一种代谢标志物在早期诊断AD和预示益智仁对AD疗效方面的应用制造技术

本发明专利技术公开了一种代谢标志物在早期诊断AD和预示益智仁对AD疗效方面的应用。本发明专利技术发现AD大鼠脑组织中1‑Pyrroline‑4‑hydroxy‑2‑carboxylate、D‑Threo‑Isocitric Acid、3‑Ureidoisobutyrate这三种代谢物表达异常，具有作为代谢标志物早期诊断AD和预示益智仁对AD疗效的应用前景；本发明专利技术还发现，AD大鼠血浆中Sphingosine、Succinic semialdehyde、Deoxycholic acid、12,13‑Dihome这四种代谢物表达异常，具有作为代谢标志物早期诊断AD和预示益智仁对AD疗效的应用前景。

【技术实现步骤摘要】
一种代谢标志物在早期诊断AD和预示益智仁对AD疗效方面的应用
本专利技术属于生物化学领域，涉及代谢标志物在疾病诊断和药物疗效评价方面的应用，具体涉及一种代谢标志物在早期诊断AD和预示益智仁对AD疗效方面的应用。
技术介绍
阿尔茨海默症(AlzheimerDisease，AD)是中枢神经系统的退行性疾病，具有极高的死亡率，与遗传因素和年龄密切相关。由于患病人群常为70岁以上老人，故又称为老年痴呆症。AD的病理学特征主要表现为大脑皮层和海马区大量淀粉样老年斑块沉积、神经原纤维缠结及特定脑区选择性神经元和突触丢失，主要临床表现为进行性的记忆和认知功能下降，同时出现行为障碍和多种神经疾病症状。AD患者不会立即死亡，而是在7～12年的时间里慢慢失去各种生活能力。AD不仅会使患者面临死亡的恐惧，更为家庭和社会造成了极大负担。AD的治疗仍以常规的药物疗法为主。常用的药物主要有抗淀粉样蛋白类药物、胆碱能抑制剂类药物、自由基清除和抗氧化类药物、抗炎症类药物、脑代谢激活剂类药物及中医药复方类药物等。但是，目前并没有药物可以有效根治AD，故治疗AD的药物仍是当今的热点问题，更多药物还在不断的研究和开发中。研究表明，益智仁对AD具有一定的疗效。为发现早期诊断AD和预示益智仁对AD疗效的标志物，从而将该标志物用于早期诊断AD和预示益智仁对AD疗效，特提出本专利技术。
技术实现思路
本专利技术旨在提供一种代谢标志物在早期诊断AD和预示益智仁对AD疗效方面的应用。本专利技术上述目的通过如下技术方案实现：一种代谢标志物在制备早期诊断AD的诊断试剂或试剂盒方面的应用，所述代谢标志物为脑组织1-Pyrroline-4-hydroxy-2-carboxylate、IsocitricAcid或3-Ureidoisobutyrate。一种代谢标志物在制备早期诊断AD的诊断试剂或试剂盒方面的应用，所述代谢标志物为血浆Sphingosine、Succinicsemialdehyde、Deoxycholicacid或12,13-Dihome。一种代谢标志物在制备预示益智仁对AD疗效的试剂或试剂盒方面的应用，该标志物为脑组织1-Pyrroline-4-hydroxy-2-carboxylate、IsocitricAcid或3-Ureidoisobutyrate。一种代谢标志物在制备预示益智仁对AD疗效的试剂或试剂盒方面的应用，该标志物为血浆Sphingosine、Succinicsemialdehyde、Deoxycholicacid或12,13-Dihome。一种早期诊断AD或预示益智仁对AD疗效的试剂盒，该试剂盒中含有1-Pyrroline-4-hydroxy-2-carboxylate、IsocitricAcid或3-Ureidoisobutyrate的标准品。一种早期诊断AD或预示益智仁对AD疗效的试剂盒，该试剂盒中含有Sphingosine、Succinicsemialdehyde、Deoxycholicacid或12,13-Dihome的标准品。优选地，上述试剂盒中还含有内标化合物的标准品。更优选地，内标化合物为2-氯-L-苯丙氨酸或酮洛芬。有益效果：本专利技术发现AD大鼠脑组织中1-Pyrroline-4-hydroxy-2-carboxylate、IsocitricAcid、3-Ureidoisobutyrate这三种代谢物表达异常，具有作为代谢标志物早期诊断AD和预示益智仁对AD疗效的应用前景；本专利技术还发现，AD大鼠血浆中Sphingosine、Succinicsemialdehyde、Deoxycholicacid、12,13-Dihome这四种代谢物表达异常，具有作为代谢标志物早期诊断AD和预示益智仁对AD疗效的应用前景。