【技术实现步骤摘要】
一种剪接果胶酶基因中内含子的方法
本专利技术涉及生物
，具体涉及一种剪接果胶酶基因中内含子的方法。
技术介绍
果胶酶是指分解植物主要成分—果胶质的酶类。果胶酶广泛分布于高等植物和微生物中，根据其作用底物的不同分为两类，一类能催化果胶解聚如内切聚半乳糖醛酸酶，另一类能催化果胶分子中酯水解如果胶酯酶。内切聚半乳糖醛酸酶以随机的方式切割底物，酶解产物主要是半乳糖醛酸三糖和四糖。果胶甲酯酶是一种专一催化果胶分子长链上甲酯基水解，生成低酯果胶的一种酶。它不会减小果胶聚合物的体积，能较好地保持产品的胶凝度。内切聚半乳糖醛酸酶及果胶酯酶具有重要的应用价值，其已被广泛应用于食品、饲料、造纸、纺织和果胶废液处理等领域。主要应用于食品领域，特别是果蔬汁、果酒的加工，其能够显著提高压榨果蔬汁的出汁率，降低果汁果酒的粘度，增加澄清效果，从而保证果汁果酒的品质。因而对内切聚半乳糖醛酸酶及果胶酯酶的研究具有较高的潜在应用价值。
技术实现思路
本专利技术解决的问题在于提供一种剪接塔宾曲霉果胶酶基因中内含子的方法，该方法是利用融合...
【技术保护点】
1.一种剪接果胶酶基因中内含子的方法，其特征在于，所述方法以果胶酶基因作为模板进行融合PCR扩增得到所需基因片段，所述果胶酶基因包括内切聚半乳糖醛酸酶基因PGII和果胶甲酯酶基因PmeA，其中PGII基因扩增引物包括序列SEQ ID NO:1～SEQ ID NO:4；PmeA基因扩增引物包括序列SEQ ID NO:5～SEQ ID NO:18。/n
【技术特征摘要】
1.一种剪接果胶酶基因中内含子的方法，其特征在于，所述方法以果胶酶基因作为模板进行融合PCR扩增得到所需基因片段，所述果胶酶基因包括内切聚半乳糖醛酸酶基因PGII和果胶甲酯酶基因PmeA，其中PGII基因扩增引物包括序列SEQIDNO:1～SEQIDNO:4；PmeA基因扩增引物包括序列SEQIDNO:5～SEQIDNO:18。
2.根据权利要求1所述的剪接果胶酶基因中内含子的方法，其特征在于，所述PGII基因由内含子分隔的两个外显子分别表示为PGII1～2，其中：
PGII1～2反应体系20μL：2×PhantaMaxMasterMix10μL,GYC501GenomeDNA1μL,正向引物0.8μL,反向引物0.8μL,ddH2O7.4μL；
反应程序：预变性95℃3min，变性95℃15s，退火56℃15s，延伸72℃30s，30个循环，延伸72℃Xmin；
PGII1的扩增：反应体系中正向引物为SEQIDNO:1，反向引物为SEQIDNO:2；反应程序：延伸时间X为5min；
PGII2的扩增：反应体系中正向引物为SEQIDNO:3，反向引物为SEQIDNO:4；反应程序：延伸时间X为5min；
PGII1和PGII2的连接序列PGII3的扩增：反应体系50μL：2×PhantaMaxMasterMix25μL,PGII-11μL,PGII-21μL,SEQIDNO:12μL,SEQIDNO:42μL,ddH2O19μL，所述体系模板由PGII1和PGII2的扩增产物分别稀释500倍体积制得；反应程序：延伸时间X为1min。
3.根据权利要求1所述的剪接果胶酶基因中内含子的方法，其特征在于，所述PmeA基因由内含子分隔的七个外显子分别表示为PmeA1～7，其中：
PmeA1～7反应体系20μL：2×PhantaMaxMasterMix10μL,GYC501GenomeDNA1μL,正向引物0.8μL,反向引物0.8μL,ddH2O7.4μL；
PmeA8～13反应体系20μL：2×PhantaMaxMasterMix10μL,模板A0.5μL,模板B0.5μL，正向引物0.8μL,反向引物0.8μL,ddH2O7.4μL；
反应程序：预变性95℃3min，变性95℃15s，退火56℃15s，延伸72℃30s，30个循环，延伸72℃5min；
PmeA1的扩增：反应体系中正向引物为SEQID...
【专利技术属性】
技术研发人员：龙章德，刘鸿，陈皓睿，薛云，李季刚，农李政，宁振兴，胡志忠，杨龙彦，兰柳妮，申佩弘，
申请(专利权)人：广西中烟工业有限责任公司，
类型：发明
国别省市：广西;45
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