一种均相化学发光检测试剂盒及其应用制造技术

本发明专利技术涉及一种均相化学发光检测试剂盒及其应用。所述试剂盒包括：供体试剂，其包括供体微球，所述供体微球能够在激发状态下生成活性氧，且所述供体微球表面包被有标记物；和，受体试剂，其包括受体微球，所述受体微球能够与活性氧反应产生可检测的化学发光信号，且所述受体微球表面包被有生物分子，所述生物分子能够与待测目标分子特异性结合；其中，所述受体微球的粒径等于供体微球的粒径。试剂盒中的供体微球的粒径等于受体微球的粒径，提高了该试剂盒的精密性和灵敏度。

【技术实现步骤摘要】
一种均相化学发光检测试剂盒及其应用
本专利技术属于化学发光
，具体涉及一种均相化学发光检测试剂盒及其应用。
技术介绍
迄今为止，生物体内微量生物活性物质的测定方法已经历了由放射免疫、分析(RIA)、荧光免疫分析(FIA)、酶联免疫分析(EIA)以及化学发光分析等诸阶段。这一衍变过程主要是基于对检测方法的敏感性、准确性、以及操作简捷性需求的不断提高而决定的。化学发光分析法是一种利用化学发光物质发射的光波进行检测的方法。化学发光物质作为标记应用于核酸检测与免疫检测中。例如，可通过多种途径将特异结合对中的某一分子与发光物质结合形成发光复合物。该复合物可与样品中被检测物(特异结合对中的另一分子)反应，分配于固相与液相中，且分配比例与检测物的量相关。通过测定固相或液相中发光量，即可得出样品中检测物的相应浓度。化学发光分析中供体微球和受体微球的发光效率决定了化学发光分析法的检测灵敏度。为了提高供体微球和/或受体微球的发光效率，本领域一般采用提高供体微球中染料的感光效率和/或受体微球中发光化合物的接受光的效率和发光效率的方法。虽然采用本领域所述方法可在一定程度上提高化学发光检测法的检测灵敏度，但是检测量程或线性范围却较窄。因此，目前需要开发一种能在现有技术基础上进一步提高发光效率的试剂盒，不仅具有较高的灵敏度，而且检测量程又较宽。
技术实现思路
本专利技术针对现有技术的不足提供一种用于均相化学发光检测的试剂盒，将该试剂盒用于均相化学发光检测时不仅具有较高的灵敏度，而且具有较宽的检测量程。为此，本专利技术第一方面提供了一种均相化学发光检测试剂盒，其包括：供体试剂，其包括供体微球，所述供体微球能够在激发状态下生成活性氧，且所述供体微球表面包被有标记物；和，受体试剂，其包括受体微球，所述受体微球能够与活性氧反应产生可检测的化学发光信号，且所述受体微球表面包被有生物分子，所述生物分子能够与待测目标分子特异性结合；其中，所述受体微球的粒径等于供体微球的粒径。在本专利技术的一些具体实施方式中，所述供体微球与受体微球的平均粒径均为20nm-350nm，优选为50nm-300nm，更优选为100nm-250nm，最优选为180nm-220nm。在本专利技术的一些实施方式中，所述供体微球包括第一载体，所述第一载体的内部填充有敏化剂，所述第一载体的表面化学键合标记物。在本专利技术的另一些实施方式中，所述第一载体的表面没有包被或连接有多糖物质，其直接化学键合标记物。在本专利技术的一些实施方式中，所述标记物为亲和素。在本专利技术的另一些实施方式中，所述亲和素选自卵白亲和素、链霉亲和素、卵黄亲和素、中性亲和素和类亲和素，优选选自中性亲和素或链霉亲和素。在本专利技术的一些实施方式中，所述亲和素通过氨基与所述第一载体表面的醛基反应形成席夫碱的方式化学键合在所述第一载体的表面。在本专利技术的另一些实施方式中，所述第一载体的表面带有键合官能团，所述键合官能团用于将标记物化学键合在所述第一载体的表面。在本专利技术的一些实施方式中，所述键合官能团选自胺基、酰胺基、羟基、醛基、羧基、马来酰亚胺基和巯基；优选选自醛基和/或羧基。在本专利技术的另一些实施方式中，所述第一载体表面的键合官能团的含量为100～500nmol/mg，优选为200～400nmol/mg。在本专利技术的一些实施方式中，所述第一载体的表面包被有亲水性的醛基葡聚糖，所述醛基葡聚糖的醛基化学键合标记物。