具体实施方式下面结合实施例具体介绍本专利技术实质性内容，但并不以此限定本专利技术的保护范围。一、试验材料益智仁购自河南同仁堂药业有限公司，经河南中医药大学李寒冰教授鉴定。Aβ1-42和2-氯-L-苯丙氨酸购自J&K化学(中国北京)。兔抗Aβ抗体购自武汉赛维生物科技有限公司。酮洛芬和高效液相色谱级甲酸购自Sigma-Aldrich。高效液相色谱级甲醇购自FisherScientific。纯净水购自娃哈哈(杭州)有限公司。二、试验方法1、药物提取和溶液制备将干燥的益智仁(10kg)粉碎，用95％乙醇(1:10，w/v)回流提取3次，每次2h。合并提取液，60℃减压浓缩。取适量浸膏，按比例加入蓖麻油(2g:1mL)，搅拌均匀，然后加入适量纯水，制成浓度为162mg/mL的益智仁提取物溶液，备用。2、AD造模和给药雄性2月龄SD大鼠(250-300g)购自河南省动物实验中心。所有动物在标准条件下(温度20℃±2℃，相对湿度55％±10％，光/暗循环12:12h)自由进食和饮水。将Aβ1-42溶于浓度为1mg/ml的无菌生理盐水中稀释，37℃孵育7d，形成多肽聚集后注射。SD大鼠适应性喂养1周后，随机分为3组(n＝6/组)：假手术组(S组：生理盐水处理)，AD模型组(M组：Aβ1-42和D-半乳糖处理，生理盐水处理)，总提取物组(T组：Aβ1-42和D-半乳糖损伤，用益智仁提取物700mg/kg/日处理)。AD模型组和总提取物组每日腹腔注射D-半乳糖1次，连续4周。假手术组大鼠注射生理盐水。第五周，用10％水合氯醛(0.3mL/kg)麻醉大鼠，置于立体定向仪上。AD模型组和总提取物组大鼠双侧海马区(AP，±3.5mm，ML，±2.0mm，DV，-3.0mm)注射聚集的Aβ1-42(10μL)，5min后拔针以使药物充分扩散。假手术组注射等量生理盐水。注射Aβ后给药。益智仁提取物(700mg/kg)灌胃给药，每日1次，连续3周；假手术组、AD模型组大鼠给予等量生理盐水，含8％蓖麻油。3、水迷宫试验给药2周后，进行水迷宫试验，评价各组大鼠的空间学习和参考记忆能力。实验装置由黑色圆形水池(直径150厘米，高度60厘米)、黑色圆形平台(直径9厘米，高度38.5厘米)和图像采集系统组成。圆形水池被分成四个相等的象限，目标平台被放置在一个象限的中点。摄像机放置在桶中心上方2米处，记录每次试验期间的逃生潜伏期和路径长度。试验开始前，将水(25±2℃)灌入池中，水位高于平台约1.5cm。试验包括位置导航试验和空间探测试验。每只大鼠每天进行两处导航试验，间隔15分钟，持续5天。老鼠被放在面向墙壁的池子里，让它们自由游动以逃离平台。如果大鼠在60秒内找不到平台，则需要引导其进入平台并在平台上停留10秒。为了确定大鼠的空间学习能力，在第6天进行空间探索实验。空间探索实验的过程包括：将平台从水池中取出，让大鼠自由游动60秒，采用计算机视频图像分析系统对所有数据进行记录和分析。4、样品采集和制备给药3周后，用10％水合本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种代谢标志物在制备早期诊断AD的诊断试剂或试剂盒方面的应用，所述代谢标志物为脑组织1-Pyrroline-4-hydroxy-2-carboxylate、Isocitric Acid或3-Ureidoisobutyrate。/n

【技术特征摘要】
1.一种代谢标志物在制备早期诊断AD的诊断试剂或试剂盒方面的应用，所述代谢标志物为脑组织1-Pyrroline-4-hydroxy-2-carboxylate、IsocitricAcid或3-Ureidoisobutyrate。


2.一种代谢标志物在制备早期诊断AD的诊断试剂或试剂盒方面的应用，所述代谢标志物为血浆Sphingosine、Succinicsemialdehyde、Deoxycholicacid或12,13-Dihome。


3.一种代谢标志物在制备预示益智仁对AD疗效的试剂或试剂盒方面的应用，该标志物为脑组织1-Pyrroline-4-hydroxy-2-carboxylate、IsocitricAcid或3-Ureidoisobutyrate。


4.一种代谢标志物在制备预示益智仁对AD疗效的试剂或试剂盒方面的应用，该标志物...

【专利技术属性】
技术研发人员：孙志，周霖，左莉华，张梦雅，李嘉，张素枝，杜秋争，张晓坚，康建，
申请(专利权)人：郑州大学第一附属医院，
类型：发明
国别省市：河南;41