【技术实现步骤摘要】
检测14-3-3eta蛋白的化学发光免疫检测试剂盒及其应用
本专利技术属于免疫分析
，具体涉及一种检测14-3-3eta蛋白的化学发光免疫检测试剂盒及其制备方法、使用方法。
技术介绍
14-3-3eta(η)蛋白是一种新型的血清/血浆蛋白标志物，诱导炎症因子，如白细胞介素(IL)-1和-6，并联系到关节损伤。7种亚型中只有14-3-3η蛋白在RA活动性炎症滑膜和血清中高表达，并与RA前炎性因子表达和滑膜炎症呈正相关，且滑膜液14-3-3η蛋白水平至少高于血清水平5倍以上，提示滑膜是14-3-3η蛋白的主要来源。与健康的人相比，14-3-3η亚型在关节炎患者中高水平表达，这被认为与14-3-3η蛋白诱导相关的炎症因子和关节损伤的能力直接相关。现有的检测14-3-3蛋白的方法均为非均相免疫检测法，这些方法灵敏较低，准确度不高，操作也较为复杂。并且，国内、外市场上尚没有发现商品化14-3-3eta蛋白检测试剂盒。曾报道有酶联免疫吸附法(ELISA法)检测患者血清中14-3-3eta蛋白，但是其灵敏较低，特异性也较差，
【技术保护点】
1.一种用于检测14-3-3eta蛋白的化学发光免疫检测试剂盒，其包括：第一试剂、第二试剂、校准品、低水平质控品和高水平质控品，其中：/n所述第一试剂包含包被第一抗14-3-3eta蛋白抗体的发光微粒，所述第一抗14-3-3eta蛋白抗体能够与14-3-3eta蛋白的第一表位特异性结合；/n所述第二试剂包含能够与14-3-3eta蛋白的第二表位特异性结合的含生物素标记的第二抗14-3-3eta蛋白抗体，所述第二表位和所述第一表位不相重叠。/n
【技术特征摘要】
1.一种用于检测14-3-3eta蛋白的化学发光免疫检测试剂盒，其包括：第一试剂、第二试剂、校准品、低水平质控品和高水平质控品，其中：
所述第一试剂包含包被第一抗14-3-3eta蛋白抗体的发光微粒，所述第一抗14-3-3eta蛋白抗体能够与14-3-3eta蛋白的第一表位特异性结合；
所述第二试剂包含能够与14-3-3eta蛋白的第二表位特异性结合的含生物素标记的第二抗14-3-3eta蛋白抗体，所述第二表位和所述第一表位不相重叠。
2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述校准品、低水平质控品和高水平质控品均包含重组抗原14-3-3eta蛋白。
3.根据权利要求1或2所述的试剂盒，其特征在于，所述校准品被校准品稀释液按照比例梯度稀释成六个浓度水平的工作校准品溶液，优选地，所述校准品被校准品稀释液按照比例梯度稀释成如下六个浓度水平的工作校准品溶液：0ng/mL、0.2ng/mL、0.5ng/mL、2ng/mL、5ng/mL、20ng/mL。
4.根据权利要求1-3中任意一项所述的试剂盒，其特征在于，所述校准品还包括新生牛血清和冻干保护剂。
5.根据权利要求1-4中任意一项所述的试剂盒，其特征在于，所述低水平质控品的质控范围为10％-40％，优选为10％-30％，更优选为10％-20％。
6.根据权利要求1-5中任意一项所述的试剂盒，其特征在于，所述低水平质控品的靶值浓度为0.20±0.05ng/mL。
7.根据权利要求1-6中任意一项所述的试剂盒，其特征在于，所述高水平质控品的质控范围为10％-40％，优选为10％-30％，更优选为10％-20％。
8.根据权利要求1-7中任意一项所述的试剂盒，其特征在于，所述高水平质控品所述高水平质控品的靶值浓度为5.0±1.0ng/mL。
9.根据权利要求1-8中任意一项所述的试剂盒，其特征在于，所述第一试剂中包被第一抗14-3-3eta蛋白抗体的发光微粒的浓度为10-200μg/mL，优选20-150μg/mL，更优选30-100μg/mL，最优选40-80μg/mL；和/或，所述第二试剂中含生物素标记的第二抗14-3-3eta蛋白抗体的浓度为0.1-8μg/mL，优选0.2-6μg/mL，更优选0.4-4μg/mL，最优选0.6-2μg/mL。
