维康醇与自噬抑制剂联用在制备抗黑色素瘤药物的应用制造技术

本发明专利技术属于医药领域，公开了维康醇与自噬抑制剂联用在制备抗黑色素瘤药物的应用，所述对抗黑色素瘤药物包含维康醇与细胞自噬抑制剂，所述细胞自噬抑制剂选自3‑MA，所述对抗黑色素瘤药物为维康醇与细胞自噬抑制剂制成的复方药物。本发明专利技术中细胞自噬抑制剂抑制维康醇诱导的黑色素肿瘤细胞的自噬，维康醇诱导黑色素瘤细胞的自噬而抵消黑色素肿瘤由于细胞自噬而引起的对维康醇治疗的拮抗作用，从而显著增强维康醇对黑色素瘤的治疗效果，维康醇与自噬抑制剂联用能够很好的抑制维康醇单用所诱发的自噬，对于黑色素瘤有着明显的治疗效果，并且显著优于二者单独使用，说明二者联合使用可以发挥协同增效的作用。

The application of the combination of vicanol and autophagy inhibitor in the preparation of anti melanoma drugs

【技术实现步骤摘要】
维康醇与自噬抑制剂联用在制备抗黑色素瘤药物的应用
本专利技术涉及医药
，具体为维康醇与自噬抑制剂联用在制备抗黑色素瘤药物的应用。
技术介绍
黑色素瘤起源于黑色素细胞，是皮肤肿瘤中恶性程度最高的瘤种。转移性黑色素瘤将患者的五年生存率从98％降低至17％，通常，肿瘤微环境(tumormicroenvironment，TME)中的基质主要由结构蛋白和糖胺聚糖组成，后者的主要成分是硫酸乙酰肝素蛋白多糖(HSPGs)，在TME中，HSPG存储大量生物因子(例如b-FGF，VEGF和TGF-β)，并且这些因子在身体和肿瘤之间的这场战争中具有高度战略性。然而，结果通常是肿瘤微环境中的乙酰肝素酶-1降解HSPG，允许这些生物因子的大量释放，激活随后的信号传导途径，导致新血管形成，上皮-间质转化(EMT)和肿瘤转移。此外，肿瘤微环境中产生的基质空隙也有助于肿瘤细胞的侵袭和转移。这些研究表明，恶性高转移性肿瘤通常表达高水平的乙酰肝素酶-1，尤其在黑色素瘤中。目前，恶性肿瘤已成为危害人类健康最严重的疾病之一，仅次子心脑血管疾病，位列致死病因的第二位，世界卫生组织预测，到2020年，将有2000万新发癌症病例，其中死亡人数达1200万，且绝大部分将发生在发展中国家临床常用治疗肿瘤的方法有外科手术、化学疗法、放射疗法，但这些方法通常具有严重的副作用，患者常因免疫功能受创，出现远处播散、肿瘤转移，使得生活质量下降、生存期缩短。因而近年来从天然药物中寻找高效低毒的抗肿瘤药物成为研究热点，迄今已成功开发出紫杉醇、长春新碱、足叶乙甙等一大批植物中获取的化学成分并已成功应用到恶性肿瘤的一线临床治疗中，维康醇它是从云南紫杉树皮中获取一种微生物菌诱变株，经过发酵、纯化等工艺从该菌的菌丝体及培养基中分离出一种新型单体化合物，到目前为止，维康醇与自噬抑制剂联用对抗黑色素瘤的作用未见研究。
技术实现思路
(一)解决的技术问题1.要解决的技术问题针对现有技术中存在的问题，本专利技术的目的在于提供维康醇与自噬抑制剂联用在制备抗黑色素瘤药物的应用，解决上述问题。(二)技术方案为实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案：维康醇与自噬抑制剂联用在制备抗黑色素瘤药物的应用，所述对抗黑色素瘤药物包含维康醇与细胞自噬抑制剂。优选的，所述维康醇的化学式为：优选的，所述细胞自噬抑制剂选自3-MA。优选的，所述对抗黑色素瘤药物为维康醇与细胞自噬抑制剂制成的复方药物。优选的，所述复方药物制成：固体、溶液、分散剂、胶束、乳剂、脂质体或纳米微球剂型。优选的，所述复方药物中的细胞自噬抑制剂与维康醇采用联合或者序贯给药的方式。优选的，所述细胞自噬抑制剂抑制维康醇诱导的黑色素肿瘤细胞的自噬、黑色素肿瘤由于细胞自噬而引起的对维康醇治疗的拮抗作用。(三)有益效果与现有技术相比，具备以下有益效果：(1)本专利技术中细胞自噬抑制剂抑制维康醇诱导的黑色素肿瘤细胞的自噬，维康醇诱导黑色素瘤细胞的自噬而抵消黑色素肿瘤由于细胞自噬而引起的对维康醇治疗的拮抗作用，从而显著增强维康醇对黑色素瘤的治疗效果。(2)维康醇与细胞自噬抑制剂联用能够很好的抑制维康醇单用所诱发的自噬，对于黑色素瘤有着明显的治疗效果，并且显著优于二者单独使用，说明二者联合使用可以发挥协同增效的作用。