【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物医药，特别是涉及一种人胶质瘤dna标志物及其应用。
技术介绍
1、本专利技术涉及生物医药
，为人胶质瘤的三基因标志物及其应用，具体涉及胶质瘤预后和预测免疫细胞浸润。
2、胶质瘤(glioma)包括星形细胞瘤和少突胶质细胞瘤，是成人最常见的恶性原发性脑肿瘤，是中枢神经系统(centralnervoussystem，cns)最常见的恶性肿瘤，占成人恶性原发性脑肿瘤的75％，具有高复发率和高死亡率的特点。2021年，who对胶质瘤的分级进行了新一轮的修订，从组织学特点，异柠檬酸脱氢酶状态，组织学分级以及分子学特点的四个维度对胶质瘤进行了更详细的分类，以期根据分型为患者分配更有针对性的治疗方法。
3、胶质瘤的常规治疗方案主要是手术切除辅以术后放化疗。尽管近年来在胶质瘤诊断和治疗方法上不断发展完善，但患者的预期寿命并没有显著提高。手术切除的关键在于在保证安全的前提下，尽可能切除肿瘤。一项回顾性研究发现，对于初发的胶质瘤，手术切除的程度与患者的预后密切相关，肿瘤的切除程度越大，患者生存率越高。但对于浸润性的肿瘤，手术通常无法完全切除。以替莫唑胺为代表药物的化疗自1999年应用于临床以来取得了良好的治疗效果，它主要通过攻击dna诱导肿瘤细胞的凋亡，但胶质瘤细胞固有的或获得的耐药性限制了化疗的治疗效果。放疗是胶质瘤治疗过程中非常重要的部分，它可以进一步杀死手术无法完全切除的以及化疗耐药的残余肿瘤细胞，可以延长低级别胶质瘤患者的生存期，但胶质瘤对放疗的敏感性不强，且正常脑组织对于放疗的耐受性较差，这
4、据报道，胶质瘤中存在复发性染色体异常和遗传改变，异柠檬酸脱氢酶(idh)突变影响对胶质瘤的免疫反应。idh是一种催化异柠檬酸氧化脱羧生成α-酮戊二酸酯(αkg)的酶。idh1和idh2突变很常见，发生在80％以上的胶质瘤患者中，并通过多次复发、化疗和切除持续存在。idh突变型(idh-mut)导致αkg有效性降低和2-羟戊二酸(2hg)的积累，导致基因组的高甲基化和数千个基因沉默。此外，idh-mut癌症诱导基因组dna和组蛋白的超甲基化，导致包括免疫相关基因在内的各种基因的表观遗传功能障碍和转录抑制。越来越多的证据表明，idh-mut与胶质瘤患者的免疫反应抑制之间存在相关性，可能对胶质瘤患者有抑制作用。
5、免疫疗法已成为各种癌症的第四种替代治疗方法，前景广阔，然而它对脑肿瘤的疗效尚未得到证实。先前的研究表明，神经胶质瘤中有淋巴细胞浸润，淋巴细胞是大脑(免疫特权器官)临床结果的预测因子。鉴于idh-mut对胶质瘤免疫细胞含量的影响，利用分子标志物预测胶质瘤预后的研究越来越多。
6、虽然有大量研究探讨了idh-mut胶质瘤患者的免疫状态及其临床意义，但idh-wt胶质瘤患者免疫状态的研究却很少。本研究分析了idh-mut和idh-wt胶质瘤之间的免疫系统差异，并随后将重点放在idh-wt胶质瘤人群中，以开发三基因免疫相关信号作为独立的预后因素。该预后模型为idh-wt胶质瘤患者提供了一个全面的视角，突出了其在临床预后预测中的潜在价值。
7、ngs技术的快速发展和生物信息学分析工具的广泛应用为人类对肿瘤的认识提供了极大帮助。在通过ngs和生物信息学分析探讨肿瘤发病机制和预后因素的过程中，发现了三基因(pbk、spp1、lta)在肿瘤中发挥关键作用。因此，构建具有高潜在临床应用价值的预后的基因意义重大，但在临床实践过程中寻找胶质瘤预后预测敏感性和特异性高的单独一个基因标志物依然困难重重。
技术实现思路
1、针对上述问题，本专利技术提出了一种人胶质瘤dna标志物，很好的解决了现有技术中准确度不高，检测成本偏高的技术问题。
2、为了实现上述目的，本专利技术采用的技术方案如下：一种人胶质瘤dna标志物，所述标志物包括3个dna，分别为pbk、spp1和lta，对应的dna核苷酸序列分别如seq id no.1、seqid no.2、seq id no.3所示。
3、进一步的，所述的人胶质瘤dna标志物用于预测人胶质瘤患者免疫细胞浸润的用途。
4、进一步的，所述的人胶质瘤dna标志物用于制备人胶质瘤检测试剂中的用途。
5、进一步的，所述的人胶质瘤dna标志物在用于制备人胶质瘤患者预测免疫反应试剂盒中的用途。
6、进一步的，所述试剂盒包含特异性针对标志物pbk、spp1和lta的引物、探针以及标准品。
7、进一步的，所述引物的具体序列如下：
8、pbk-上游引物：aggtttgtctcattctccttggg；