10.根据权利要求1-9中任意一项所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括第三试剂，其包含亲和素和/或链霉亲和素包被的感光微粒。
11.根据权利要求1-10中任意一项所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括微孔板条。
12.根据权利要求1-11中任意一项所述的试剂盒，其特征在于，所述校准品、低水平质控品和/或高水平质控品均为冻干粉。
13.根据权利要求1-12中任意一项所述的试剂盒，其特征在于，所述低水平质控品和/或高水平质控品中包含新生牛血清。
14.根据权利要求1-13中任意一项所述的试剂盒，其特征在于，第一试剂和/或第二试剂中包含蛋白稳定剂；优选地，所述蛋白稳定剂为牛血清白蛋白。
15.根据权利要求1-14中任意一项所述的试剂盒，其特征在于，所述第一试剂中的发光微粒为填充有发光化合物和镧系元素的高分子微粒，其能够与单线态氧反应而生成可检测的化学发光信号。
16.根据权利要求10-15中任意一项所述的试剂盒，其特征在于，所述第三试剂中的感光微粒为填充有感光化合物的高分子微粒，其能够在激发状态产生单线态氧。
17.根据权利要求10-16中任意一项所述的试剂盒，其特征在于，所述第三试剂中所述亲和素和/或链霉亲和素包被的感光微粒的浓度为5-20μg/mL，优选8-15μg/mL，更优选10-12μg/mL。
18.根据权利要求1-17所述的试剂盒，其特征在于，所述14-3-3eta蛋白的氨基酸序列如SEQUENCENO.1所示。
19.根据权利要求1-18所述的试剂盒，其特征在于，试剂盒在0.1ng/mL-20.0ng/mL范围内，试剂盒剂量-反应曲线线性相关系数(r)不低于0.990。
20.一种检测待测样品中14-3-3eta蛋白的化学发光免疫检测方法，其包括使用如权利要求1-19中任意一项所述的化学发光免疫检测试剂盒来判断测待测样品中是否存在14-3-3eta蛋白和/或确定14-3-3eta蛋白的含量。
21.根据权利要求20所述的方法，其特征在于，该方法包括：
步骤R1，将待测样品与第一试剂和第二试剂混合，得到第一混合物；
步骤R2，将第一混合物与第三试剂混合，得到第二混合物；
步骤R3，使能量或者活性化合物与所述第二混合物接触，激发所述感光微粒产生单线态氧，所述发光微粒能够与接收到的单线态氧反应生成可检测的化学发光信号；
步骤R4，检测步骤R3中所述化学发光信号的存在和/或强度，从而判断测待测样品中是否存在14-3-3eta蛋白和/或确定14-3-3eta蛋白的含量。
22.根据权利要求21所述的方法，其特征在于，所述方法还包括在步骤R1之前的制作14-3-3eta蛋白标准工作曲线的步骤。
23.根据权利要求22所述的方法，其特征在于，在步骤R4中，检测步骤R3中所述化学发光信号的强度，并基于14-3-3eta蛋白标准工作曲线来确定待测样品中14-3-3eta蛋白的含量。
24.根据权利要求21-23中任意一项所述的方法，其特征在于，步骤R1和R2之间以及步骤R2和R3之间没有分离和/或洗涤的步骤。
25.根据权利要求21-24中任意一项所述的方法，其特征在于，在步骤R3中，使用600-700nm波长的激发光照射第二混合物，激发感光微粒产生单线态氧，发光微粒与接触到的单线态氧反应生成520-620nm的发射光。
26.根据权利要求21-25中任意一项所述的方法，其特征在于，该方法还包括校准步骤：利用0ng/mL、0.2ng/mL、0.5ng/mL、2ng/mL、5ng/mL、20ng/mL的六个浓度水平的工作校准品溶液...
【专利技术属性】
技术研发人员：饶星，廖智星，刘宇卉，李临，其他发明人请求不公开姓名，
申请(专利权)人：科美诊断技术股份有限公司，
类型：发明
国别省市：北京;11
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