一种cTnI均相化学发光检测试剂盒、检测方法与装置制造方法及图纸

本发明专利技术涉及均相化学发光检测技术领域的一种cTnI均相化学发光检测试剂盒、检测方法与装置。所述试剂盒包括：供体试剂，其包括供体微球以及与之结合的第一标记物，所述供体微球能够在激发状态产生活性氧；和，受体试剂，其包括受体微球以及与之结合的第一结合单元，所述受体微球能够与活性氧反应生成可检测的化学发光信号，所述第一结合单元能够与人心肌肌钙蛋白I的第一表位特异性结合；其中，所述供体微球的粒径不小于受体微球的粒径。试剂盒中的供体微球的粒径不小于受体微球的粒径，提高了该试剂盒的精密性和灵敏度。

A cTnI homogeneous chemiluminescence detection kit, method and device

【技术实现步骤摘要】
一种cTnI均相化学发光检测试剂盒、检测方法与装置
本专利技术属于均相化学发光检测
，具体涉及一种cTnI均相化学发光检测试剂盒、检测方法与装置。
技术介绍
目前，生物大分子人心肌肌钙蛋白I(cTnI)检测常用ELISA法、胶体金法以及均相化学发光分析等。化学发光分析法是一种利用化学发光物质发射的光波进行检测的方法。化学发光物质作为标记应用于核酸检测与免疫检测中。例如，可通过多种途径将特异结合对中的某一分子与发光物质结合形成发光复合物。该复合物可与样品中被检测物(特异结合对中的另一分子)反应，分配于固相与液相中，且分配比例与检测物的量相关。通过测定固相或液相中发光量，即可得出样品中检测物的相应浓度。化学发光分析中供体微球和受体微球的发光效率决定了化学发光分析法的检测灵敏度。为了提高供体微球和/或受体微球的发光效率，本领域一般采用提高供体微球中染料的感光效率和/或受体微球中发光化合物的接受光的效率和发光效率的方法。虽然采用本领域所述方法可极大地提高化学发光检测法的检测灵敏度，但是仍需要开发一种能在现有技术基础上进一步提高发光效率以检测人心肌肌钙蛋白I的方法。
技术实现思路
本专利技术针对现有技术的不足提供一种cTnI均相化学发光检测试剂盒，采用该试剂盒检测人心肌肌钙蛋白I的方法具有很高的检测灵敏度。为此本专利技术第一方面提供了一种cTnI均相化学发光检测试剂盒，其包括：供体试剂，其包括供体微球以及与之结合的第一标记物，所述供体微球能够在激发状态产生活性氧；和，<br>受体试剂，其包括受体微球以及与之结合的第一结合单元，所述受体微球能够与活性氧反应生成可检测的化学发光信号，所述第一结合单元能够与人心肌肌钙蛋白I的第一表位特异性结合；其中，所述供体微球的粒径不小于受体微球的粒径。在本专利技术的一些实施方式中，所述供体微球与受体微球的粒径选自20nm-400nm，优选选自50nm-350nm，更优选选自100nm-300nm，最优选为150nm-250nm。在本专利技术的一些优选的实施方式中，所述供体微球的粒径等于受体微球的粒径。在本专利技术的一些优选的具体实施方式中，所述供体微球与受体微球的粒径均为200nm。在本专利技术的一些优选的实施方式中，所述供体微球的粒径大于受体微球的粒径。在本专利技术的一些优选的具体实施方式中，所述供体微球与受体微球的粒径比为1.06-8.60，优选为1.2-4.0，更优选为1.5-2.01。在本专利技术的一些实施方式中，所述供体微球表面包裹有亲水性的醛基葡聚糖。在本专利技术的另一些实施方式中，所述受体微球表面包裹有亲水性的羧基葡萄糖。在本专利技术的一些实施方式中，所述供体微球中填充有光敏剂，所述光敏剂选自亚甲基蓝、玫瑰红、卟碄和酞菁中的一种。在本专利技术的另一些实施方式中，所述发光微球中填充有发光化合物；优选地，所述发光化合物为铕配合物；进一步优选地，所述铕配合物为MTTA-EU3+。在本专利技术的一些实施方式中，所述供体微球和受体微球均为聚苯乙烯材质微球。在本专利技术的另一些实施方式中，所述活性氧为单线态氧。在本专利技术的一些实施方式中，所述试剂盒还包括第一试剂，其包含第二结合单元以及与之结合的第一标记物的特异结合物，所述第二结合单元能够与人心肌肌钙蛋白I的第二表位特异性结合，所述第二表位与所述第一表位是人心肌肌钙蛋白I的不同结合特性的表位或者不同位置的相同结合特性的表位。在本专利技术的一些优选的实施方式中，所述第一结合单元和所述第二结合单元分别独立选自与人心肌肌钙蛋白I具有结合特异性的多克隆抗体、单克隆抗体、抗体结合片段、人工抗体、修饰的抗体，优选选自多克隆抗体和/或单克隆抗体。在本专利技术的一些优选的具体实施方式中，所述第一结合单元和/或所述第二结合单元独立包含至少两种能够与人心肌肌钙蛋白I的不同结合特性的表位或者不同位置的相同结合特性的表位具有结合特异性的不同的单克隆抗体、抗体结合片段、人工抗体或修饰的抗体。在本专利技术的一些实施方式中，所述第一标记物选自亲和素和/或链霉亲和素。在本专利技术的一些优选的实施方式中，所述受体试剂中的所述受体微球的浓度选自20～300μg/mL，优选30～200μg/mL，更优选40～100μg/mL。在本专利技术的另一些优选的实施方式中，所述供体试剂中的所述供体微球的浓度选自0.2～10μg/mL，优选0.5～8μg/mL，更优选1～6μg/mL。本专利技术第二方面提供了一种人心肌肌钙蛋白I均相化学发光检测方法，其使用如本专利技术第一方面所述的试剂盒进行化学发光检测。在本专利技术的一些实施方式中，所述方法包括如下步骤：S1，将待测样本与受体试剂及供体试剂混合形成待测混合物；S2，利用能量或者活性化合物激发所述待测混合物化学发光，测量所述化学发光的信号强度；其中，所述供体试剂包括供体微球，所述供体微球能够在激发状态产生活性氧；所述受体试剂包括受体微球，所述受体微球能够与活性氧反应生成可检测的化学发光信号；所述供体微球的粒径不小于所述受体微球的粒径。本专利技术第三方面提供了一种化学发光检测装置，其利用如本专利技术第一方面所述的试剂盒或本专利技术第二专利技术所述的方法检测待测样本中的人心肌肌钙蛋白I。在本专利技术的一些优选的实施方式中，所述装置为POCT即时检测装置。本专利技术的有益效果为：本专利技术所述试剂盒通过控制受体微球和供体微球的基质和粒径，使得将所述试剂盒用于化学发光检测人心肌肌钙蛋白I时，提高了检测的发光效率，具有很好的检测灵敏度。另外，本专利技术中试剂盒中的受体微球和供体微球均为聚苯乙烯微球，且受体微球表面包裹有亲水性的羧基葡萄糖，供体微球表面包裹有亲水性的醛基葡聚糖，大大降低了非特异性吸附，减少体系外其他环境因素如pH值及电解质等的影响，进而可以提高检测的准确性。具体实施方式为使本专利技术容易理解，下面将详细说明本专利技术。但在详细描述本专利技术前，应当理解本专利技术不限于描述的具体实施方式。还应当理解，本文中使用的术语仅为了描述具体实施方式，而并不表示限制性的。在提供了数值范围的情况下，应当理解所述范围的上限和下限和所述规定范围中的任何其他规定或居间数值之间的每个居间数值均涵盖在本专利技术内。这些较小范围的上限和下限可以独立包括在较小的范围中，并且也涵盖在本专利技术内，服从规定范围中任何明确排除的限度。在规定的范围包含一个或两个限度的情况下，排除那些包括的限度之任一或两者的范围也包含在本专利技术中。除非另有定义，本文使用的所有术语与本专利技术所属领域的普通技术人员的通常理解具有相同的意义。虽然与本文中描述的方法和材料类似或等同的任何方法和材料也可在本专利技术的实施或测试中使用，但是现在描述了优选的方法和材料。Ⅰ.术语本专利技术所述用语“均相”所对应的英文定义为“homogeneous”，其是指无须对结合的抗原抗体复合物和剩余的游离抗原或抗体进行分离即可进行检测。本专利技术所述用语“待测样本”是指可能含有被分析物的一本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种cTnI均相化学发光检测试剂盒，其包括：/n供体试剂，其包括供体微球以及与之结合的第一标记物，所述供体微球能够在激发状态产生活性氧；和，/n受体试剂，其包括受体微球以及与之结合的第一结合单元，所述受体微球能够与活性氧反应生成可检测的化学发光信号，所述第一结合单元能够与人心肌肌钙蛋白I的第一表位特异性结合；/n其中，所述供体微球的粒径不小于受体微球的粒径。/n

