一组miRNA及其在生物靶向治疗乳腺癌中的应用制造技术

本发明专利技术涉及一组miRNA及其在生物靶向治疗乳腺癌中的应用。所述miRNA包括：miR‑9‑5p,miR‑10b‑5p,miR‑21‑5p,miR‑23a‑3p,miR‑29a‑3p,miR‑155‑5p,miR‑222‑3p,miR‑301a‑3p,miR‑373‑3p。干扰所述miRNA的表达和功能，能够抑制TNBC和非TNBC细胞的增殖转移活性；同时干扰上述9种miRNA的功能，可以明显抑制TNBC和非TNBC癌细胞的增殖活性，显著抑制TNBC细胞裸鼠移植瘤模型的肿瘤生长。本发明专利技术为乳腺癌，尤其是高度恶性的难治性TNBC提供了一种新的候选治疗策略。

A group of miRNA and its application in biological targeted therapy of breast cancer

【技术实现步骤摘要】
一组miRNA及其在生物靶向治疗乳腺癌中的应用
本专利技术涉及生物医药和分子生物学
，具体地说，涉及一组miRNA及其在生物靶向治疗乳腺癌中的应用。
技术介绍
乳腺癌是女性癌症死亡的主要原因。近十年，由于联合化疗、内分泌疗法以及针对Her-2靶向治疗的探索与应用，乳腺癌临床治疗的疗效取得了明显改善，死亡率逐年降低。然而，在乳腺癌中有一种类型比较特殊，约占15-20％，表现为癌细胞不表达雌激素受体(Estrogenreceptor，ER)、孕激素受体(Progesteronereceptor，PR)和人表皮生长因子受体2(humanepidermalfactorreceptor，HER-2)三项标志物，因此称为三阴性乳腺癌(TNBC)。TNBC对激素疗法不敏感，目前也无靶向药物可用，因此细胞毒性化疗是TNBC唯一可选的治疗方案。总的来说，与其他乳腺癌亚型相比，TNBC患者临床治疗疗效差，整体预后不良，亟需研发有效的治疗方法。miRNAs分子小、数量多、分布广，是基因调控网络中的重要核心成分。人类相当数量的基因受miRNAs的调控，并且与人类很多重大疾病(如肿瘤、艾滋病、心血管系统疾病、神经系统疾病等)的发生发展密切相关。目前有大量文献表明miRNAs在乳腺癌中促进或抑制瘤细胞生长与分化，在乳腺癌的基因诊断、治疗和指导乳腺癌个体化用药方面具有一定的临床应用潜力。例如：专利文献CN109439748A，公开日2019.03.08，公开了miR-9-5p作为乳腺癌远处转移监测标志物的应用。该专利技术证实了miR-9-5p在乳腺癌患者中表达水平明显升高，且可分泌到血清中，而且血清中miR-9-5p水平与乳腺癌远处转移有密切联系，在乳腺癌远处转移患者血清中较乳腺癌非远处转移患者血清显著升高。2018年华南理工大学硕士学位论文《基于大数据的乳腺癌早期诊断microRNA标志物筛查与验证》，从TCGA癌症数据库中下载有临床病理分期信息的409例早期乳腺癌组织样本和7例作为健康对照的癌旁样本的高通量microRNA-seq数据(共包含2589个microRNA的表达信息)，去除数据缺失率大于10％的microRNA后，进一步根据表达差异分析结果，p-value<0.05、表达变化倍数|fold-change|>3.5以及对照组样本平均表达丰度mean_C>100初步筛选出20个有望能作为早期诊断标志物的候选microRNA：miR-99a-5p、miR-486-5p、miR-451a、miR-378a-5p、miR-378a-3p、miR-375、miR-337-3p、miR-21-5p、miR-21-3p、miR-203a-3p、miR-200a-5p、miR-183-5p、miR-182-5p、miR-145-5p、miR-144-5p、miR-141-5p、miR-141-3p、miR-139-5p、miR-125b-5p、miR-10b-5p。Si等(SIML，ZHUS，WUH，etal.miR-21-mediatedtumorgrowth[J].Oncogene，2007，26(19):2799-2803.)设计了针对miRNA-21的反义寡核苷酸转导入乳腺癌细胞株MCF-7中，细胞生长显著受到抑制。然而，确定关键的miRNAs，构建高效的基于miRNAs的乳腺癌药物，尤其针对难治性乳腺癌TNBC的药物亟待研究。
技术实现思路
