百香果天然果酒酵母的分离方法技术

本发明专利技术涉及果酒酿造领域，具体涉及一种百香果天然果酒酵母的分离方法，至少包括步骤一、总菌培养；步骤二、分离培养基的制备；步骤三、分离。本发明专利技术利用果酒酵母的特殊的生长环境创作分离条件，分离效率高，纯度高，得到的果酒酵母质量好，发酵能力强，能很好地适应百香果果浆的强酸性环境，非常适合用作百香果果酒的酿造菌种。

Separation of natural fruit wine yeast from passion fruit

【技术实现步骤摘要】
百香果天然果酒酵母的分离方法
本专利技术涉及果酒酿造领域，具体涉及一种从百香果果皮中分离天然果酒酵母的方法。
技术介绍
百香果酒是利用藤本植物百香果的果实酿造出来的一种果酒，气味芳香，酸甜可口，营养丰富，具有止咳、美容养颜抗衰老，抗氧化防癌等功效，是果酒中非常受欢迎的一种产品。目前百香果酒酿造过程中使用的酵母为人工培育出来的果酒酵母菌种。其缺点是，发酵能力差，不一定能很好的适应百香果果浆的强酸性环境，导致酿出来的果酒的酒精度达不到标准的要求。其实，百香果果皮中也存在天然的果酒酵母，其能在百香果中存活，也证明了天然果酒酵母能很好地适应百香果果浆，且发酵能力较高，因此将百香果果皮中的天然果酒酵母分离出来，作为百香果酒的酿造菌种，是有现实意义的。
技术实现思路
本专利技术的目的克服现有果酒酵母发酵能力差，不能适应百香果果浆的强酸性环境的缺陷，提供一种新的百香果天然果酒酵母的分离方法。本专利技术解决现有技术缺陷所采用的方案为：百香果天然果酒酵母的分离方法，其特征在于，包括如下步骤：步骤一、总菌培养：取百香果果皮，切粒后放入液态真菌培养基中，20-30℃下恒温培养2-5天，得到含有多种真菌的总菌培养液；步骤二、分离培养基的制备：在液态真菌培养基中加入无水乙醇，使得液态真菌培养基的酒精度为10-17°，装入容器中，加塞、包扎好后放入高压蒸汽灭菌锅中，100Pa、121℃下灭菌20-30分钟，制得分离培养基；步骤三、分离：取可吸水的无菌块状物料放入分离培养基中浸湿后悬挂在步骤一所述总菌培养液上方，使可吸水的无菌块状物料的底部刚好触碰到总菌培养液的液面，将含有可吸水的无菌块状物料的总菌培养液放入28℃下恒温分离24-72小时，得到仅含有天然果酒酵母的可吸水的无菌块状物料。优选地，步骤三后还包括步骤四、扩大培养：取出可吸水的无菌块状物料，涂抹在平板菌种培养基上，28℃下培养48-72小时后取出，得到分离好的天然果酒酵母菌种。更优选地，步骤四扩大培养后，还将平板菌种培养基置于冰箱中冷藏保存。优选地，所述液态真菌培养基为马铃薯培养基。优选地，所述百香果果皮为成熟的百香果果皮。优选地，在步骤二制备分离培养基的过程中，还通入了二氧化硫，使得液态真菌培养基的二氧化硫浓度为7-15ppm。优选地，在步骤二制备分离培养基的过程中，还加入了有机酸，使得液态真菌培养基的pH为3.5-4.5。优选地，所述有机酸为柠檬酸。优选地，在步骤二制备分离培养基的过程中，在液态真菌培养基中加入无水乙醇，使得液态真菌培养基的酒精度为10-15°。优选地，步骤三所述可吸水的无菌块状物料为无菌纱布或无菌棉签。实施本专利技术专利，具有以下有益效果：(1)直接利用百香果果皮分离出了天然果酒酵母，方法简单，成本低。(2)利用果酒酵母的特殊的生长环境创作分离条件，分离效率高，纯度高，得到的果酒酵母质量好，发酵能力强，能很好地适应百香果果浆的强酸性环境，非常适合用作百香果果酒的酿造菌种。具体实施方式下面将结合本专利技术实施方式中的具体实施例，对本专利技术实施方式中的技术方案进行清楚、完整地描述。实施例1百香果天然酵母的分离与筛选方法，包括如下步骤：(1)马铃薯培养基的配制：取去皮的马铃薯20g，切成边长2cm的小块，放入100mL去离子水中，煮沸30分钟，过滤，取滤液冷却至室温后加入2g葡萄糖，搅拌均匀，用去离子水补充滤液体积至100mL，装入三角烧瓶中，加塞、包扎好后放入高压蒸汽灭菌锅中，100Pa、121℃下灭菌20分钟，制得马铃薯液体培养基。(2)总菌培养：选取成熟的百香果，取果皮切成边长1cm的颗粒；取10g百香果果皮颗粒，放入步骤(1)制得的马铃薯液体培养基中，28℃下恒温培养48小时。(3)分离培养基的制备：取去皮的马铃薯20g，切成边长2cm的小块，放入100mL去离子水中，煮沸30分钟，过滤，取滤液冷却至室温后加入2g葡萄糖，通入二氧化硫10mg，并加入无水乙醇15mL，搅拌均匀，用去离子水补充滤液体积至100mL，用10％柠檬酸调节培养基溶液的pH至4，装入三角烧瓶中，加塞、包扎好后放入高压蒸汽灭菌锅中，100Pa、121℃下灭菌20分钟，制得分离培养基。(4)分离：取10*2cm的无菌纱布块，放入分离培养基中完成浸湿，沥干水后悬挂在马铃薯液体培养基的瓶口上，使纱布块的底部刚好触碰到马铃薯液体培养基的液面，三角烧瓶加塞后放入28℃下恒温分离48小时。(5)平板菌种培养基的配制：取去皮的马铃薯20g，切成边长2cm的小块，放入100mL去离子水中，煮沸30分钟，过滤，取滤液冷却至室温后加入2g葡萄糖、2g琼脂，搅拌均匀，用去离子水补充滤液体积至100mL，装入150mL三角烧瓶中，加塞、包扎好后放入高压蒸汽灭菌锅中，100Pa、121℃下灭菌20分钟，冷却至三角烧瓶不烫手时倒入至2个培养皿中，制得平板菌种培养基。(6)用无菌镊子夹取出纱布块，涂抹在平板菌种培养基上，将平板菌种培养基加盖后倒置，放入恒温培养箱中，28℃下培养72小时后取出，得到分离好的天然果酒酵母菌种，置于冰箱中冷藏保存。实施例2百香果天然酵母的分离与筛选方法，包括如下步骤：(1)马铃薯培养基的配制：取去皮的马铃薯20g，切成边长2cm的小块，放入100mL去离子水中，煮沸30分钟，过滤，取滤液冷却至室温后加入2g葡萄糖，搅拌均匀，用去离子水补充滤液体积至100mL，装入三角烧瓶中，加塞、包扎好后放入高压蒸汽灭菌锅中，100Pa、121℃下灭菌20分钟，制得马铃薯液体培养基。(2)总菌培养：选取成熟的百香果，取果皮切成边长0.5cm的颗粒；取1g百香果果皮颗粒，放入步骤(1)制得的马铃薯液体培养基中，28℃下恒温培养72小时。(3)分离培养基的制备：取去皮的马铃薯20g，切成边长2cm的小块，放入100mL去离子水中，煮沸30分钟，过滤，取滤液冷却至室温后加入2g葡萄糖，通入二氧化硫15mg，并加入无水乙醇10mL，搅拌均匀，用去离子水补充滤液体积至100mL，用10％柠檬酸调节培养基溶液的pH至3.5，装入三角烧瓶中，加塞、包扎好后放入高压蒸汽灭菌锅中，100Pa、121℃下灭菌30分钟，制得分离培养基。(4)分离：取10*3cm的无菌纱布块，放入分离培养基中完成浸湿，沥干水后悬挂在马铃薯液体培养基的瓶口上，使纱布块的底部刚好触碰到马铃薯液体培养基的液面，三角烧瓶加塞后放入28℃下恒温分离48小时。(5)平板菌种培养基的配制：取去皮的马铃薯20g，切成边长2cm的小块，放入100mL去离子水中，煮沸30分钟，过滤，取滤液冷却至室温后加入2g葡萄糖、2g琼脂，搅拌均匀，用去离子水补充滤液体积至100mL，装入150mL三角烧瓶中，加塞、包扎好后放入高压蒸汽灭菌锅中，100Pa、121℃下灭菌20分钟，冷却至三角烧瓶不烫手时倒入至2个培养皿本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.百香果天然果酒酵母的分离方法，其特征在于，包括如下步骤：/n步骤一、总菌培养：取百香果果皮，切粒后放入液态真菌培养基中，20-30℃下恒温培养2-5天，得到含有多种真菌的总菌培养液；/n步骤二、分离培养基的制备：在液态真菌培养基中加入无水乙醇，使得液态真菌培养基的酒精度为10-17°，装入容器中，加塞、包扎好后放入高压蒸汽灭菌锅中，100Pa、121℃下灭菌20-30分钟，制得分离培养基；/n步骤三、分离：取可吸水的无菌块状物料放入分离培养基中浸湿后悬挂在步骤一所述总菌培养液上方，使可吸水的无菌块状物料的底部刚好触碰到总菌培养液的液面，将含有可吸水的无菌块状物料的总菌培养液放入28℃下恒温分离24-72小时，得到仅含有天然果酒酵母的可吸水的无菌块状物料。/n

