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一种高效的高脂血症及动脉粥样硬化小鼠模型及其构建方法技术

技术编号:23230432 阅读:36 留言:0更新日期:2020-02-04 14:24
本发明专利技术公开了一种高效的高脂血症及动脉粥样硬化小鼠模型及其构建方法,本发明专利技术利用ApoE基因和PEDF基因的组合作为构建高脂血症和/或动脉粥样硬化的动物模型中的靶位点,建立了一种更加经济、省时、省力、成功率更高的高脂血症及动脉粥样硬化小鼠模型的构建方法。本发明专利技术构建的高脂诱导的高脂血症以及动脉粥样硬化小鼠模型效果更明显的高脂血症以及动脉粥样硬化症状;并且,节省高脂诱导时间,得到与传统诱导高脂血症模型同效价的诱导效果,经济效益更高。构建的小鼠模型为研究心血管疾病的机制功能研究以及治疗心血管疾病药物的研发、试验、临床研究应用以及药物的筛选提供更加经济有效的模型。

An efficient mouse model of hyperlipidemia and atherosclerosis and its construction method

【技术实现步骤摘要】
一种高效的高脂血症及动脉粥样硬化小鼠模型及其构建方法
本专利技术涉及动物模型构建
,更具体地,涉及一种高效的高脂血症及动脉粥样硬化小鼠模型及其构建方法。
技术介绍
随着我国经济的不断发展,人们生活水平不断提高,心血管疾病包括高脂血症、冠心病、动脉粥样硬化等疾病的发病率在我国已呈逐年上升趋势。其中高脂血症是机体脂代谢紊乱的重要标志,也是动脉粥样硬化、心脏病、脑血管意外和脂肪肝的主要危害因素之一,主要表现为血清中甘油三酯(triglyceride,TG)、总胆固醇(totalcholesterol,TC)、低密度脂蛋白(lowdensitylipoprotein,LDL)含量增高和高密度脂蛋白(highdensitylipoprotein,HDL)含量降低。目前寻找安全高效的降血脂药物已成为广大医药卫生工作者研究的热点之一,而实验动物模型是进行上述研究的必备工具。为筛选出效果理想的高脂血症动物模型造模方法,观察不同时间小鼠血脂的变化情况,以期待筛选出一种既经济稳定又省时省力的高脂血症小鼠动物模型的造模方法,为后续研究奠定基础。PEDF又称色素上皮来源衍生因子Serpinf1,是分泌性糖蛋白,属于丝氨酸蛋酶抑制剂超家族成员之一,具有明确的抑制血管新生、保护内皮和营养神经的作用与功能。不仅如此,PEDF还被证实是非常重要的脂代谢调节分子,临床研究数据显示,与正常人群相比,肥胖、代谢综合征和糖尿病患者外周血PEDF水平明显增高,而且其浓度还与甘油三酯浓度呈正相关,与高密度脂蛋白浓度呈负相关。目前应用Crispr/Cas9基因修饰技术构建PEDF-/-小鼠,高脂饮食(HFD)诱导肥胖小鼠模型。发现随着高脂诱导时间的延长,PEDF-/-小鼠的体重随之增加,肥胖程度以及血清脂代谢(TG、TC、LDL和HDL)相对与高脂诱导的正常小鼠具有显著性的差异。但是,虽然在早期HFD诱导时,PEDF血清浓度确实相比对照组正常饮食表达升高,在0、4周、8周、12周和16周时,血清中PEDF浓度一直升高;可是在后期(24周时)血清中PEDF表达水平下降,延续观察,PEDF血清中PEDF表达相对于对照组表达水平降低(24周、36周和48周)。这暗示着PEDF其实在早期肥胖的过程中升高原因有可能机体为了平衡体内的脂代谢一种代偿性升高的机制,而在后期由于脂代谢紊乱的加剧,促使动脉的结构功能受损,高脂血症以及外周组织的脂质沉积以及损伤,促使PEDF代偿性机制失调。因此缺乏一种更加经济、省时、省力、成功率更高的高脂血症及动脉粥样硬化小鼠模型及构建方法。
技术实现思路
本专利技术的目的是为了克服现有技术的不足,提供一种更为经济有效的高脂血症以及动脉粥样硬化小鼠模型。本专利技术的第一个目的是提供ApoE基因和PEDF基因的组合作为构建高脂血症和/或动脉粥样硬化的动物模型中的靶位点的应用。本专利技术的第二个目的是提供一种高脂血症和/或动脉粥样硬化的动物模型。本专利技术的第三个目的是提供任一所述动物模型的制备方法。本专利技术的第四个目的是提供所述动物模型在研究心血管疾病和/或脂代谢紊乱中的应用。为了实现上述目的,本专利技术是通过以下技术方案予以实现的:本专利技术是以C57B6小鼠为背景,以ApoE-/-小鼠和相同背景的PEDF-/-进行杂交,得到的纯合的ApoE-/-/PEDF-/-小鼠,在取相同周龄大小的ApoE-/-雄性小鼠进行比较,分别进行了相同高脂诱导得到高脂血症及动脉粥样硬化小鼠模型。