含有不溶性载体颗粒的免疫测定试剂的劣化防止的手段制造技术

发现了一种在含有致敏或未致敏的不溶性载体颗粒的免疫测定用试剂冻结的情况下抑制该不溶性载体颗粒的非特异性凝集的成分，并以提供防止该免疫测定试剂劣化的手段作为课题，作为抑制上述不溶性载体颗粒的非特异性凝集的成分，得到了下述的ω‑氨基羧酸(1)：

The method to prevent the degradation of immunoassay reagent containing insoluble carrier particles

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】含有不溶性载体颗粒的免疫测定试剂的劣化防止的手段
本专利技术是关于含有不溶性载体颗粒的免疫测定试剂的劣化防止的手段的专利技术。根据本专利技术，无论未致敏的不溶性载体颗粒还是致敏的不溶性载体颗粒，都能够防止液态形式的试剂的劣化,所述液态形式的试剂的劣化由伴随冻结·融化过程的不溶性载体颗粒彼此的非特异性凝集而引起。作为代表性的不溶性载体颗粒，有乳胶颗粒、金胶体颗粒。
技术介绍
当前，使用乳胶颗粒、金胶体颗粒等不溶性载体颗粒的免疫测定试剂在各种临床检查项目中都得到使用。例如，在使用乳胶凝集法或金胶体凝集法的免疫测定试剂中，使用在液相中使抗原或抗体致敏的乳胶或金胶体，或未致敏的乳胶或金胶体，形成检测抗体或抗原的测定系统。基于乳胶颗粒、金胶体颗粒由于免疫复合物的形成而凝集的性质，能够通过目视确认凝集的程度，或者可以将浊度的增加作为吸光度或散射光强度的光学变化来进行测定。乳胶凝集法和金胶体凝集法操作简便，能够比较容易地适用于自动分析装置，是当前盛行使用的检查方式之一。使用乳胶颗粒、金胶体颗粒等不溶性载体颗粒的免疫测定试剂即使在销售时为冻结干燥状态，但至少在使用时是作为不溶性载体颗粒的分散液来使用。因此，从易于现场处理的观点出发，优选预先为分散液的形式。现有技术文件专利文献专利文件1：WO2014/132833国际公开小册子
技术实现思路
本专利技术所要解决的课题使用上述分散液形式的乳胶颗粒、金胶体颗粒等不溶性载体颗粒液的免疫测定试剂(以下也称为液状形式的试剂)被保存在2至8℃的适当的冷藏环境中，通常难以发生冻结劣化。然而，在运输时和温度控制不充分的冷藏设备中，液状形式试剂的全部或一部分由于过冷、局部冷却而冻结，在其融化时不溶性载体颗粒彼此会非特异性凝集，这成为问题。当发生这样的非特异性凝集时，试剂的反应性改变，重要的测定值的准确性受损，牵涉到错误的诊断结果，这不是令人满意的。作为液状形式试剂的冻结劣化的防止措施，通常添加甘油、乙二醇等防冻醇、海藻糖等糖类，但效果都不充分。近年来，报道了通过添加5至30质量％的三甲基甘氨酸(甜菜碱)来有效地防止未致敏的乳胶试剂的冻结劣化的方法(专利文献1)。因此，本专利技术的课题在于发现可以将其适用对象的范围从未致敏的不溶性载体颗粒扩大到致敏的不溶性载体颗粒，并且以较少量的使用即可完成的防止冻结劣化的成分，使将液状形式试剂稳定化的技术丰富化，实现技术的进一步提高。用于解决问题的手段本专利技术人发现，通过使用规定的ω-氨基羧酸作为防止冻结劣化的成分解决了上述课题。在本专利技术中，第一，提供在溶剂中含有致敏或未致敏的不溶性载体颗粒和下述化学式(1)的ω-氨基羧酸(以下也称为ω-氨基羧酸(1))的免疫测定试剂(以下也称为本专利技术的免疫测定试剂)。[化1][式中n是2至6的整数。]第二，提供免疫测定试剂的劣化防止方法(以下，也称为本专利技术的劣化防止方法)，其通过在含有致敏或未致敏的不溶性载体颗粒的免疫测定试剂中使上述ω-氨基羧酸(1)共存，防止了该不溶性载体颗粒的非特异性凝集。予以说明，在本专利技术中，“致敏”是指在不溶性载体颗粒上使抗原或抗体附着的行为或附着的状态，与“载持”具有相同意义。对关于上述本专利技术的免疫测定试剂和本专利技术的劣化防止方法的概述进行说明。不溶性载体颗粒没有限制，只要可以作为免疫测定试剂使用即可，例如可列举乳胶颗粒、二氧化硅颗粒、金胶体颗粒等无机颗粒；明胶颗粒、红细胞等。其中，乳胶颗粒、金胶体颗粒是代表性的不溶性载体颗粒。乳胶也称为聚合物乳液，聚合物分散在水等的水性溶剂中，该水性溶剂成为连续相，真球或接近球形的聚合物颗粒形成为不连续相。所谓乳胶颗粒是形成该乳胶不连续相的聚合物颗粒。在本说明书中，有时使用“乳胶”作为包括乳胶颗粒的通用表达。乳胶的种类没有限制，只要是能够如上所述作为免疫测定试剂使用的种类即可。