一种阻断剂及其在免疫检测中的应用制造技术

本发明专利技术涉及一种阻断剂及其在免疫检测中的应用，本发明专利技术提供了一种金属离子阻断剂，该阻断剂以聚天冬氨酸作为阻断剂分子，用于降低或消除补体对抗原‑抗体反应的干扰，和/或提高免疫检测结果的准确性。该金属离子阻断剂具有无毒无磷，易于被生物降解等优点，是一种新型的、绿色的环境友好型阻断剂。本发明专利技术还提供了一种免疫检测方法，在聚天冬氨酸或其药学上可接受的盐存在的条件下进行抗原‑抗体反应。其中，聚天冬氨酸或其盐可与金属离子产生强结合作用，同时可抑制血小板凝聚，应用于免疫检测中时，可抑制补体激活，且对抗体抗原无干扰作用，从而有效降低补体对免疫检测的干扰，提高检测结果的准确性。

A blocking agent and its application in immunoassay

【技术实现步骤摘要】
一种阻断剂及其在免疫检测中的应用
本专利技术涉及生物医学检测
，具体涉及一种阻断剂及其在免疫检测中的应用。
技术介绍
基于抗体抗原的免疫检测应用广泛，根据标记物不同衍生出放射免疫、酶联免疫和化学发光等方法，其中化学发光法具有灵敏度高、快速、稳定、易于操作、方法灵活多样等优点。但是在临床中，免疫检测结果的准确性往往在不同程度上会受到血清样本中干扰物的影响。血清干扰物可分为内源性干扰和外源性干扰，内源性干扰包括人抗动物抗体(如人抗鼠抗体(HAMA))、类风湿因子(RF)、嗜异性抗体、补体、自身抗体、黄疸、高脂等；外源性干扰包括溶血、标本染菌、保持时间过长、血液凝固不彻底、离心不充分等。其中血清补体是一个重要的干扰因素。在磁微粒化学发光反应中，抗体固相磁珠、生物素化抗体与链霉亲和素磁珠反应或抗体与抗原结合后，抗体构象会发生改变，暴露其Fc段补体C1q结合位点。激活的补体复合物C1由18聚体C1q、两个C1r和两个C1s分子组成：C1q(C1qA-C1qB-C1qC)6-(C1r-C1s)2，因此一个补体分子可以结合多个抗体。在直接双抗体夹心反应中，又分为一步法及二步法。一步法是俘获抗体、抗原及检测抗体一起反应，在此反应过程中，如果有血清补体激活，补体C1可与多个抗体结合，会造成假阳性反应(C1既结合俘获抗体又结合检测抗体)或假阴性反应(C1与多个俘获抗体结合、或C1与多个检测抗体结合或C1与抗体结合干扰了抗体与抗原的结合)；二步法是俘获抗体先与抗原反应，在此反应过程中，如果有血清补体激活，补体C1可与多个俘获抗体结合，会造成假阴性反应。在间接免疫反应中，激活的补体C1与多个被检抗体结合，也可能阻碍检测二抗与被检抗体的结合，造成假阴性反应。因此，为了获得更准确的免疫检测结果，在检测抗原或抗体的免疫反应试剂中添加一些阻断剂阻碍补体激活，能够减少补体对检测结果的干扰。成人血清钙含量约2.1～2.8mmol/L。补体C1激活及其复合物的形成需要Ca2+离子，金属离子阻断剂可以螯合血清中的钙、镁等离子，从而阻断C1复合物形成，阻止补体激活级联反应。因此，在抗原抗体免疫反应中添加一定量金属离子阻断剂，能够消除或减弱补体对免疫反应的干扰。金属离子阻断剂可以通过阻断剂分子与金属离子的强结合作用，将金属离子包合到阻断剂内部，变成稳定的，分子量更大的化合物，从而阻止金属离子起作用。常用的金属离子阻断剂包括：乙二胺四乙酸(EDTA)、二亚乙基三胺五乙酸(DTPA)、氨基三乙酸(NTA)、三聚磷酸钠(STPP)等。这些传统阻断剂使用广泛，但是存在诸多环保问题。例如：EDTA、DTPA及其盐的生物降解性极差，欧洲一些国家禁止或限制使用EDTA、DTPA。此外，EDTA作为常用金属螯合剂，可使原有的冷抗血小板自身抗体被激活，导致血小板互相聚集、堆集，发生卫星现象，进而可能对免疫反应及后续显色或发光结果造成影响。NTA是一种可疑致癌物，其使用受到法规限制。STPP含磷丰富，会加剧湖泊和河流的富营养化，从而严重影响生态环境的平衡。还有一些金属离子阻断剂，如聚丙稀酸类，本身无毒，但是可以长期存在于环境中，无法被微生物降解。综上，现有技术中的金属离子阻断剂都存在各种环保问题，不符合“绿色化学”的理念。本领域技术人员致力于开发一种新的无毒、无污染、易降解的金属离子阻断剂，和基于其的免疫检测方法。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种阻断剂及其在免疫检测中的应用。本专利技术提供了一种无毒、对环境无污染，且具有良好生物降解性的金属离子阻断剂，该金属离子阻断剂与金属离子可产生强结合作用，同时还可以抑制血小板凝聚，应用于免疫检测中时，对抗体抗原反应无任何干扰作用。为此，本专利技术的第一方面，提供了一种金属离子阻断剂，包括聚天冬氨酸或其药学上可接受的盐，其中，聚天冬氨酸或其药学上可接受的盐作为金属离子阻断剂分子。金属离子阻断剂可以通过金属离子阻断剂分子与金属离子的强结合作用，将金属离子包合到阻断剂分子内部，变成稳定的、分子量更大的化合物，从而抑制补体激活，进而消除和/或减少补体激活对免疫检测结果的干扰。进一步，所述金属离子阻断剂还包括缓冲液，所述缓冲液的pH为6.8-8.0，例如6.8、7.0、7.2、7.4、7.5、7.6、7.8、8.0。进一步，所述缓冲液为磷酸盐缓冲液或Tris缓冲液。进一步，所述缓冲液的浓度为10-100mM。应当知晓，本专利技术提供的金属离子阻断剂可根据具体应用场景，使用相应的缓冲液，只要所述缓冲液能为聚天冬氨酸或其药学上可接受的盐螯合金属离子反应提供必要环境即可，且所述缓冲液对所述金属离子阻断剂应用的体系不产生干扰。本专利技术的第二方面，提供了一种免疫检测方法：在聚天冬氨酸或其药学上可接受的盐存在的条件下进行抗原-抗体反应。进一步，所述聚天冬氨酸或其药学上可接受的盐降低或消除补体对抗原-抗体反应的干扰，和/或提高免疫检测结果的准确性。进一步，所述聚天冬氨酸或其药学上可接受的盐的使用浓度为2-40mg/L，优选为4-20mg/mL，例如4mg/mL、6mg/mL、8mg/mL、10mg/mL、12mg/mL、14mg/mL、16mg/mL、18mg/mL、20mg/mL，进一步优选为8-10mg/L。本专利技术提供的免疫检测方法可适用于诊断或非诊断目的的免疫检测。由于聚天冬胺酸或其药学上可接受的盐应用于免疫检测中时，对抗体抗原反应无任何干扰作用，因此，本专利技术提供的免疫检测方法适用于所有包含抗原-抗体反应的免疫检测。进一步，所述抗原-抗体反应包括凝集免疫反应、沉淀免疫反应、标记免疫反应等，其中标记免疫反应又包括酶标记免疫反应、放射标记免疫反应、荧光标记免疫反应、量子点标记免疫反应、化学发光免疫检测等。进一步，所述免疫检测包括间接免疫检测、双抗夹心免疫检测。在具体实施方式中，所述的免疫检测方法包括以下步骤：(1)将待测样本与含有聚天冬氨酸或其药学上可接受的盐的缓冲液混合均匀；(2)向步骤(1)得到的反应液中加入偶联亲和素的磁珠、生物素化抗体和酶标抗体，混匀后进行孵育、洗涤；(3)向步骤(2)得到的反应物中加入底物，孵育后进行检测。酶标抗体可与待测抗原发生特异性结合，且具有酶的活性，加入对应底物后，底物可被酶催化为有色产物或发光产物，通过对所述产物进行检测，即可实现对待测抗原的定性或定量分析。进一步，所述酶为碱性磷酸酶或辣根过氧化物酶；所述底物为DAB、OPD、ABTS、TMBS、鲁米诺或异鲁米诺、AMPPD。进一步，所述孵育的温度为25-37℃，优选为37℃。进一步，所述孵育的时间为1-10min，例如1min、3min、5min、7min、10min，优选为3-10min。进一步，所述洗涤所用的溶液的pH为7.0-7.4，优选为7.4。进一步，所述洗涤所用的溶液为Tris缓冲液。进一步，所述免疫检测的样本为血液、血清、血浆、组织液、淋巴液、脑脊液、尿液或房水等，本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种免疫检测方法，其特征在于，在聚天冬氨酸或其药学上可接受的盐存在的条件下进行抗原-抗体反应。/n