【技术特征摘要】
1.一种cTnI均相化学发光检测试剂盒，其包括：
供体试剂，其包括供体微球以及与之结合的第一标记物，所述供体微球能够在激发状态产生活性氧；和，
受体试剂，其包括受体微球以及与之结合的第一结合单元，所述受体微球能够与活性氧反应生成可检测的化学发光信号，所述第一结合单元能够与人心肌肌钙蛋白I的第一表位特异性结合；
其中，所述供体微球的粒径不小于受体微球的粒径。


2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述供体微球与受体微球的粒径选自20nm-400nm，优选选自50nm-350nm，更优选选自100nm-300nm，最优选为150nm-250nm。


3.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述供体微球的粒径等于受体微球的粒径。


4.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述供体微球与受体微球的粒径均为200nm。


5.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述供体微球的粒径大于受体微球的粒径。


6.根据权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，所述供体微球与受体微球的粒径比为1.06-8.60，优选为1.2-4.0，更优选为1.5-2.01。


7.根据权利要求1-6中任意一项所述的试剂盒，其特征在于，所述供体微球表面包裹有亲水性的醛基葡聚糖。


8.根据权利要求1-7中任意一项所述的试剂盒，其特征在于，所述受体微球表面包裹有亲水性的羧基葡萄糖。


9.根据权利要求1-8中任意一项所述的试剂盒，其特征在于，所述供体微球中填充有光敏剂，所述光敏剂选自亚甲基蓝、玫瑰红、卟碄和酞菁中的一种。


10.根据权利要求1-9中任意一项所述的试剂盒，其特征在于，所述发光微球中填充有发光化合物；优选地，所述发光化合物为铕配合物；进一步优选地，所述铕配合物为MTTA-EU3+。


11.根据权利要求1-10中任意一项所述的试剂盒，其特征在于，所述供体微球和受体微球均为聚苯乙烯材质微球。


12.根据权利要求1-11中任意一项所述的试剂盒，其特征在于，所述活性氧为单线态氧。


13.根据权利要求1-12中任意一项所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括第一试剂，其包含第二结合单元以及与之结合的第一标记...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨阳，赵卫国，刘宇卉，李临，
申请(专利权)人：博阳生物科技上海有限公司，
类型：发明
国别省市：上海;31