9、pbk-下游引物：agcaagacacagactgccat；
10、spp1-上游引物：gccgaggtgatagtgtggtt；
11、spp1-下游引物：caatcagaaggcgcgttcag；
12、lta-上游引物：agatgcatcttgcccacagc；
13、lta-下游引物：accacctgggagtagacgaa。
14、进一步的，一种采用所述标志物的检测方法，该方法包括以下步骤：样品总rna的提取、样品cdna的制备和dna的扩增，具体方法如下：
15、步骤一：样品总rna的提取：按照trizol试剂说明书步骤提取胶质瘤肿瘤组织总rna，检测提取rna的浓度和纯度，并通过琼脂糖凝胶电泳质检确定提取rna的完整性；
16、步骤二：样品cdna的制备：采用tianscript ii rtkit试剂盒试剂及相应步骤对提取的总rna反转录，合成cdna；
17、步骤三：dna的扩增：采用荧光定量pcr试剂盒试剂及相应步骤，以反转录的cdna为模板，通过steponeplustmreal-timepcr系统，分别对2种dna进行pcr扩增。
18、进一步的，单个所述dna的pcr扩增体系为：10μmol/l的上游引物0.8μl，10μmol/l的下游引物0.8μl，胶质瘤样本cdna2 μl，50×roxreferencedye0.4μl，tbgreenpremixextaqii(tlirnasehplus)(2×)10μl，去离子水6μl。
19、进一步的，所述pcr扩增程序为：95℃30s预变性；接40个循环：95℃5s，60℃30s；pcr溶解曲线的生成反应程序为：95℃15s，60℃60s，95℃15s。
20、与现有技术相比，本专利技术具有以下有益效果：
21、本专利技术提供一种用于胶质瘤(glioma)预后预测的分子标志物及其应用，本专利技术基于大样本胶质瘤患者的本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种人胶质瘤DNA标志物，其特征在于：所述标志物包括3个DNA，分别为PBK、SPP1和LTA，对应的DNA核苷酸序列分别如SEQIDNO.1、SEQIDNO.2、SEQIDNO.3所示。
2.如权利要求1所述的人胶质瘤DNA标志物用于预测人胶质瘤患者免疫细胞浸润的用途。
3.如权利要求1所述的人胶质瘤DNA标志物用于制备人胶质瘤检测试剂中的用途。
4.如权利要求1所述的人胶质瘤DNA标志物在用于制备人胶质瘤患者预测免疫反应试剂盒中的用途。
5.如权利要求4所述的用途，其特征在于，所述试剂盒包含特异性针对标志物PBK、SPP1和LTA的引物、探针以及标准品。
6.如权利要求5所述的用途，其特征在于，所述引物的具体序列如下：
7.一种采用权利要求6所述的人胶质瘤DNA标志物的检测方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：样品总RNA的提取、样品cDNA的制备和DNA的扩增，具体方法如下：
8.如权利要求7所述的检测方法，其特征在于，单个所述DNA的PCR扩增体系为：10μmol/L的上游引物0.8μ
9.如权利要求7所述的检测方法，其特征在于，PCR扩增程序为：95℃30s预变性；接40个循环：95℃5s，60℃30s；PCR溶解曲线的生成反应程序为：95℃15s，60℃60s，95℃15s。
...【技术特征摘要】
1.一种人胶质瘤dna标志物，其特征在于：所述标志物包括3个dna，分别为pbk、spp1和lta，对应的dna核苷酸序列分别如seqidno.1、seqidno.2、seqidno.3所示。
2.如权利要求1所述的人胶质瘤dna标志物用于预测人胶质瘤患者免疫细胞浸润的用途。
3.如权利要求1所述的人胶质瘤dna标志物用于制备人胶质瘤检测试剂中的用途。
4.如权利要求1所述的人胶质瘤dna标志物在用于制备人胶质瘤患者预测免疫反应试剂盒中的用途。
5.如权利要求4所述的用途，其特征在于，所述试剂盒包含特异性针对标志物pbk、spp1和lta的引物、探针以及标准品。
6.如权利要求5所述的用途，其特征在于，所述引物的具体序列如下：
7....
【专利技术属性】
技术研发人员：王伟伟，王启蒙，仇宇宁，王乐，张振宇，李文才，
申请(专利权)人：郑州大学第一附属医院，
类型：发明
国别省市：
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