本发明专利技术公开了一种重组基因VII型新城疫病毒弱毒株rN7a株，该rN7a株为保藏号为CCTCC NO:V201545的新城疫病毒N7a株的P蛋白基因序列替换为SEQ ID No.1所示的P蛋白基因序列。本发明专利技术的rN7a株培养后病毒滴度高、HA效价高。本发明专利技术还公开了包含该rN7a株或其培养物灭活抗原的疫苗组合物，本发明专利技术的疫苗组合物能能对多种毒株提供完全保护。
A recombinant Newcastle disease virus type VII strain and its vaccine composition, preparation method and Application
【技术实现步骤摘要】
一种重组基因VII型新城疫病毒毒株及其疫苗组合物、制备方法及应用
本专利技术涉及一种重组基因VII型新城疫病毒毒株、其疫苗组合物、制备方法及应用，属于生物
技术介绍
新城疫(Newcastledisease,ND)又称亚洲鸡瘟、伪鸡瘟，是禽副粘病毒9种血清型中的血清I型禽副粘病毒(即新城疫病毒，NDV)引起的鸡和火鸡等多种禽类急性、高度接触性传染病，常呈败血症症状。新城疫是一种严重的高度传染性、病毒性疾病，其在全球许多国家分布广泛并造成了重大的经济损失；同时，临床上新城疫病毒与其它呼吸道病原体协同致病的现象也较为常见，是家禽行业的一个主要威胁。从近十年来新城疫的流行特点来看，临床上所分离到的新城疫强毒大多数属于基因VII型，然而不同新城疫病毒分离株之间的毒力差异较大，在鸡胚上的生长特性差异明显。在制备新的新城疫疫苗过程中，常用新城疫病毒拯救方法对新城疫病毒毒株进行致弱，从而开发出与临床流行毒株相匹配的、免疫原性良好的疫苗组合物。但是拯救后的毒株在实际大规模生产时发现生产效率低，在病毒含量、血凝活性的提高上还需要进一步改善。
技术实现思路
为解决现有技术的不足，本专利技术提供了一种重组基因VII型新城疫病毒弱毒株rN7a株，其中，所述rN7a株为保藏号为CCTCCNO:V201545的新城疫病毒N7a株的P蛋白基因序列经替换为SEQIDNo.1所示的P蛋白基因序列后得到的弱毒株。基因VII型新城疫毒株N7a株的保藏号为CCTCCNo.V201545，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏地址为中国武汉·武汉大学，保藏时间为2015年10月19日，参见中国专利CN107287168A。本专利技术的重组基因VII型新城疫病毒弱毒株rN7a株具有扩增后病毒滴度高、HA效价高的优点，是优良的疫苗制备用毒株。本专利技术还涉及一种预防和/或治疗新城疫病毒感染的疫苗组合物，其中，所述疫苗组合物包含免疫量的所述的重组基因VII型新城疫病毒弱毒株rN7a株或其培养物的抗原，以及药学上可以接受的载体，其中，所述重组基因VII型新城疫病毒弱毒株N7a-FJ-02株或其培养物的抗原选自灭活全病毒抗原、活的减毒全病毒抗原、亚单位抗原、合成肽抗原或/和活载体抗原。本专利技术的疫苗组合物能对多种新城疫病毒毒株提供完全保护，具有广谱的免疫原性。本专利技术的疫苗组合物制备时重组基因VII型新城疫病毒弱毒株rN7a株稀释倍数高，大幅度地降低了生产成本、提高了经济效益；免疫动物后产生的HI抗体效价较快且较高，可完全保护多个临床野毒株及标准强毒株的攻击。作为本专利技术的一种实施方式，本专利技术的所述疫苗组合物中，所述重组基因VII型新城疫病毒弱毒株N7a-FJ-02株或其培养物的抗原为灭活全病毒抗原。作为本专利技术的一种实施方式，本专利技术的所述疫苗组合物中，所述重组基因VII型新城疫病毒弱毒株rN7a株的培养物为1～50代次的培养物。作为本专利技术的一种优选实施方式，本专利技术所述的疫苗组合物中，所述重组基因VII型新城疫病毒弱毒株rN7a株的培养物为1～40代次的培养物。作为本专利技术的一种更优选的实施方式，本专利技术所述的疫苗组合物中，所述重组基因VII型新城疫病毒弱毒株rN7a株的培养物为1～35代次的培养物。