【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物医药，具体涉及nasp和anxa2作为人胶质母细胞瘤放疗敏感性预测标志物的应用。
技术介绍
1、胶质母细胞瘤(glioblastoma,gbm)是一种侵袭性较高的原发性脑肿瘤，属于4级的高级别胶质瘤，是星形细胞肿瘤中恶性程度最高的胶质瘤，也是颅内最常见的恶性原发肿瘤，占中枢神经系统(central nervous system，cns)原发恶性肿瘤的50.1％。目前，针对gbm的治疗，首选方法为外科手术治疗，术后辅以放疗或/和替莫唑胺化疗的多模态综合治疗，然而，尽管多数患者接受了标准的治疗方案，其复发率仍然较高，预后极差。最新数据显示gbm患者的中位生存期是8个月，5年相对生存率仅为6.9％，尽管术后进行了标准的同步放化疗，中位生存期也只有15-17个月。因此，为了改善gbm患者的预后，提高gbm患者的生存质量，迫切需要寻找更为有效的治疗方法以及能减少药物和放疗耐受的新型治疗靶点。
2、放射治疗是癌症治疗方式中最广泛且有效的重要方式之一，其通过物理电离和水电离的放射产生过氧化物离子和自由基，对dna造成直接和间接的损伤，进而达到杀伤肿瘤的目的。欧洲癌症研究与治疗组织(eortc)和加拿大国家癌症研究所(ncic)针对gbm的一项iii期临床试验表明，放疗和替莫唑胺辅助化疗可以改善患者的总生存期无进展生存期。基于此，目前gbm的标准治疗方案为周一至周五每天2gy的放射治疗，总剂量为60gy，放疗结束后每28天给予替莫唑胺维持治疗，为期5天，共6个周期。
3、尽管近年来放射肿瘤学领域取得了较
技术实现思路
1、本专利技术的目的是克服现有技术的不足而提供一种具有能够预测gbm放疗敏感性的nasp和anxa2作为人胶质母细胞瘤放疗敏感性预测标志物的应用。
2、本专利技术的技术方案如下：
3、nasp和anxa2作为人胶质母细胞瘤放疗敏感性预测标志物的应用。
4、进一步，所述nasp和anxa2的dna核苷酸序列如seq id no.1所示。
5、本专利技术还公开了nasp和anxa2在制备人胶质母细胞瘤患者放疗敏感性试剂盒中的应用。
6、进一步，所述试剂盒包含特异性针对标记nasp和anxa2的引物和探针以及标准品。
7、进一步，所述引物的具体序列如下：
8、nasp-上游引物：ctgaaaacgaggcaggaaag；
9、nasp-下游引物：ctgcaccatccttagggaga；
10、anxa2-上游引物：acacctgctcagtatgacgc；
11、anxa2-下游引物：caggaccttatctcgcgtcc。
12、进一步，nasp和anxa2的检测方法包括如下步骤：
13、1)样品总rna的提取：按照trizol试剂说明书步骤提取胶质母细胞瘤肿瘤组织总rna，检测提取胶质母细胞瘤肿瘤组织总rna的浓度和纯度，并通过琼脂糖凝胶电泳质检确定提取胶质母细胞瘤肿瘤组织总rna的完整性；
14、2)样品cdna的制备：采用tianscriptⅱrt kit试剂盒试剂及相应步骤对提取的胶质母细胞瘤肿瘤组织总rna反转录，合成cdna；
15、3)dna的扩增：采用tbpremix ex taqtm荧光定量pcr试剂盒试剂以反转录的cdna为模板，通过steponeplustmreal-time pcr系统，分别对nasp和anxa2进行pcr扩增。
16、进一步，所述nasp和anxa2的pcr扩增体系为：10μmol/l的上游引物0.8μl,10μmol/l的下游引物0.8μl，胶质母细胞瘤样本cdna 2μl，50×rox reference dye 0.4μl，tbgreen premix ex taq ii(tlirnaseh plus)(2×)10μl，去离子水6μl。
17、进一步，所述pcr扩增程序为：95℃30s，预变性；接40个循环：95℃5s，60℃30s，pcr溶解曲线的生成反应程序为：95℃15s，60℃60s，95℃15s。
18、与现有技术相比，本专利技术的有益效果是：
19、1、本专利技术基于gbm患者新鲜组织样本wes测序结果和免疫组化结果，鉴定出nasp和anxa2基因可以准确预测gbm患者的放疗敏感性，具有重要的临床应用价值。
20、2、本专利技术证实nasp和anxa2在gbm中高表达，nasp和anxa2基因可以对gbm患者放疗敏感性进行预测。
21、3、本专利技术证实nasp基因可以促进gbm细胞系的增殖、迁移和侵袭能力，该标记表明nasp可作为未来gbm治疗的新靶点，nasp基因可作为gbm患者预后生存时间的参考判断指标及预后生存风险预测参考。
22、4、本专利技术证明了nasp和anxa2基因与gbm细胞的放疗抵抗密切相关，通过研究nasp和anxa2基因与gbm放疗敏感性的关系，为gbm患者放疗敏感性预测提供新的标志物，以便对gbm患者及时干预治疗，改善临床预后。
23、总之，本专利技术具有能够预测gbm放疗敏感性的优点。
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1.NASP和ANXA2作为人胶质母细胞瘤放疗敏感性预测标志物的应用。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述NASP和ANXA2的DNA核苷酸序列如SEQID NO.1所示。
3.NASP和ANXA2在制备人胶质母细胞瘤患者放疗敏感性试剂盒中的应用。
4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于：所述试剂盒包含特异性针对标记NASP和ANXA2的引物和探针以及标准品。
5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于：所述引物的具体序列如下：
6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于：NASP和ANXA2的检测方法包括如下步骤：
7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于：所述NASP和ANXA2的PCR扩增体系为：10μmol/L的上游引物0.8μL,10μmol/L的下游引物0.8μL，胶质母细胞瘤样本cDNA 2μL，50×ROXReference Dye 0.4μL，TB Green Premix Ex Taq II(TliRNaseH Plus)(2×)10μL，去离子水6μL。
8.根据权
...【技术特征摘要】
1.nasp和anxa2作为人胶质母细胞瘤放疗敏感性预测标志物的应用。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述nasp和anxa2的dna核苷酸序列如seqid no.1所示。
3.nasp和anxa2在制备人胶质母细胞瘤患者放疗敏感性试剂盒中的应用。
4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于：所述试剂盒包含特异性针对标记nasp和anxa2的引物和探针以及标准品。
5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于：所述引物的具体序列如下：
6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于：nasp和anxa2的检测方法包括如下步骤：...
【专利技术属性】
技术研发人员：王伟伟，张振宇，仇宇宁，刘献志，裴东领，王旻凯，王启蒙，马泽宇，
申请(专利权)人：郑州大学第一附属医院，
类型：发明
国别省市：
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