一种猪瘟病毒与非洲猪瘟病毒双重荧光PCR检测试剂、试剂盒和检测方法技术

一种猪瘟病毒与非洲猪瘟病毒双重荧光PCR检测试剂、试剂盒和检测方法，属于动物病原检测领域。本发明专利技术针对猪瘟病毒5’‑UTR基因和非洲猪瘟病毒P72基因，分别设计并筛选出能覆盖所有毒株，又适合双重检测的引物和探针，包括二对特异性引物和二条特异性探针；本发明专利技术还记载了包含该引物和探针的试剂盒以及利用该引物和探针的PCR检测方法；本发明专利技术通过引物设计和PCR各组分的调整，在敏感性和特异性均不降低的前提下，实现一次分析，同时检测和区分猪瘟病毒与非洲猪瘟病毒的目的，不仅减少了检测的工作量和成本，且能大大节省检测的时间，为疫病防治赢得宝贵时间。

A double fluorescence PCR detection kit, kit and method for CSFV and African CSFV

【技术实现步骤摘要】
一种猪瘟病毒与非洲猪瘟病毒双重荧光PCR检测试剂、试剂盒和检测方法
本专利技术属于动物病原检测领域，具体涉及一种猪瘟病毒与非洲猪瘟病毒双重荧光PCR检测试剂、试剂盒和检测方法。
技术介绍
猪瘟病毒(ClassicalSwineFeverVirus，CSFV)属于黄病毒科，瘟病毒属，是单股正链RNA病毒，是猪瘟的病原，危害家猪和野猪，其他动物不发病。猪瘟是一种急性、热性、高度接触性传染病，主要特征是高温、微血管变性而引起全身出血、坏死、梗塞。猪瘟对猪危害极为严重，会造成养猪业重大损失。非洲猪瘟(Africanswinefever，ASF)是由非洲猪瘟病毒(Africanswinefevervirus，ASFV)感染引起的疣猪、豪猪、野猪以及家养猪的一种烈性传染病。该病毒属于非洲猪瘟病毒科，非洲猪瘟病毒属，是线状双链DNA病毒。猪感染该病毒后，主要临床症状表现为高热、食欲废绝、皮肤发绀，剖检后会发现淋巴结、肾、胃肠黏膜等出血，毒力强的毒株感染猪后，造成的病死率可高达100％。世界动物卫生组织(OIE)将猪瘟和非洲猪瘟列为法定上报的动物疫病，本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种猪瘟病毒与非洲猪瘟病毒双重荧光PCR检测试剂，其特征在于：针对猪瘟病毒5’-UTR基因和非洲猪瘟病毒P72基因，分别设计并筛选出能覆盖所有毒株，又适合双重检测的引物和探针，包括二对特异性引物和二条特异性探针，扩增目的片段长度分别为94bp和249bp，引物和探针序列为：/n猪瘟病毒：/n上游引物CSFV-F：5’-TGCCCAYAGTAGGACTAG-3’/n下游引物CSFV-R：5’-CTACTGACGACTGTCCTG-3’/n探针CSFV-P：5’-TGGCGAGCTCCCTGGGTGGTCTA-3’/n非洲猪瘟病毒：/n上游引物ASFV-F：5’-GATACCACAAGATCT...

【技术特征摘要】
1.一种猪瘟病毒与非洲猪瘟病毒双重荧光PCR检测试剂，其特征在于：针对猪瘟病毒5’-UTR基因和非洲猪瘟病毒P72基因，分别设计并筛选出能覆盖所有毒株，又适合双重检测的引物和探针，包括二对特异性引物和二条特异性探针，扩增目的片段长度分别为94bp和249bp，引物和探针序列为：
猪瘟病毒：
上游引物CSFV-F：5’-TGCCCAYAGTAGGACTAG-3’
下游引物CSFV-R：5’-CTACTGACGACTGTCCTG-3’
探针CSFV-P：5’-TGGCGAGCTCCCTGGGTGGTCTA-3’
非洲猪瘟病毒：
上游引物ASFV-F：5’-GATACCACAAGATCTGCCGT-3’
下游引物ASFV-R：5’-CTGCTCATGGTATCAATCTTATCG-3’
探针ASFV-P：5’-CCACGGGAGGAATACCAACCCAGTG-3’
所述探针CSFV-P和探针ASFV-P在5’端分别标记不同的荧光报告基团，所述探针CSFV-P和探针ASFV-P在3’端均标记相同或不同的荧光淬灭基团。


2.根据权利要求1所述的一种猪瘟病毒与非洲猪瘟病毒双重荧光PCR检测试剂，其特征在于：所述荧光报告基团为FAM或VIC，所述荧光淬灭基团为TAMRA或BHQ。


3.根据权利要求1或2所述的一种猪瘟病毒与非洲猪瘟病毒双重荧光PCR检测试剂，其特征在于：所述探针CSFV-P在5’端标记FAM，在3’端标记TAMRA；所述探针ASFV-P在5’端标记VIC，在3’端标记BHQ。


4.一种猪瘟病毒与非洲猪瘟病毒双重荧光PCR检测试剂盒，其特征在于：包括权利要求1或2或3所述的二对特异性...

【专利技术属性】
技术研发人员：王金涛，孙东波，宋伟红，郑家三，李春秋，邢晓旭，陈国福，刘光前，师庆伟，佟玲，刁彩霞，
申请(专利权)人：黑龙江八一农垦大学，黑龙江省农垦科学院，
类型：发明
国别省市：黑龙;23