一种脐带间充质干细胞贮藏液制造技术

本发明专利技术提供了一种脐带间充质干细胞贮藏液及其制备方法，属于干细胞保存技术领域，本发明专利技术中细胞贮藏液包括胎牛血清85‑93％(v/v)、二甲基亚砜5‑12％(v/v)、低分子肝素钙注射液0.4‑0.8％(v/v)、低分子肝素钠注射液1‑1.2％(v/v)、花青素0.2‑0.4％(w/v)和表儿茶素0.4‑0.6％(w/v)，通过脐带间充质干细胞的分离、培养以及传代培养，进而将脐带间充质干细胞放于贮藏液中贮藏，能够保持干细胞的活性与存活率，与此同时，可以提高贮藏稳定性、延长贮藏时间并降低风险。

A storage solution of umbilical cord mesenchymal stem cells

【技术实现步骤摘要】
一种脐带间充质干细胞贮藏液
本专利技术涉及干细胞保存
，具体涉及一种脐带间充质干细胞贮藏液。
技术介绍
脐带血是胎儿娩出、脐带结扎并离断后残留在胎盘和脐带中的血液，脐带间充质干细胞是指存在于新生儿脐带组织中的一种多功能干细胞，它能分化成许多种组织细胞，具有广阔的临床应用前景。通常，脐带间充质干细胞在体外培养会不断分裂、生长，进而衰老，导致功能丧失、失去多项分化潜能，因此，制备出的干细胞通常不能即时应用时，需进行贮藏，而贮藏干细胞的贮藏液对于细胞的活性以及存活率有着极大的影响，这将进一步影响临床治疗的安全性和有效性。目前，脐带间充质干细胞贮藏液多使用生理盐水，但生理盐水偏酸性，同时，此类保存液保存细胞时细胞的活性以及存活率均较差，只适用于细胞的短时间贮藏，而不适合其长时间贮藏。此外，二甲基亚砜和胎牛血清也是极为常用的细胞贮藏液，其中，二甲基亚砜能够防止细胞冻伤，但对细胞存在一定的毒性，使干细胞造成损伤，进而影响贮藏效果，因此常加入胎牛血清作为保护剂以降低二甲基亚砜对细胞的毒害并提高细胞存活率，但动物血清常常存在病菌感染的风险，导致不本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种脐带间充质干细胞贮藏液，其特征在于，所述脐带血造血干细胞贮藏液，包括：胎牛血清85-93％(v/v)、二甲基亚砜5-12％(v/v)、低分子肝素钙注射液0.4-0.8％(v/v)、低分子肝素钠注射液1-1.2％(v/v)、花青素0.2-0.4％(w/v)和表儿茶素0.4-0.6％(w/v)。/n

【技术特征摘要】
1.一种脐带间充质干细胞贮藏液，其特征在于，所述脐带血造血干细胞贮藏液，包括：胎牛血清85-93％(v/v)、二甲基亚砜5-12％(v/v)、低分子肝素钙注射液0.4-0.8％(v/v)、低分子肝素钠注射液1-1.2％(v/v)、花青素0.2-0.4％(w/v)和表儿茶素0.4-0.6％(w/v)。


2.根据权利要求1所述的脐带间充质干细胞贮藏液，其特征在于：所述脐带间充质干细胞贮藏液，包括：胎牛血清87.2-89.55％(v/v)、二甲基亚砜8-10％(v/v)、低分子肝素钙注射液0.6-0.7％(v/v)、低分子肝素钠注射液1.05-1.15％(v/v)、花青素0.3-0.35％(w/v)和表儿茶素0.5-0.6％(w/v)。


3.根据权利要求1所述的脐带间充质干细胞贮藏液，其特征在于：所述低分子肝素钙注射液与所述低分子肝素钠注射液的重量比为1:1.6-2。


4.如权利要求1-3任一项所述的脐带间充质干细胞贮藏液的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：
(1)脐带间充质干细胞的分离、培养：将人脐带组织使用乙醇浸泡，再用生理盐水洗涤3次以上，将人脐带组织两端各减去1cm丢弃，剩余部分使用盐水洗涤3次以上至洗涤液澄清，剪成小段并使用生理盐水洗涤3次以上，沿人脐带组织静脉腔剪口并向静脉血管边缘纵向撕开，剖离1根静脉血管和2根动脉血管，同时去除羊膜，撕取华通氏胶并将其置于生理盐水中洗涤3次以上，剪碎后转移至完全培养基培养，待细胞生长至80-90％融合状态时，用胰蛋白酶消化传代细胞，得到原代细胞；
(2)脐带间充质干细胞的传代培养：向步骤(1)中的原代细胞培养液中加入生理盐水，洗涤组织贴壁面，加入胰蛋白酶，均匀浸润细胞贴壁面，孵育，待细胞变圆后加入终止液，吸出细胞悬液后加入生理盐水，离心，弃去上清液，使用生理盐水将沉淀洗涤，使用完全培养基重悬计数，培养，得到传代细胞；
(3)脐带间充质干细胞贮藏液的制备：将配方用量二甲基亚砜与胎牛血清的混合液滴加至胎牛血清中，再加入配方用量低分子肝素钙注射液、低分子肝素钠注射液、花青素和表儿茶素混匀，得到...

【专利技术属性】
技术研发人员：王健，郑春兵，王成，张浪，廖雨，
申请(专利权)人：湖南源品细胞生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：湖南;43