一种基于RPA方法快速检测非洲猪瘟病毒的引物组和探针、试剂盒以及检测方法技术

本发明专利技术公开了一种基于RPA方法快速检测非洲猪瘟病毒的引物组和探针、试剂盒以及检测方法，引物组和探针包括引物组和探针Probe；所述引物组包括正向引物RPA‑F和反向引物RPA‑R；引物组和探针Probe的总扩增产物大小为267bp；所述试剂盒，包括所述的引物组和探针；所述检测方法包括步骤：合成引物组和探针；RPA‑LFD检测方法的建立。本发明专利技术不需要复杂精细的仪器设备，减少了资金的投入；实施过程简单易操作，不需要专门的检测人员就可以现场进行检测；检测快速准确，能够实现非洲猪瘟的现场可视化检测，对非洲猪瘟病毒的防控具有重要的意义。

Primer set, probe, kit and detection method for rapid detection of African swine fever virus based on RPA

【技术实现步骤摘要】
一种基于RPA方法快速检测非洲猪瘟病毒的引物组和探针、试剂盒以及检测方法
本专利技术属于非洲猪瘟病毒检测
，具体涉及一种基于RPA方法快速检测非洲猪瘟病毒的引物组和探针、试剂盒以及检测方法。
技术介绍
重组酶聚合酶扩增(RecombinasePolymeraseAmplification，RPA)，被称为是可以替代PCR的核酸检测技术。RPA技术主要依赖于三种酶：能结合单链核酸(寡核苷酸引物)的重组酶、单链DNA结合蛋白(SSB)和链置换DNA聚合酶。重组酶与引物结合形成的蛋白-DNA复合物，能在双链DNA中寻找同源序列。一旦引物定位了同源序列，就会发生链交换反应形成并启动DNA合成，对模板上的目标区域进行指数式扩增。被替换的DNA链与SSB结合，防止进一步替换。在这个体系中，由两个相对的引物起始一个合成事件。整个过程进行得非常快，一般可在十分钟之内获得可检出水平的扩增产物。常规PCR必须经过变性、退火、延伸三个步骤，而PCR仪本质上就是一个控制温度升降的设备。RPA反应的最适温度在37℃-42℃之间，无需变性，在常温下即本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种基于RPA方法快速检测非洲猪瘟病毒的引物组和探针，其特征在于：包括引物组和探针Probe；所述引物组包括正向引物RPA-F和反向引物RPA-R；/n正向引物RPA-F序列：/n5’-ATTCTRATGATAAATGGCACTCCACTTCCGGC-3’；/n反向引物RPA-R序列：/n5’-CCTACTCGTCAAACGTTTGTTCTGGCCCTAGCTT-3’；/n探针Probe的核苷酸序列由两部分连接而成，分别为第一部分和第二部分，其中第一部分的核苷酸序列为：/n第一部分的序列：/n5’-AATGAWCAAACGAGTCCTCCCGCCTCAGGAA-3’；/n第二部分的序列：/...

【技术特征摘要】
1.一种基于RPA方法快速检测非洲猪瘟病毒的引物组和探针，其特征在于：包括引物组和探针Probe；所述引物组包括正向引物RPA-F和反向引物RPA-R；
正向引物RPA-F序列：
5’-ATTCTRATGATAAATGGCACTCCACTTCCGGC-3’；
反向引物RPA-R序列：
5’-CCTACTCGTCAAACGTTTGTTCTGGCCCTAGCTT-3’；
探针Probe的核苷酸序列由两部分连接而成，分别为第一部分和第二部分，其中第一部分的核苷酸序列为：
第一部分的序列：
5’-AATGAWCAAACGAGTCCTCCCGCCTCAGGAA-3’；
第二部分的序列：
5’-AACAAGTGAAACACCTAA-3’；
第一部分的5’端连接羧基荧光素，第二部分的3’端连接磷酸，第一部分的3’端和第二部分的5’端之间通过四氢呋喃连接。


2.根据权利要求1所述的一种基于RPA方法快速检测非洲猪瘟病毒的引物组和探针，其特征在于：反向引物RPA-R序列的5’端用生物素修饰；引物组和探针Probe的总扩增产物大小为267bp。


3.一种基于RPA方法快速检测非洲猪瘟病毒的试剂盒，其特征在于：包括权利要求1或2所述的引物组和探针。


4.一种基于RPA方法快速检测非洲猪瘟病毒的检测方法，其特征在于：包括步骤：
合成以下引物组和探针；
正向引物RPA-F序列：
5’-ATTCTRATGATAAATGGCACTCCACTTCCGGC-3’；
反向引物RPA-R序列：
5’-CCTACTCGTCAAACGTTTGTTCTGGCCCTAGCTT-3’；
探针Probe序列：
5’-FAM-AATGAWCAAACGAGTCCTCCCGCCTCAGGAA[THF]AACAAGTGAAACACCTAA-P-3’；
R...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨鑫，翟亚如，王红宁，马鹏，李豪，崔鹏飞，张兰，
申请(专利权)人：四川大学，
类型：发明
国别省市：四川;51