一种环境污染紧急治理的活性菌剂加工方法技术

随着工业化进程的发展，由于化学品贮运与使用而引起的意外环境污染时有发生。本发明专利技术公开了一种可用于突发性化学品污染紧急生物治理的微生物菌剂及加工方法；该菌剂为富含单甲烷加氧酶菌体的真空干燥制剂，能长期保存并保持其活性，可以用于突发性化学品污染后的环境修复。本发明专利技术属于生物技术领域，可以用于环境工程的意外事件处理。

A processing method of active bactericide for emergent treatment of environmental pollution

【技术实现步骤摘要】
一种环境污染紧急治理的活性菌剂加工方法
本专利技术属于生物
，可以用于环境保护，尤其适用于环境突发性污染事故的紧急治理与生物修复。
技术介绍
随着工业化进程的加快，化学品和其它危险品的使用量增加。它们在运输、贮存与使用中可能发生意外并突发性地对周围的环境造成污染。例如2014年1月9日，美国西弗吉尼亚州发生化学品泄漏事故，污染了水源，导致该州9个县进入紧急状态，数十万人生活用水受到影响；2015年8月常合高速发生危险品运输车翻车车上运载的是剧毒危险品二甲苯泄露（江阴市官方微博）；2015年8月12日天津港瑞海公司所属危险品仓库发生特大爆炸，除造成生命与财产的损失外，对现场的土壤与水体均造成了污染（央视新闻官方报道）。突发环境事件是指由于污染物排放或自然灾害、生产安全事故等因素，导致污染物或放射性物质等有毒有害物质进入大气、水体、土壤等环境介质，突然造成或可能造成环境质量下降，危及公众身体健康和财产安全，或造成生态环境破坏，或造成重大社会影响，需要采取紧急措施予以应对的事件，主要包括大气污染、水体污染、土壤污染等突发性环境污染事件和辐射污染事件。突发性环境污染与常规的污水与固体废物处理有很大的不同。常规的工业废水处理一般用厌氧处理与曝气池结合进行，其中有曝气池中的活性污泥经过长期的培养与驯化，已经适合处理特定的水质。而突发性的污染发生时，污染物不确定，迫切需要一种广谱性、耐贮藏的、高活性的微生物菌剂。
技术实现思路
有鉴于此,本专利技术要解决的技术问题在于提供一种稳定的便于贮运的活性菌剂，可以快速的投入到偶然原因突发的污染场所,用于水体、土壤等污染的生物治理。本专利技术提供的活性菌剂,由菌种、磷酸盐等组成。其制备过程包括菌种获得、菌体培养、固液分离、菌体干燥等过程。菌种以以HNMS（Higgen´sNitrateMineralSalts）培养基加甲烷为唯一碳源进行菌种筛选，得到纯种或混合菌。能利用甲烷的微生物均具有可溶性甲烷单加氧酶（sMMO），sMMO能催化氧化大多数难降解的有机化合物如多氯烷烃、芳香化合物等。优选的菌种通过摇瓶培养、发酵罐培养后，菌体增殖至OD600大于2后，可以固液分离，加入甘油与明胶保护后，冷冻干燥或气流干燥得到活性菌剂。冷冻该菌剂可以用于偶然性环境污染的生物治理。以下通过实例分别予以说明。具体实施方式实施例1菌种筛选的采样与富集培养样品采集选择稻田或沼泽地。本样品的采集选择校园湖泊边，采集湖水与岸边接触面上的土壤(位置在东经119°2´16"，北纬33°32´47")。培养基选用Higginsminimalnitratesalts(HMNS)培养基，其配方如下：KH2PO45.03g；Na2HPO4∙12H2O2.17g；NaNO30.85g；K2SO40.17g；MgSO4∙7H2O0.037g；FeSO4∙7H2O0.012g；CuSO4∙5H2O1.25mg；微量元素溶液2ml，去离子水1000ml，pH7.0。这里的微量元素液组成为（mg/L）ZnSO4∙7H2O0.287；MnSO4∙7H2O0.223；H3BO30.062；Na2MoO4∙2H2O0.048；CoCl2∙6H2O0.048；KI0.083；CaCl2∙2H2O3.5，pH7.0在50mL的血清瓶中加入10mL的HMNS培养基。灭菌后加入5%（v/v）土壤上清液，30℃200r/m摇床培养，甲烷与氧气由注射器注入，培养2-7天，每日由注射器补入新鲜的甲烷与氧气，至培养基混浊。