥，得到棕黑色鞣花酸粗产物；
5）步骤4）所得棕黑色鞣花酸粗产物经大孔吸附树脂吸附纯化，收集洗脱液，洗脱液蒸除溶剂并冷冻干燥，得到淡黄色鞣花酸产品；
6）将步骤5）所得淡黄色鞣花酸产品以色谱级乙醇复溶，经0.22μmPTFE微孔滤膜过滤，以超高效液相色谱法进行分析，计算产品含量，称重并计算得率。


2.如权利要求1所述的一种从叶下珠中分离制备鞣花酸的球磨辅助提取方法，其特征在于步骤1）中，粉碎后的叶下珠粉末过80目筛，得到目数在80目以上的叶下珠粉末。


3.如权利要求1所述的一种从叶下珠中分离制备鞣花酸的提取方法，其特征在于步骤2）中，球磨转速为100~300rpm，球磨时间5~20min，优选球磨转速为100rpm，球磨时间为5min；以加入的不锈钢球磨珠总体积与球磨罐容积的比值计算填充率，行星式球磨仪的填充率为5.2%~25%，优选为20.9%。


4.如权利要求1所述的一种从叶下珠中分离制备鞣花酸的球磨辅助提取方法，其特征在于步骤3）中，提取溶剂为正己烷、石油醚、乙酸乙酯、乙醇、水或任意体积比的乙醇水溶液，优选为乙醇水溶液；乙醇水溶液中，乙醇与水的体积比优选为50:50。


5.如权利要求1所述的一种从叶下珠中分离制备鞣花酸的球磨辅助提取方法，其特征在于步骤3）中，叶下珠粉末与提取溶剂的料液比...

【专利技术属性】
技术研发人员：梁现蕊，熊淑婷，
申请(专利权)人：浙江工业大学，
类型：发明
国别省市：浙江;33