例如聚苯乙烯乳胶、极低羧酸改性乳胶、亲水基团局部化的乳胶等物理吸附用的乳胶；羧酸改性乳胶、氨基改性乳胶、羟基改性乳胶、缩水甘油基改性乳胶、醛改性乳胶、酰胺改性乳胶等化学结合用乳胶；各种着色乳胶；高比重聚苯乙烯乳胶等血液凝集反应用乳胶；磁性乳胶等。金胶体是金原子结合而形成的微粒的分散液，通过在液体中还原四氯金(III)酸等方法合成。在此，Au3+离子被还原为金原子，一些金原子结合而成为过饱和状态，然后生成1nm以下的核颗粒，未结合的金原子依次与该核颗粒结合，颗粒成长，由此而合成。通过在合成过程中进行充分搅拌，可以使颗粒的大小均匀化。虽添加柠檬酸等稳定剂以使得微粒(金胶体颗粒)彼此不凝集，但是仍潜在地具有容易凝集的性质。金胶体有色由于表面等离子共振产生的，单分散的粒径均一的金胶体具有单一波长的吸收。金胶体中的金胶体颗粒的粒径比上述乳胶颗粒小，单位重量的比表面积大，因此特别适合于以高浓度存在的物质的定量。致敏的不溶性载体颗粒是在不溶性载体颗粒的表面上使某些物质致敏的不溶性载体颗粒，具体而言，是用于引起免疫测定所必要的抗原抗体反应的、抗体或抗原被致敏的不溶性载体颗粒。该抗体可以是单克隆抗体，也可以是多克隆抗体，进一步，只要能够引起与期望的抗原的抗原抗体反应，就可以是免疫球蛋白分子的全部，也可以是免疫球蛋白分子的一部分。该抗原没有特别限制，只要是通过抗原抗体反应与所期望的抗体结合的抗原即可。未致敏的不溶性载体颗粒是这样的抗体或抗原未被致敏的不溶性载体颗粒。水性溶剂是以水为主体的溶剂，可列举水或各种缓冲液等。ω-氨基羧酸(1)可以例如通过规定碳原子数的α-卤代羧酸的胺化等公知的方法来合成，但是也可以使用市售品。免疫测定试剂的形式没有特别限制，只要使用不溶性载体颗粒，并且除了免疫测定时该颗粒的凝集会对免疫测定值产生不利影响的不溶性载体颗粒即可，但是优选为将不溶性载体颗粒的凝集作为抗原抗体反应指标的“使用凝集法的免疫测定试剂”。作为凝集法，可列举玻片测试法、光学测定法、微量滴定法和过滤器分离法等。作为凝集法以外的方法，可列举夹层法、免疫色谱法、免疫印迹法等。免疫测定的标记可列举放射性同位素、荧光物质、着色物质、显色酶、生物素等，但不限于这些。作为使用未致敏的不溶性载体颗粒的方法，已知通过使未致敏的乳胶颗粒与标本试样(分离的生物成分的样品)接触，使测定对象蛋白质吸附在颗粒表面，使针对对象蛋白质的抗体与其反应，产生颗粒的凝集，根据反应液的浊度来测定对象蛋白质的量的方法(日本专利第2677753号)，对于基于使用这种未致敏的不溶性载体颗粒的方法的免疫测定试剂，本专利技术也可以适用。专利技术的效果根据本专利技术，提供免疫测定试剂中使用的乳胶、金胶体等不溶性载体颗粒液伴随着冻结·融化的非特异性的凝集所引起的该试剂的劣化手段，作为“免疫测定试剂”和“免疫测定试剂的劣化防止方法”。作为本专利技术的防止劣化的成分的ω-氨基羧酸(1)无论不溶性载体颗粒是致敏的还是未致敏的，且以比较少量的配合，都可以防止不溶性载体颗粒伴随着冻结·融化的非特异性凝集，可以防本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种免疫测定试剂，其在溶剂中含有致敏或未致敏的不溶性载体颗粒和下述化学式(1)的ω-氨基羧酸，/n[化1]/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20170801 JP 2017-149290;20171027 JP 2017-2086781.一种免疫测定试剂，其在溶剂中含有致敏或未致敏的不溶性载体颗粒和下述化学式(1)的ω-氨基羧酸，
[化1]



式中n是2至6的整数。


2.根据权利要求1所述的免疫测定试剂，其中，n是2至5的整数。


3.根据权利要求1所述的免疫测定试剂，其中，n是5。


4.根据权利要求1至3中任一项所述的免疫测定试剂，其中，不溶性载体颗粒是未致敏的不溶性载体颗粒，试剂中的ω-氨基羧酸的浓度是试剂的0.1至10质量％。


5.根据权利要求1所述的免疫测定试剂，其中，不溶性载体颗粒是致敏的不溶性载体颗粒，n是2至5的整数，试剂中的ω-氨基羧酸的浓度是试剂的3至10质量％。


6.根据权利要求1所述的免疫测定试剂，其中，不溶性载体颗粒是致敏的不溶性载体颗粒，n是6，试剂中的ω-氨基羧酸的浓度是试剂的0.1至0.3质量％。


7.根据权利要求1至6中任一项所述的免疫测定试剂，其为通过凝集法得到的免疫测定试剂。


8.根据权利要求1至7中任一项所述的免疫测定试剂，其中，不溶性载体颗...

【专利技术属性】
技术研发人员：北善纪，
申请(专利权)人：藤仓化成株式会社，
类型：发明
国别省市：日本;JP