PHB2基因或蛋白的抑制剂在制备抗猪圆环病毒2型药物中的应用制造技术

本发明专利技术公开了一种PHB2基因或蛋白的抑制剂在制备抗猪圆环病毒2型药物中的应用。本发明专利技术的PHB2基因或蛋白的抑制剂在制备抗猪圆环病毒2型药物中的应用，通过间接免疫荧光试验检测PCV2在PK‑15细胞中的增殖变化，检测PCV2感染PK‑15细胞后PHB2 mRNA的动态变化，和鉴定在PHB2基因或蛋白的抑制剂转染PK‑15细胞中PCV2 Cap蛋白表达。结果表明，PHB2在正常及PCV2感染的PK‑15细胞中均有效表达。PCV2可显著影响PK‑15细胞中PHB2转录，而且PHB2对PCV2病毒复制具有调节作用，下调PHB2的表达，即PHB2基因敲除或蛋白表达下调，能明显抑制PCV2复制，对阐明PCV2致病机理和研究新的抗病毒药物具有重要意义。

【技术实现步骤摘要】
PHB2基因或蛋白的抑制剂在制备抗猪圆环病毒2型药物中的应用
本专利技术涉及生物
，特别地，涉及一种PHB2基因或蛋白的抑制剂在制备抗猪圆环病毒2型药物中的应用。
技术介绍
猪圆环病毒(porcinecircovirus，PCV)属于圆环病毒科圆环病毒属，是无囊膜的环状单链DNA病毒(直径17nm)。目前在猪群中已鉴定出PCV1、PCV2和PCV3。其中，PCV2临床或亚临床感染被认为是猪圆环病毒病(porcinecircovirusdiseasesandporcinecircovirus-associateddiseases，PCVD/PCVAD)的主要原因，PCVD/PCVAD传染性强、流行范围广，不同猪(群或场)的PCVAD发病率和严重程度存在差异，该疾病日趋复杂，其代表性特征主要是猪皮炎和肾病综合征(Porcinedermatitisandnephropathysyndrome，PDNS)、断奶仔猪多系统衰竭综合征(Post-weaningmultisystemicwastingsyndrome，PMWS)以及猪呼吸系统疾病综合征(Porcinerespiratorydiseasecomplex，PRDC)，还可引起繁殖障碍等，严重危害全球养殖业。PCV2Cap蛋白(Capsidprotein)是PCV2唯一的核衣壳蛋白，也是主要免疫原性蛋白，基于PCV2Cap蛋白组装的病毒样颗粒(Virus-likeparticles，VLPs)亚单位疫苗可应用于猪场PCV2的预防。迄今为止，PCVD/PCVAD的确切机制还有待阐明，加上临床上PCV2基因组的高突变率和混合感染问题日益严重，使防控PCV2流行面临严峻挑战。Shuang等在研究泛素-蛋白酶体系统(UPS)与PCV2复制的互作时发现，其蛋白酶体抑制剂(MG132和lactacystin)显著降低PCV2早期复制滴度，UPS可能以细胞周期依赖的方式降低病毒蛋白表达和RNA转录，表明PCV2复制效率与UPS密切相关。Liu等利用Hsp90抑制剂(17-AAG)腹腔注射小鼠后发现，17-AAG能够显著降低血液和组织中PCV2病毒载量，可降低PCV2感染小鼠血液和组织中的病毒载量，表明Hsp90与PCV2复制密切相关。Wang等研究发现波形蛋白(Vimentin)可以与PCV2Cap蛋白之间的相互作用，并对PCV2在PK-15细胞中的复制有一定的抑制作用。目前PCV2感染与宿主细胞之间的相互作用网络还不是十分清楚，而PCV2与宿主细胞内蛋白分子互作的研究报道相对较少。抗增殖蛋白(prohibitins，PHBs)是一种高度保守和结构非常稳定的蛋白质家族(包括PHB1和PHB2等)，PHBs广泛分布于各种生物细胞，呈现不同细胞定位，主要存在于线粒体内膜，也少量分布于细胞质膜和细胞核。PHBs是细胞中重要的多功能蛋白，直接参与调控细胞增殖、凋亡和分化等多种细胞生物学进程，与肿瘤、糖尿病和肥胖症等疾病密切相关。而PHB2是PHBs家族中的重要成员，是线粒体与细胞核间相互交流的重要媒介。
技术实现思路
本专利技术提供了一种PHB2基因或蛋白的抑制剂在制备抗猪圆环病毒2型药物中的应用，解决如何抑制猪圆环病毒2型的复制的技术问题。本专利技术采用的技术方案如下：一种PHB2基因或蛋白的抑制剂在制备抗猪圆环病毒2型药物中的应用。进一步地，抑制剂选择以能够抑制PHB2蛋白表达或基因转录的小干扰RNA(siRNA)、双链RNA(dsRNA)、短发夹RNA(shRNA)或反义寡核苷酸；或能表达或形成siRNA、dsRNA、shRNA或反义寡核苷酸的构建物。进一步地，siRNA包括PHB2siRNA-1或PHB2siRNA-2；PHB2siRNA-1的靶序列如SEQIDNO：1所示，或者，PHB2siRNA-2的靶序列如SEQIDNO：2所示。