高脂诱导24周、36周和48周后:(1)ApoE-/-/PEDF-/-小鼠在体重以及附睾的脂肪垫与ApoE-/-小鼠相比都显著增大;PET/CT腹部脂肪扫描显示ApoE-/-/PEDF-/-小鼠在腹部沉积更多的脂肪;血清血脂水平TG、TC、LDL都显著性地增高形成更严重的高脂血症,血脂HDL下降,具有统计差异;说明高脂诱导ApoE-/-/PEDF-/-小鼠比传统的高脂诱导ApoE-/-小鼠能得到更好的高脂血症小鼠工具鼠,可以节省高脂诱导时间,得到与传统诱导高脂血症模型同效价的诱导效果,经济效益更高。(2)ApoE-/-/PEDF-/-小鼠相比较于ApoE-/-小鼠收缩压显著性升高,舒张压和平均脉压在24周升高而在36周和48周升高不是特别显著;血管顺应性指标脉搏波显示,高脂诱导分别24周、36周和48周后,ApoE-/-/PEDF-/-小鼠相比较于ApoE-/-小鼠PWV显著性升高,表明ApoE-/-/PEDF-/-小鼠的血管顺应性更差,僵硬度高。(3)在病理学研究中,整体主动脉油红染色,ApoE-/-/PEDF-/-小鼠相比较于ApoE-/-小鼠血管的斑块面积显著升高,而在主动脉横截面积的切片结果也显示,ApoE-/-/PEDF-/-小鼠血管斑块面积更大,血管更狭窄。总之,ApoE-/-/PEDF-/-小鼠相对于传统高脂诱导ApoE-/-小鼠具有更严重的动脉粥样硬化的特性,是很好的高脂血症及动脉粥样硬化小鼠模型。因此本专利技术要求保护以下内容:ApoE基因和PEDF基因的组合作为构建高脂血症和/或动脉粥样硬化的动物模型中的靶位点的应用。其中,ApoE基因为NCBI数据库中GeneID:11816的基因。PEDF基因为NCBI数据库中GeneID:20317的基因。一种高脂血症和/或动脉粥样硬化的动物模型,同时敲除动物的ApoE基因和PEDF基因。优选地,所述动物为小鼠。优选地,所述动物为小鼠为C57BL/6J小鼠。本专利技术还要求保护任一所述动物模型的制备方法,用敲除ApoE基因的纯合动物和敲除PEDF基因的纯合动物杂交,之后进行自交,筛选得到,同时敲除动物的ApoE基因和PEDF基因的动物。优选地,筛选得到的同时敲除动物的ApoE基因和PEDF基因的动物进行高脂诱导。优选地,所述动物为小鼠,6~8w开始进行高脂诱导。优选地,所述高脂诱导为采用的高脂饲料为型号D12492高脂饲料进行高脂的诱导。所述动物模型在研究心血管疾病和/或脂代谢紊乱中的应用,也属于本专利技术的保护范围。与现有技术相比,本专利技术具有如下有益效果:本专利技术建立了一种更加经济、省时、省力、成功率更高的高脂血症及动脉粥样硬化小鼠模型的构建方法。本专利技术构建的高脂诱导的高脂血症以及动脉粥样硬化小鼠模型效果更明显的高脂血症以及动脉粥样硬化症状:在血清学生化指标效果更显著的高脂血症,血清脂代谢(TG、TC、LDL和HDL)紊乱更严重;在外形、体重、附睾的脂肪垫以及PET/CT影像更明显的肥胖;表现更明显的血管的功能的下降;动脉粥样斑块面积更大血管狭窄更严重,血管的功能受损更严重。并且,可以节省高脂诱导时间,得到与传统诱导高脂血症模型同效价的诱导效果,经济效益更高。构建的小鼠模型为研究心血管疾病的机制功能研究以及治疗心血管疾病药物的研发、试验、临床研究应用以及药物的筛选提供更加经济有效的模型。附图说明图1为ApoE-/-/PEDF-/-雄性小鼠与同周龄本文档来自技高网
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【技术保护点】
1.ApoE基因和PEDF基因的组合作为构建高脂血症和/或动脉粥样硬化的动物模型中的靶位点的应用。/n

【技术特征摘要】
1.ApoE基因和PEDF基因的组合作为构建高脂血症和/或动脉粥样硬化的动物模型中的靶位点的应用。


2.一种高脂血症和/或动脉粥样硬化的动物模型,其特征在于,同时敲除动物的ApoE基因和PEDF基因。


3.根据权利要求1所述的小鼠模型,其特征在于,所述动物为小鼠。


4.根据权利要求1所述的小鼠模型,其特征在于,所述动物为小鼠为C57BL/6J小鼠。


5.权利要求2到4任一所述动物模型的制备方法,其特征在于,用敲除ApoE基因的纯合动物和敲除PEDF基因的纯合动物杂交...

【专利技术属性】
技术研发人员:蔡卫斌汪海平
申请(专利权)人:中山大学
类型:发明
国别省市:广东;44

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