食管鳞癌检测试剂盒及检测装置制造方法及图纸

本发明专利技术公开一种食管鳞癌检测试剂盒，包括检测食管鳞癌特异性甲基化标记物的引物、探针、PCR缓冲液、DNA聚合酶、Mg

Esophageal squamous cell carcinoma detection kit and detection device

【技术实现步骤摘要】
食管鳞癌检测试剂盒及检测装置
本专利技术涉及一种食管鳞癌检测试剂盒及检测装置，属于生物医学

技术介绍
我国是食管癌发病率最高的国家之一，全球每年都超过22万的食管癌新发病例和超过20万死亡病例，其中超过50％都是在中国。目前，90％以上的食管癌患者确诊时已经发展至中晚期，生活质量低，总体5年生存率不足20％。食管癌的种类分为腺癌和鳞癌两种。在欧美等西方国家，食管癌主要以腺癌为主，而在中国主要以鳞癌为主。因此，中国的食管癌的防治需要针对中国人群的实际发布特点提出针对性的方案。食管癌当前早期诊断和筛查方法为胃镜，但是胃镜一般需要去县级以上医院，而且需要提前预约。这样的检查流程对于想做食管癌早期筛查或者工作繁忙的人来说是难以接受的。因此，在中国的食管癌早期筛查率十分低下。居家型采样是目前在癌症领域新兴的一个领域，目前已经在宫颈癌和结直肠癌的早期筛查上形成了很好的应用。通过一个自助的采样器，受试者在家可以完成宫颈脱落细胞或者粪便的采样，从而实现宫颈癌和结直肠癌的居家型筛查。但是目前，食管癌尚没有一个有效的居家型筛查手段。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是克服现有技术的缺陷，提供一种食管鳞癌检测试剂盒及检测装置，可以实现受试者居家取样，样本室温稳定保存30天，食管鳞癌检测试剂盒具有超高灵敏度和特异性。为解决上述技术问题，本专利技术提供一种食管鳞癌检测试剂盒，包括检测食管鳞癌特异性甲基化标记物的引物、探针、PCR缓冲液、DNA聚合酶、Mg2+和4种dNTPs混合溶液，所述的甲基化标记物为SFRP2、CADM1、TIMP3、ZNF582、TERT、TFPI2中的任意一种或多种的组合物，所述SFRP2、CADM1、TIMP3、ZNF582、TERT、TFPI2的引物和探针的核苷酸序列分别如SEQID:1～SEQID:23所示。进一步地，还包括内参基因，所述内参基因为ACTB或GAPDH，所述ACTB、GAPDH的引物和探针的核苷酸序列分别如SEQID:24～SEQID:29所示。进一步地，该检测试剂盒检测的对象为经亚硫酸盐、重亚硫酸盐或亚硫酸氢盐转化、纯化后的食管上皮细胞中的DNA序列。本专利技术还提供一种食管鳞癌检测装置，包括可吞咽的且能够从食管表面收集脱落细胞的取样装置、用于室温保存的储存装置及上述的食管鳞癌检测试剂盒。进一步地，所述取样装置包括胶囊封闭的膨胀材料和取出工具，所述取出工具与膨胀材料相连接，可在吞咽后通过拉力取出。进一步地，所述膨胀材料为聚氨酯海绵或水凝胶。进一步地，所述储存装置包括固定架，所述固定架上设有储存罐放置孔和取样装置放置孔，所述储存罐放置孔和取样装置放置孔内分别放置有储存罐和取样装置。进一步地，所述储存罐内设有稳定剂，所述稳定剂包括醇类、磷酸盐缓冲液、海藻糖、甘露醇、蔗糖、葡萄糖、N-乙酰-L-半胱氨酸、柠檬酸钠、EDTA和去离子水。稳定剂可用于保存食管上皮脱落细胞，使食管上皮脱落细胞形态保持稳定，并保证DNA在室温下不发生降解。本专利技术所达到的有益效果：本专利技术可以实现受试者居家取样，样本室温稳定保存30天，食管鳞癌检测试剂盒采用甲基化标记物SFRP2、CADM1、TIMP3、ZNF582、TERT、TFPI2中的任意一种或多种的组合物，具有超高灵敏度和特异性。附图说明图1是本专利技术储存装置的结构示意图；图2是本专利技术取样装置中膨胀材料膨胀前后示意图；图3是本专利技术甲基化SFRP2检测食管鳞癌组织和癌旁组织结果；图4是TFPI2基因的正向引物1、反向引物1和探针1检测食管癌细胞的结果；图5是TFPI2基因的正向引物2、反向引物2和探针2检测食管癌细胞的结果。具体实施方式下面结合附图对本专利技术作进一步描述。以下实施例仅用于更加清楚地说明本专利技术的技术方案，而不能以此来限制本专利技术的保护范围。