用于检测BRAF基因突变的引物组、试剂盒及方法技术

本发明专利技术公开了一种用于检测BRAF基因突变的引物组、试剂盒及方法，属于基因检测技术领域。本发明专利技术提供的引物组包括BRAF上游引物和BRAF下游引物；所述BRAF上游引物的核苷酸序列如序列表SEQ ID NO:1所示；所述BRAF下游引物的核苷酸序列如序列表SEQ ID NO:2所示。另外，本发明专利技术提供的试剂盒包括PCR扩增反应试剂、阳性质控品和阴性质控品、引物混合液、引物探针混合液和标准曲线方程。本发明专利技术提供的用于检测BRAF基因突变的方法具有高效、简便、直观、灵敏度高等特点，其可以对BRAF基因的突变频率进行定量分析。

Primer set, kit and method for detecting BRAF gene mutation

【技术实现步骤摘要】
用于检测BRAF基因突变的引物组、试剂盒及方法
本专利技术涉及基因检测
，具体是一种用于检测BRAF基因突变的引物组、试剂盒及方法。
技术介绍
BRAF(v-rafmurinesarcomaviraloncogenehomologB)基因编码B-RAF蛋白，参与细胞信号调节，生长和生存。BRAF基因的V600E突变可以导致B-RAF蛋白单体的组成性活化以及后续MEK1和MEK2蛋白的活化，从而促进细胞增殖和抑制细胞凋亡。BRAF突变在人类肿瘤中约占8％，其中主要发生于黑色素瘤、结直肠癌、甲状腺癌和非小细胞肺癌中，绝大部分突变形式为BRAFV600E突变。研究发现存在BRAFV600E突变的肿瘤预后较差，对化疗不敏感，生存期短。目前FDA已经分别针对不同肿瘤的BRAFV600E突变批准了不同的靶向治疗药物。达拉非尼(Dabrafenib)和曲美替尼(Trametinib)组合疗法可以对BRAFV600E或BRAFV600K突变的合并淋巴结转移后完全切除的黑色素瘤和不可切除或转移性黑色素瘤进行辅助治疗，也可对BRAFV600E突变的转本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.用于检测BRAF基因突变的引物组，其特征在于，包括BRAF上游引物和BRAF下游引物；所述BRAF上游引物的核苷酸序列如序列表SEQ ID NO:1所示；所述BRAF下游引物的核苷酸序列如序列表SEQ ID NO:2所示。/n

【技术特征摘要】
1.用于检测BRAF基因突变的引物组，其特征在于，包括BRAF上游引物和BRAF下游引物；所述BRAF上游引物的核苷酸序列如序列表SEQIDNO:1所示；所述BRAF下游引物的核苷酸序列如序列表SEQIDNO:2所示。


2.用于检测BRAF基因突变的试剂盒，包括PCR扩增反应试剂、阳性质控品、阴性质控品和标准曲线方程，其特征在于，所述的试剂盒还包括引物混合液以及与所述引物混合液相对应的引物探针混合液。


3.根据权利要求2所述的用于检测BRAF基因突变的试剂盒，其特征在于，所述的引物探针混合液包括如权利要求1所述的BRAF上游引物和BRAF下游引物以及BRAF探针；所述BRAF探针的核苷酸序列如序列表SEQIDNO:3所示。


4.根据权利要求2所述的用于检测BRAF基因突变的试剂盒，其特征在于，所述引物混合液中BRAF上游引物和BRAF下游引物的摩尔浓度均为2-100μmol/L。


5.根据权利要求2所述的用于检测BRAF基因突变的试剂盒，其特征在于，所述引物探针混合液中BRAF上游引物和BRAF下游引物的摩尔浓度均为2-100μmol/L，BRAF探针的摩尔浓度为10-1000μmol/L。


6.根据权利要求2所述的用于检测BRAF基因突变的试剂盒，其特征在于，所述的阳性质控品包括BRAF基因V600E突变位点的突变质粒和健康人基因组DNA；所述突变质粒的核苷酸序列如序列表SEQIDNO:4所示。


7.根据权利要求2所述的用于检测BRAF基因突变的试剂盒，其特征在于，所述的标准曲线方程是由突变质粒和健康人基因组DNA按照BRAFV600位置的分子数量比为50%，10%，5%，1%，0.1%和0%稀释得到的标准品的第一CT值和第二CT值的差值而得到的标准曲线方程，具体包括以下步骤：
将如权利要求2或3或5所述的引物探针混合液、如权利要求2所述的PCR扩增反应试剂以及6种突变频率的标准品混在一起进行PCR扩增反应，得到6种突变频率标准品的第一CT值；
将如权利要求2或4所述的引物混合液、如权利要求2所述的PCR扩增反应试...

【专利技术属性】
技术研发人员：徐雪，宋萍，汪进平，陈苗苗，杨玉霞，罗俊峰，
申请(专利权)人：阅尔基因技术苏州有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32