实施例2菌种纯化平板培养基选用Higginsminimalnitratesalts(HMNS)培养基，其配方如下：KH2PO45.03g；Na2HPO4∙12H2O2.17g；NaNO30.85g；K2SO40.17g；MgSO4∙7H2O0.037g；FeSO4∙7H2O0.012g；CuSO4∙5H2O1.25mg；琼脂20g，微量元素溶液2ml，去离子水1000ml，pH7.0。这里的微量元素液组成为（mg/L）ZnSO4∙7H2O0.287；MnSO4∙7H2O0.223；H3BO30.062；Na2MoO4∙2H2O0.048；CoCl2∙6H2O0.048；KI0.083；CaCl2∙2H2O3.5，pH7.0。取200微升培养液涂布于HNMS平板培养基上，放入干燥器中培养，干燥器中抽干空气后，用甲烷与氧气置换空气，28-30℃培养三天后，平板上可见微小的菌落，用新鲜的甲烷与氧气置换陈旧的气体继续培养菌落直径至三毫米许。挑选菌形大，生长迅速的菌落至HNMS斜面培养基上进行培养，培养中依然用甲烷与氧气置换空气。斜面培养一般需要3－5天。实施例3菌种摇瓶种子培养培养基选用Higginsminimalnitratesalts(HMNS)培养基，其配方如下：KH2PO45.03g；Na2HPO4∙12H2O2.17g；NaNO30.85g；K2SO40.17g；MgSO4∙7H2O0.037g；FeSO4∙7H2O0.012g；CuSO4∙5H2O1.25mg；微量元素溶液2ml，去离子水1000ml，pH7.0。这里的微量元素液组成为（mg/L）ZnSO4∙7H2O0.287；MnSO4∙7H2O0.223；H3BO30.062；Na2MoO4∙2H2O0.048；CoCl2∙6H2O0.048；KI0.083；CaCl2∙2H2O3.5，pH7.0在50mL的血清瓶中加入10mL的HMNS培养基，2mL石蜡油，灭菌。刮取HNMS斜面培养基上的菌苔接入血清瓶进行培养，30℃200r/m摇床培养，甲烷与氧气由注射器（0.2微米滤器过滤）注入，培养2-5天，至培养基混浊。实施例4菌体发酵罐培养培养基选用Higginsminimalnitratesalts(HMNS)培养基，其配方如下：KH2PO45.03g；Na2HPO4∙12H2O2.17g；NaNO30.85g；K2SO40.17g；MgSO4∙7H2O0.037g；FeSO4∙7H2O0.012g；CuSO4∙5H2O1.25mg；微量元素溶液2ml，去离子水1000ml，pH7.0。这里的微量元素液组成为（mg/L）ZnSO4∙7H2O0.287；MnSO4∙7H2O0.223；H3BO30.062；Na2MoO4∙2H2O0.048；CoCl2∙6H2O0.048；KI0.083；CaCl2∙2H2O3.5，pH7.0在发酵罐中加入50-80%的HMNS培养基，1-10%的石蜡油，灭菌。以5-10%（体积比）的比例接入实施例3中的培养液，30℃100-500r/m的搅拌转速，空气与甲烷以1VVM的混合通气比鼓入培养。培养35小时后，其OD600达到16以上后，可以停止培养。实施例5菌体的干燥实施例4培养完成后，立即降温至4℃，过滤或离心进行固液分离。少量菌液要以用离心法，大量的菌液可以用板框过滤法。固液分离过程中始终保持菌体温度在0-4℃。菌体分离后，本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种可以用于水体与土壤突发性化学品污染的治理菌剂。/n

【技术特征摘要】
1.一种可以用于水体与土壤突发性化学品污染的治理菌剂。


2.其特征在于以甲烷为唯一碳源分离出活性菌剂进行培养，该菌富可溶性甲烷单加氧酶（简称sMMO）,该酶可以处理大多数的化学污染物。

【专利技术属性】
技术研发人员：缑仲轩，王巧玲，端木传真，
申请(专利权)人：江苏食品药品职业技术学院，
类型：发明
国别省市：江苏;32