本专利技术一种食管鳞癌检测试剂盒，包括检测食管鳞癌特异性甲基化标记物的引物、探针、PCR缓冲液、DNA聚合酶、Mg2+和4种dNTPs混合溶液，所述的甲基化标记物为SFRP2、CADM1、TIMP3、ZNF582、TERT、TFPI2中的任意一种或多种的组合物，所述SFRP2、CADM1、TIMP3、ZNF582、TERT、TFPI2的引物和探针的核苷酸序列如表1所示。表1SFRP2、CADM1、TIMP3、ZNF582、TERT、TFPI2的引物和探针的核苷酸序列食管鳞癌检测试剂盒中还包括内参基因，所述内参基因为ACTB或GAPDH，所述ACTB、GAPDH的引物和探针的核苷酸序列分别如表2所示。表2ACTB和GAPDH的引物和探针的核苷酸序列ID名称序列SEQID:24ACTB正向引物GTGATGGAGGAGGTTTAGTAAGTSEQID:25ACTB反向引物CCAATAAAACCTACTCCTCCCTTASEQID:26ACTB探针CCACCACCCAACACACAATAACAAACACSEQID:27GAPDH正向引物GTTGGGTATGGAGGTTTGGTSEQID:28GAPDH反向引物TTCACCTTCCCCATAATATCTAAACSEQID:29GAPDH探针GGGAGGCGTGTGTGTCGGTCG本专利技术还提供一种食管鳞癌检测装置，包括可吞咽的且能够从食管表面收集脱落细胞的取样装置、用于室温保存的储存装置及上述的食管鳞癌检测试剂盒。所述取样装置包括胶囊封闭的膨胀材料和取出工具，所述取出工具与膨胀材料相连接，可在吞咽后通过拉力取出。所述膨胀材料为聚氨酯海绵或水凝胶。图2是本专利技术取样装置中膨胀材料膨胀前后示意图。如图1所示，所述储存装置包括固定架2，所述固定架2上设有储存罐放置孔3和取样装置放置孔4，所述储存罐放置孔3和取样装置放置孔4内分别放置有储存罐1和取样装置。所述储存罐1内设有稳定剂，所述稳定剂包括醇类、磷酸盐缓冲液、海藻糖、甘露醇、蔗糖、葡萄糖、N-乙酰-L-半胱氨酸、柠檬酸钠、EDTA和去离子水。稳定剂可用于保存食管上皮脱落细胞，使食管上皮脱落细胞形态保持稳定，并保证DNA在室温下不发生降解。实施例1选取SFRP2的正向引物、反向引物和探针，选取ACTB引物探针组为内质控基因，在上述选取的引物和探针中加入0.6mM4种dNTPs混合溶液、5mMMg2+溶液、1.5XPCRbuffer、0.1U/μLDNA聚合酶和PCR去离子水，检测食管鳞癌组织DNA和癌症组织DNA，其中所述的DNA是通过亚硫酸氢盐转化后且纯化的DNA。检测结果如图3所示，可以看出SFRP2在癌症本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.食管鳞癌检测试剂盒，其特征是，包括检测食管鳞癌特异性甲基化标记物的引物、探针、PCR缓冲液、DNA聚合酶、Mg

【技术特征摘要】
1.食管鳞癌检测试剂盒，其特征是，包括检测食管鳞癌特异性甲基化标记物的引物、探针、PCR缓冲液、DNA聚合酶、Mg2+和4种dNTPs混合溶液，所述的甲基化标记物为SFRP2、CADM1、TIMP3、ZNF582、TERT、TFPI2中的任意一种或多种的组合物，所述SFRP2、CADM1、TIMP3、ZNF582、TERT、TFPI2的引物和探针的核苷酸序列分别如SEQID:1~SEQID:23所示。


2.根据权利要求1所述的食管鳞癌检测试剂盒，其特征是，还包括内参基因，所述内参基因为ACTB或GAPDH，所述ACTB、GAPDH的引物和探针的核苷酸序列分别如SEQID:24~SEQID:29所示。


3.根据权利要求1所述的食管鳞癌检测试剂盒，其特征是，该检测试剂盒检测的对象为经亚硫酸盐、重亚硫酸盐或亚硫酸氢盐转化、纯化后的食管上皮细胞中的DNA序列。


4.食管...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵国栋，熊尚岷，朱云，杨黎，
申请(专利权)人：苏州唯善生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32