【技术特征摘要】
1.一种免疫检测方法，其特征在于，在聚天冬氨酸或其药学上可接受的盐存在的条件下进行抗原-抗体反应。


2.如权利要求1所述的免疫检测方法，其特征在于，所述聚天冬氨酸或其药学上可接受的盐降低或消除补体对抗原-抗体反应的干扰，和/或提高免疫检测结果的准确性。


3.如权利要求1所述的免疫检测方法，其特征在于，所述聚天冬氨酸或其药学上可接受的盐的使用浓度为2-40mg/L，优选为4-20mg/mL，进一步优选为8-10mg/L。


4.如权利要求1所述的免疫检测方法，其特征在于，所述抗原-抗体反应包括凝集免疫反应、沉淀免疫反应、标记免疫反应；所述标记免疫反应包括酶标记免疫反应、放射标记免疫反应、荧光标记免疫反应、量子点标记免疫反应、化学发光免疫检测。


5.如权利要求1所述的免疫检测方法，其特征在于，所述免疫检测包括间接免疫检测、双抗夹心免疫检测。


6.如权利要求1所述的免疫检测方法，其特征在于包括以下步骤：
(1)将待测样本与含有聚天冬氨酸或其药学上可接受的盐缓冲...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈立勇，刘仁源，张瑜，邓晓侠，熊灿，杨小枘，
申请(专利权)人：东莞市东阳光诊断产品有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44