(3)经实验结果表明，维康醇对B16F0细胞有良好的药效并且维康醇对B16F0细胞的杀伤作用具有良好的剂量依赖性；维康醇能诱导B16F0细胞发生细胞自噬，细胞自噬抑制剂能增加维康醇对B16F0细胞的杀伤作用；维康醇与细胞自噬抑制剂联用能增强维康醇所诱导的B16F0细胞周期的阻滞现象，因此本专利技术为临床治疗肿瘤疾病提供了一种新的、更有效的治疗方案，临床应用前景良好。具体实施方式下面将结合本专利技术的实施例，对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。实施例一：维康醇与自噬抑制剂联用在制备抗黑色素瘤药物的应用，对抗黑色素瘤药物包含维康醇与细胞自噬抑制剂。进一步的，维康醇的化学式为：进一步的，细胞自噬抑制剂选自3-MA。进一步的，对抗黑色素瘤药物为维康醇与细胞自噬抑制剂制成的复方药物。进一步的，复方药物制成：固体、溶液、分散剂、胶束、乳剂、脂质体或纳米微球剂型。进一步的，复方药物中的细胞自噬抑制剂与维康醇采用联合或者序贯给药的方式。进一步的，细胞自噬抑制剂抑制维康醇诱导的黑色素肿瘤细胞的自噬、黑色素肿瘤由于细胞自噬而引起的对维康醇治疗的拮抗作用。实施例二、主要试剂的配制：胰蛋白酶的配制：称取KCl0.4g，KH2PO40.06g，NaCl8.0g，NaHCO30.35g，NaH：PO412H2O0.08g，酚红0.02g，EDTANa0.255g，依次溶于约800ml去离子水中，调PH至7.2-7.4，最后加入胰蛋白酶2.5g，加水补充到IL，使胰蛋白酶浓度为0.25％，调PH7.4左右，进行过滤除菌，分装后于4℃保存。维康醇溶液的配制：准确称取维康醇0.2mg于0.2ml的EP管中，加入4μl的DMSO将其溶解，即配成50mg/ml的维康醇母液，于4℃避光保存，临用前用无血清的培养基或完全培养基稀释至所需要的浓度。细胞自噬抑制剂溶液配制：取适量3-MA溶于PBS配成10mg/mL的储存液，用0.1μm的滤器过滤除菌后，并分装为100μL/支，使用时每次一支，皮下或腹腔注射用于体内抑制自噬。MTT溶液的配制：称取0.5gMTT溶解于100ml的PBS或无酚红的培养基中配成5mg/ml的溶液，用0.22μm的滤膜过滤除去细菌，分装后放在4℃避光保存。细胞自噬抑制剂与维康醇联合应用于体内或体外抗肿瘤时，细胞自噬抑制剂3-MA的使用浓度范围为0-1mol/L。实施例三细胞培养：B16F0细胞使用PRMI-1640干粉培养基溶于1000ml新鲜三蒸水，待完全溶解后，加青霉素和链霉素，使之终浓度为100U/mL、100μg/mL，最后加入3.7gNaHCO3，调PH至7.2-7.4充分搅匀后进行抽滤除菌，分装后于4℃保存进行培养，待细胞生长至对数生长期时，用胰蛋白酶消化，将细胞消化后以1*105cells/mL的浓度转入细胞培养板内培养，培养12h后各组细胞分别给予相应浓度的维康醇溶液；联合给药时，给药前1h加入2mm3-MA抑制B16F0细胞的细胞自噬；连续培养24h、48h或72h后进行下一步处理。实施例四维康醇能抑制B16F0细胞的增殖：将适当浓度的B16F0细胞按每孔1*105个细胞接种在96孔培养板内，每孔接种100μl，在细胞培养箱里孵育24h后，本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.维康醇与自噬抑制剂联用在制备抗黑色素瘤药物的应用，其特征在于：所述对抗黑色素瘤药物包含维康醇与细胞自噬抑制剂。/n

【技术特征摘要】
1.维康醇与自噬抑制剂联用在制备抗黑色素瘤药物的应用，其特征在于：所述对抗黑色素瘤药物包含维康醇与细胞自噬抑制剂。


2.根据权利要求1所述维康醇与自噬抑制剂联用在制备抗黑色素瘤药物的应用，其特征在于：所述维康醇的化学式为：





3.根据权利要求1所述维康醇与自噬抑制剂联用在制备抗黑色素瘤药物的应用，其特征在于：所述细胞自噬抑制剂选自3-MA。


4.根据权利要求1所述维康醇与自噬抑制剂联用在制备抗黑色素瘤药物的应用，其特征在于：所述对抗黑色素瘤药物为维康醇与细胞自噬抑制剂制成的复方药物...

【专利技术属性】
技术研发人员：包勇，
申请(专利权)人：上海棠思生物医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：上海;31