在本专利技术的一些优选的实施方式中，所述光敏剂选自亚甲基蓝、玫瑰红、卟碄和酞菁中的一种。在本专利技术的另一些实施方式中，所述受体微球包括第二载体，所述第二载体的内部填充有发光组合物，所述第二载体的表面包被有至少一层多糖层，所述多糖层的表面连接有生物分子。在本专利技术的一些实施方式中，所述第二载体的表面包被有亲水性的羧基葡聚糖。在本专利技术的另一些实施方式中，所述发光组合物包括铕配合物；进一步优选地，所述铕配合物为MTTA-EU3+。在本专利技术的一些实施方式中，所述第一载体和/或第二载体的材质选自琼脂糖、纤维素、硝化纤维素、醋酸纤维素、聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚乙烯、聚丙烯、聚(4-甲基丁烯)、聚丙烯酰胺、聚甲基丙烯酸酯、聚对苯二甲酸乙二醇酯、尼龙、聚丁酸乙烯或聚丙烯酸酯；优选选自聚苯乙烯、聚丙烯、聚(4-甲基丁烯)、聚丙烯酰胺、聚甲基丙烯酸酯、聚对苯二甲酸乙二醇酯或聚丙烯酸酯。在本专利技术的另一些实施方式中，所述供体微球在所述供体试剂中的粒径分布变异系数C.V值≥5％；和/或，所述受体微球在所述受体试剂中的粒径分布变异系数C.V值≥5％。在本专利技术的一些实施方式中，所述活性氧为单线态氧。在本专利技术的一些具体实施方式中，所述试剂盒具体包括：受体试剂，其包含与第一抗原结合的受体微球，所述第一抗原的抗原表位能够与待测目标抗体的抗原表位第一结合位点特异性结合；所述受体微球能够与单线态氧反应产生可检测的化学发光信号；第一试剂，其包含与生物素结合的第二抗原，所述第二抗原能够与待测目标抗体的抗原表位第二结合位点特异性结合，且待测目标抗体的抗原表位第一结合位点和抗原表位第二结合位点不相重叠；和，供体试剂，其包含与亲和素结合的供体微球；所述供体微球能够在激发状态下生成单线态氧；其中，所述受体微球的粒径等于供体微球的粒径。在本专利技术的另一些具体实施方式中，所述试剂盒具体包括：受体试剂，其包含与第一抗体结合的受体微球，所述第一抗体能够与待测目标抗原的抗原决定簇特异性结合；所述受体微球能够与单线态氧反应产生可检测的化学发光信号；第一试剂，其包含与生物素结合的第二抗体，所述第二抗体能够与待测目标抗原的抗原决定簇特异性结合；和，供体试剂，其包含与亲和素结合的供体微球；所述供体微球能够在激发状态下生成单线态氧；其中，所述受体微球的粒径等于供体微球的粒径。在本专利技术的一些具体实施方式中，所述试剂盒具体包括：受体试剂，其包含与抗原结合的受体微球，所述抗原能够与目标抗体特异性结合，所述受体微球能够与单线态氧反应产生可检测的化学发光信号；第一试剂，其包含与生物素结合的第二抗体，所述第二抗体能够与所述抗原特异性结合；和供体试剂，其包含与亲和素结合的供体微球，所述所述供体微球能够在激发状态下生成单线态氧；其中，所述受体微球的粒径等于供体微球的粒径。在本专利技术的另一些具体实施方式中，所述试剂盒具体包括：第一试剂，其包含与生物素结合的第一抗原，所述第一抗原能够与目标抗体的抗原表位结合位点特异性结合；受体试剂，其包含与抗免疫复合物抗体结合的受体微球，所述抗免疫复合物抗体能够与第一抗原和目标抗体形成的免疫复合物中目标抗体特异性结合，所述受体微球能够与单线态氧反应产生可检测的化学发光信号；和，供体试剂，其包含与亲和素结合的供体微球，所述所述供体微球能够在激发状态下生成单线态氧；其中，所述受体微球的粒本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种均相化学发光检测试剂盒，其包括：/n供体试剂，其包括供体微球，所述供体微球能够在激发状态下生成活性氧，且所述供体微球表面包被有标记物；和，/n受体试剂，其包括受体微球，所述受体微球能够与活性氧反应产生可检测的化学发光信号，且所述受体微球表面包被有生物分子，所述生物分子能够与待测目标分子特异性结合；/n其中，所述受体微球的粒径等于供体微球的粒径。/n