本专利技术的目的是针对现有技术中的不足，提供一种生物靶向治疗乳腺癌的miRNA及其应用。第一方面，本专利技术提供了miRNA组合或miRNA组合的抑制剂在制备治疗乳腺癌的药物中的应用，所述miRNA组合的组成为：miR-9-5p,miR-10b-5p,miR-21-5p,miR-23a-3p,miR-29a-3p,miR-155-5p,miR-222-3p,miR-301a-3p和miR-373-3p。作为一个优选例，所述miRNA组合的抑制剂是能降低miRNA组合中各miRNA的表达水平、活性、稳定性或有效作用时间的物质。更优选地，所述miRNA组合的抑制剂选自：a)核酸抑制物、蛋白抑制物、核酸酶或核酸结合分子；b)携带或表达a)中任一者的质粒载体；或c)携带或表达a)中任一者的宿主。更优选地，所述miRNA组合的抑制剂选自：a)干扰性LncRNA，其中，编码所述干扰性LncRNA的序列为SEQIDNO.10中第16-189bp所示序列的n个拷贝，n为大于等于1的整数；b)表达a)的质粒载体；或c)携带a)的病毒。作为另一优选例，所述乳腺癌为三阴性乳腺癌。第二方面，本专利技术提供了一种干扰性LncRNA，编码所述LncRNA的序列为SEQIDNO.10中第16-189bp所示序列的n个拷贝，n为大于等于1的整数。第三方面，本专利技术提供了编码如上所述LncRNA的核酸分子。作为一个优选例，所述核酸分子其序列包含如SEQIDNO.10中第16-189bp所示的序列。第四方面，本专利技术提供了一种病毒，所述病毒的基因组中整合有表达如上所述LncRNA的表达盒。本专利技术优点在于：1、本专利技术通过乳腺癌组织和乳腺癌细胞系的miRNAMicroarray和qRT-PCR筛选，在乳腺癌差异表达的miRNA中确定了9个与TNBC相关的高表达的OncomiRs(miR-9-5p,miR-10b-5p,miR-21-5p,miR-23a-3p,miR-29a-3p,miR-155-5p,miR-222-3p,miR-301a-3p,miR-373-3p)。同时通过miRanda-mirSVR数据库、文献报道及mRNAMicroarray分析预测其代表性靶基因(PTEN、PDCD4、FOXO3a、RhoA、TRPS1)，并在细胞学实验中证实。干扰这些OncomiR的表达和功能，能够上调其靶基因表达抑癌因子，抑制TNBC和非TNBC细胞的增殖转移活性。2、本专利技术通过人工设计一条干扰性lncRNA(lncRNAi9)，在肿瘤特异性增殖腺病毒载体的介导下高拷贝高效率表达，能够同时干扰9种OncomiR功能，从而建立起一种TNBC治疗策略。肿瘤特异性增殖腺病毒AdSVP-lncRNAi9感染乳腺癌细胞并在细胞中高拷贝增殖复制，最高可达5万倍以上，其表达的干扰性lncRNA(lncRNAi9)在细胞内形成海绵状网架结构，竞争性结合多个OncomiR抑制其功能，保护其所有靶基因，使靶基因表达抑癌因子，发挥抗癌效应。细胞实验证实，AdSVP-lncRNAi9感染后的TNBC和非TNBC癌细胞中，OncomiR靶基因PTEN、PDCD4、FOXO3a、RhoA、TRPS1表达水平明显上调，癌细胞EMT发生逆转，癌细胞增殖活性受到明显抑制。通过建立TNBC细胞的裸鼠移植瘤模型，验证该TNBC治疗策略的疗效。结果发现，AdSVP-lncRNAi9抗癌效果明显，移植瘤治疗后35天，抑瘤率73.84％。<本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.miRNA组合或miRNA组合的抑制剂在制备治疗乳腺癌的药物中的应用，其特征在于，所述miRNA组合的组成为：miR-9-5p,miR-10b-5p,miR-21-5p,miR-23a-3p,miR-29a-3p,miR-155-5p,miR-222-3p,miR-301a-3p和miR-373-3p。/n

【技术特征摘要】
1.miRNA组合或miRNA组合的抑制剂在制备治疗乳腺癌的药物中的应用，其特征在于，所述miRNA组合的组成为：miR-9-5p,miR-10b-5p,miR-21-5p,miR-23a-3p,miR-29a-3p,miR-155-5p,miR-222-3p,miR-301a-3p和miR-373-3p。


2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述miRNA组合的抑制剂是能降低miRNA组合中各miRNA的表达水平、活性、稳定性或有效作用时间的物质。


3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述miRNA组合的抑制剂选自：
a)核酸抑制物、蛋白抑制物、核酸酶或核酸结合分子；
b)携带或表达a)中任一者的质粒载体；或
c)携带或表达a)中任一者的宿主。


4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述miRNA组合的抑制...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵敏，昂琳，王瑾，胡红光，郑丽，黄金，孙斌，
申请(专利权)人：合肥市第二人民医院，
类型：发明
国别省市：安徽;34