进一步地，shRNA的编码序列正义链如SEQIDNO：3所示，反义链如SEQIDNO：4所示。根据本专利技术的另一方面，还提供了一种抑制猪圆环病毒2型的siRNA的靶序列，siRNA包括PHB2siRNA-1或PHB2siRNA-2；PHB2siRNA-1的靶序列如SEQIDNO：1所示，或者，PHB2siRNA-2的靶序列如SEQIDNO：2所示。根据本专利技术的另一方面，还提供了一种抑制猪圆环病毒2型的shRNA分子，shRNA分子的编码序列正义链如SEQIDNO：3所示，反义链如SEQIDNO：4所示。根据本专利技术的另一方面，还提供了一种含有上述抑制猪圆环病毒2型的shRNA分子的shRNA表达质粒。根据本专利技术的另一方面，还提供了一种药物组合物，包括上述siRNA的靶序列、shRNA分子、shRNA表达质粒中的一种，还包含药学可接受的载体和/或赋形剂。根据本专利技术的另一方面，还提供了一种用于抑制猪圆环病毒2型复制的试剂盒，包括上述siRNA的靶序列、上述shRNA分子、上述shRNA表达质粒中的一种。本专利技术具有以下有益效果：本专利技术的PHB2基因或蛋白的抑制剂在制备抗猪圆环病毒2型药物中的应用，通过间接免疫荧光试验检测PCV2在PK-15细胞中的增殖变化，检测PCV2感染PK-15细胞后PHB2mRNA的动态变化，和鉴定在PHB2基因或蛋白的抑制剂转染PK-15细胞中PCV2Cap蛋白表达。结果表明，PHB2在正常及PCV2感染的PK-15细胞中均有效表达。PCV2可显著影响PK-15细胞中PHB2转录，而且PHB2对PCV2病毒复制具有调节作用，下调PHB2的表达，即PHB2基因敲除或蛋白表达下调，能明显抑制PCV2的复制，对阐明PCV2致病机理和研究新的抗病毒药物具有重要意义。除了上面所描述的目的、特征和优点之外，本专利技术还有其它的目的、特征和优点。下面将参照附图，对本专利技术作进一步详细的说明。附图说明构成本申请的一部分的附图用来提供对本专利技术的进一步理解，本专利技术的示意性实施例及其说明用于解释本专利技术，并不构成对本专利技术的不当限定。在附图中：图1是本专利技术的PCV2在PK-15细胞中的增殖情况示意图；图2是本专利技术的gC1qR和PHB2荧光定量PCR引物溶解曲线图；图3是本专利技术的gC1qR和PHB2荧光定量PCR扩增曲线图；图4是本专利技术的PCV2感染PK-15细胞后gC1qR基因mRNA水平的变化结果示意图；图5是本专利技术的PCV2感染PK-15细胞后PHB2基因mRNA水平的变化结果示意图；图6是本专利技术的siRNA转染PK-15细胞后PHB2基因mRNA水平的变化结果示意图；图7是本专利技术的siRNA转染PK-15细胞后PCV2Cap蛋白Westernblot鉴定图；图8是本专利技术的siRNA转染PK-15细胞后PCV2Cap蛋白的变化结果示意图；图9是本专利技术的siRNA转染PK-15细胞后IFA检测结果图；图10是本专利技术的shRNA设计示意图；图11是本本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种PHB2基因或蛋白的抑制剂在制备抗猪圆环病毒2型药物中的应用。/n

【技术特征摘要】
1.一种PHB2基因或蛋白的抑制剂在制备抗猪圆环病毒2型药物中的应用。


2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述抑制剂选择以能够抑制PHB2蛋白表达或基因转录的小干扰RNA(siRNA)、双链RNA(dsRNA)、短发夹RNA(shRNA)或反义寡核苷酸；或能表达或形成所述siRNA、dsRNA、shRNA或反义寡核苷酸的构建物。


3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，
所述siRNA包括PHB2siRNA-1或PHB2siRNA-2；
所述PHB2siRNA-1的靶序列如SEQIDNO：1所示，或者
所述PHB2siRNA-2的靶序列如SEQIDNO：2所示。


4.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，
所述shRNA的编码序列正义链如SEQIDNO：3所示，反义链如SEQIDNO：4所示。


5.一种抑制猪圆环病毒2型的siRNA的靶序列，其特征在于，
所...

【专利技术属性】
技术研发人员：王乃东，蒋一凡，邹亚文，余婉婷，张佳鑫，何庆，
申请(专利权)人：湖南农业大学，
类型：发明
国别省市：湖南;43