【技术特征摘要】
20180718 CN 20181079157771.一种均相化学发光检测试剂盒，其包括：
供体试剂，其包括供体微球，所述供体微球能够在激发状态下生成活性氧，且所述供体微球表面包被有标记物；和，
受体试剂，其包括受体微球，所述受体微球能够与活性氧反应产生可检测的化学发光信号，且所述受体微球表面包被有生物分子，所述生物分子能够与待测目标分子特异性结合；
其中，所述受体微球的粒径等于供体微球的粒径。


2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述供体微球与受体微球的平均粒径均为20nm-350nm，优选为50nm-300nm，更优选为100nm-250nm，最优选为180nm-220nm。


3.根据权利要求1或2所述的试剂盒，其特征在于，所述供体微球包括第一载体，所述第一载体的内部填充有敏化剂，所述第一载体的表面化学键合标记物。


4.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述第一载体的表面没有包被或连接有多糖物质，其直接化学键合标记物。


5.根据权利要求3或4所述的试剂盒，其特征在于，所述标记物为亲和素；优选地，所述亲和素选自卵白亲和素、链霉亲和素、卵黄亲和素、中性亲和素和类亲和素，进一步优选选自中性亲和素或链霉亲和素。


6.根据权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，所述亲和素通过氨基与所述第一载体表面的醛基反应形成席夫碱的方式化学键合在所述第一载体的表面。


7.根据权利要求4-6中任意一项所述的试剂盒，其特征在于，所述第一载体的表面带有键合官能团，所述键合官能团用于将标记物化学键合在所述第一载体的表面。


8.根据权利要求7所述的试剂盒，其特征在于，所述键合官能团选自胺基、酰胺基、羟基、醛基、羧基、马来酰亚胺基和巯基；优选选自醛基和/或羧基。


9.根据权利要求7或8所述的试剂盒，其特征在于，所述第一载体表面的键合官能团的含量为100～500nmol/mg，优选为200～400nmol/mg。


10.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述第一载体的表面包被有亲水性的醛基葡聚糖，所述醛基葡聚糖的醛基化学键合标记物。


11.根据权利要求3-10中任意一项所述试剂盒，其特征在于，所述光敏剂选自亚甲基蓝、玫瑰红、卟碄和酞菁中的一种。


12.根据权利要求1-11中任意一项所述的试剂盒，其特征在于，所述受体微球包括第二载体，所述第二载体的内部填充有发光组合物，所述第二载体的表面包被有至少一层多糖层，所述多糖层的表面连接有生物分子。


13.根据权利要求12所述的试剂盒，其特征在于，所述第二载体的表面包被有亲水性的羧基葡聚糖。


14.根据权利要求12或13所述的试剂盒，其特征在于，所述发光组合物包括铕配合物；进一步优选地，所述铕配合物为MTTA-EU3+。


15.根据权利要求3-14中任意一项所述的试剂盒，其特征在于，所述第一载体和/或第二载体的材质选自琼脂糖、纤维素、硝化纤维素、醋酸纤维素、聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚乙烯、聚丙烯、聚(4-甲基丁烯)、聚丙烯酰胺、聚甲基丙烯酸酯、聚对苯二甲酸乙二醇酯、尼龙、聚丁酸乙烯或聚丙烯酸酯；优选选自聚苯乙烯、聚丙烯、聚(4-甲基丁烯)、聚丙烯酰胺、聚甲基丙烯酸酯、聚对苯二甲酸乙二醇酯或聚丙烯酸酯。


16.根据权利要求1-15中任意一项所述的试剂盒，其特征在于，所述供体微球在所述供体试剂中的粒径分布变异系数C.V值≥5％；和/或，
所述受体微球在所述受体试剂中的粒径分布变异系数C.V值≥5％。

【专利技术属性】
技术研发人员：杨阳，赵卫国，刘宇卉，李临，
申请(专利权)人：博阳生物科技上海有限公司，科美诊断技术股份有限公司，
类型：发明
国别省市：上海;31