【技术特征摘要】
1.百香果天然果酒酵母的分离方法，其特征在于，包括如下步骤：
步骤一、总菌培养：取百香果果皮，切粒后放入液态真菌培养基中，20-30℃下恒温培养2-5天，得到含有多种真菌的总菌培养液；
步骤二、分离培养基的制备：在液态真菌培养基中加入无水乙醇，使得液态真菌培养基的酒精度为10-17°，装入容器中，加塞、包扎好后放入高压蒸汽灭菌锅中，100Pa、121℃下灭菌20-30分钟，制得分离培养基；
步骤三、分离：取可吸水的无菌块状物料放入分离培养基中浸湿后悬挂在步骤一所述总菌培养液上方，使可吸水的无菌块状物料的底部刚好触碰到总菌培养液的液面，将含有可吸水的无菌块状物料的总菌培养液放入28℃下恒温分离24-72小时，得到仅含有天然果酒酵母的可吸水的无菌块状物料。


2.如权利要求1所述的百香果天然果酒酵母的分离方法，其特征在于，步骤三后还包括步骤四、扩大培养：取出可吸水的无菌块状物料，涂抹在平板菌种培养基上，28℃下培养48-72小时后取出，得到分离好的天然果酒酵母菌种。


3.如权利要求2所述的百香果天然果酒酵母的分离方法，其特征在于，步骤四扩大培养后，还将平板菌种培养基置于冰箱中冷藏保存...

【专利技术属性】
技术研发人员：严汉彬，韩珍，黄淑君，张舒橙，罗巧凤，徐艳，邱元凯，李翰，
申请(专利权)人：河源职业技术学院，
类型：发明
国别省市：广东;44