一种降低环糊精对普鲁兰酶抑制作用的方法技术

本发明专利技术公开了一种降低环糊精对普鲁兰酶抑制作用的方法，属于基因工程、酶工程或食品科学技术领域。本发明专利技术方法通过对普鲁兰酶与环糊精相互作用的关键氨基酸进行理性突变，制得普鲁兰酶突变体，以降低环糊精对普鲁兰酶的抑制作用，从而提高普鲁兰酶水解活力。本发明专利技术基于对酶与抑制剂晶体结构解析和不同来源酶的序列比对，找出普鲁兰酶与环糊精相互作用的位点，利用定点突变得到对环糊精敏感性降低的普鲁兰酶突变体，从而提高淀粉原料利用率及环糊精产率。

A method to reduce the inhibition of cyclodextrin on pullulanase

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】一种降低环糊精对普鲁兰酶抑制作用的方法
本专利技术涉及一种降低环糊精对普鲁兰酶抑制作用的方法，属于基因工程、酶工程或食品科学

技术介绍
普鲁兰酶(Pullulanase，EC3.2.1.41)专一性的水解普鲁兰、可溶性淀粉、支链淀粉和相应低聚糖中的α-1，6糖苷键，生成短直链糊精。与其他淀粉酶的复配使用，可大大提高淀粉原料利用率，因此广泛应用于淀粉工业中。在淀粉糖工业中，普鲁兰酶具有水解α-1，6糖苷键的作用，因此具有广阔的应用前景，可用于制备直链淀粉、麦芽糖、分支环糊精，与CGTase复配生产环糊精。在环糊精的生产过程中，以α-CD的生产为例，由于α-CGTase不能水解淀粉底物中的α-1，6键，单独使用α-CGTase生产α-CD时，转化率只有40％-60％。添加普鲁兰酶可以明显提高环糊精的转化率，但是普鲁兰酶容易受到环糊精的抑制，使得脱支反应与环化反应必须分开进行，造成生产周期长、资源浪费等问题。为了缩短生产周期，提高原料淀粉利用率，增大环糊精产量，采用普鲁兰酶与环糊精葡萄糖基转移酶复配“一锅法”生产环糊精，因此降低环糊本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种普鲁兰酶，其特征在于，所述普鲁兰酶的氨基酸序列包括，在母本氨基酸序列的基础上，将母本氨基酸序列上含有的FNDXXRDXXXGXXF中最后一位F(苯丙氨酸)进行突变后得到的氨基酸；其中X可以是任意天然存在的氨基酸；且环糊精对普鲁兰酶的抑制作用相对于母本显著降低。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20180301 CN 20181017013461.一种普鲁兰酶，其特征在于，所述普鲁兰酶的氨基酸序列包括，在母本氨基酸序列的基础上，将母本氨基酸序列上含有的FNDXXRDXXXGXXF中最后一位F(苯丙氨酸)进行突变后得到的氨基酸；其中X可以是任意天然存在的氨基酸；且环糊精对普鲁兰酶的抑制作用相对于母本显著降低。


2.根据权利要求1所述的普鲁兰酶，其特征在于，所述母本氨基酸序列是来源于枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)、Bacillusvireti、萎缩芽孢杆菌(Bacillusatrophaeus)、嗜热脂肪芽孢杆菌(Geobacillusstearothermophilus)、莫哈韦氏杆菌(Bacillusmojavensis)、Thermotogamaritima、嗜盐短杆菌([Brevibacterium]halotolerans)、Thermussp.IM6501、蜡状芽孢杆菌(BacilluscereusFRI-35)、嗜盐芽孢杆菌(Bacillushalotolerans)、Alteromonasmediterranea、Klebsiellapneumoniae、Thermotogamaritima、Escherichiacoli、Enterobacteraerogenes、Bacillustequilensis、Bacillusintestinalis、Bacillales、Bacilluslicheniformis、Bacillushalotolerans中的任意一种的普鲁兰酶的氨基酸序列。


3.根据权利要求1所述的普鲁兰酶，其特征在于，所述普鲁兰酶的氨基酸序列包括以下任意一段氨基酸序列：
(1)将来源于枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilisstr.168)的普鲁兰酶氨基酸序列的第476位的氨基酸苯丙氨酸发生突变后得到的氨基酸序列；
(2)将来源于Bacillusvireti的普鲁兰酶氨基酸序列的第476位的氨基酸苯丙氨酸发生突变后得到的氨基酸序列；
(3)将来源于萎缩芽孢杆菌(Bacillusatrophaeus)的普鲁兰酶氨基酸序列的第476位的氨基酸苯丙氨酸发生突变后得到的氨基酸序列；
(4)将来源于嗜热脂肪芽孢杆菌(Geobacillusstearothermophil...

【专利技术属性】
技术研发人员：金征宇，柏玉香，李晓晓，
申请(专利权)人：江南大学，
类型：发明
国别省市：江苏;32