作为本专利技术的进一步优选的实施方式，本专利技术所述的疫苗组合物中，所述重组基因VII型新城疫病毒弱毒株rN7a株的培养物为1～30代次的培养物，作为本专利技术的进一步优选的实施方式，本专利技术所述的疫苗组合物中，所述重组基因VII型新城疫病毒弱毒株rN7a株的培养物为1～25代次的培养物。作为本专利技术的进一步优选的实施方式，本专利技术所述的疫苗组合物中，所述重组基因VII型新城疫病毒弱毒株rN7a株的培养物为1～20代次的培养物。作为本专利技术的进一步优选的实施方式，本专利技术所述的疫苗组合物中，所述重组基因VII型新城疫病毒弱毒株rN7a株的培养物1～16代次的培养物。本专利技术的重组基因VII型新城疫病毒弱毒株rN7a株培养物可以选自1代次培养物、2代次培养物、3代次培养物、4代次培养物、5代次培养物、6代次培养物、7代次培养物、8代次培养物、9代次培养物、10代次培养物、11代次培养物、12代次培养物、13代次培养物、14代次培养物、15代次培养物、16代次培养物、20代次培养物、25代次培养物、30代次培养物、35代次培养物、40代次培养物、45代次培养物、50代次培养物。作为本专利技术的一种实施方式，本专利技术所述的疫苗组合物中，所述重组基因VII型新城疫病毒弱毒株rN7a株或其培养物灭活全病毒抗原含量为灭活前≥108.0EID50/0.1ml。作为本专利技术的一种优选实施方式，本专利技术所述的疫苗组合物中，所述重组基因VII型新城疫病毒弱毒株rN7a株或其培养物灭活全病毒抗原含量为灭活前108.0EID50/0.1ml～109.0EID50/0.1ml。本专利技术的重组基因VII型新城疫病毒弱毒株rN7a株或其培养物灭活全病毒抗原含量可以选自108.0EID50/0.1ml、108.1EID50/0.1ml、108.2EID50/0.1ml、108.3EID50/0.1ml、108.4EID50/0.1ml、108.5EID50/0.1ml、108.6EID50/0.1ml、108.7EID50/0.1ml、108.8EID50/0.1ml、108.9EID50/0.1ml、109.0EID50/0.1ml。作为本专利技术的一种更优选的实施方式，本专利技术所述的疫苗组合物中，所述重组基因VII型新城疫病毒弱毒株rN7a株或其培养物灭活全病毒抗原含量为灭活前108.0EID50/0.1ml。作为本专利技术的一种实施方式，本专利技术所述的疫苗组合物中，所述药学上可以接受的载体包括佐剂，所述佐剂包括：(1)白油、铝胶佐剂、皂苷、阿夫立定、DDA；(2)油包水乳剂、水包油乳剂、水包油包水乳剂；或(3)丙烯酸或甲基丙烯酸的聚合物、顺丁烯二酸酐和链烯基衍生物的共聚物；以及RIBI佐剂系统、Blockco-polymer、SAF-M、单磷酰脂质A、Avridine脂质-胺佐剂、大肠杆菌不耐热肠毒素、霍乱毒素、IMS1314、胞壁酰二肽、Gel佐剂中的一种或几种；优选地，皂苷为QuilA、QS-21、GPI-0100。作为本专利技术的一种实施方式，所述药学上可接受的载体包括佐剂，所述佐剂包括(1)氢氧化铝、皂苷、阿夫立定、DDA，(2)丙烯酸或甲基丙烯酸的聚合物、顺丁烯二酸酐和链烯基衍生物的聚合物，或(3)水包油乳剂、油包水乳剂或水包油包水乳剂，所述佐剂的浓度范围是从10％到70％V/V，优选为30％到60％V/V，更有选为60％V/V。作为本专利技术的一种优选实施方式，所述佐剂包括(1)皂苷QuilA；(2)丙烯酸或甲基丙烯酸聚合物与糖或多元醇的聚链烯基醚交联产物卡波姆；或(3)所述佐剂包括基于轻液体石蜡油、类异戊二烯油的乳剂，例如角鲨烷或角鲨烯；烯烃，特别是异丁烯或葵烯低聚化产生的油，带直链烷基的酸或醇形成本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种重组基因VII型新城疫病毒弱毒株rN7a株，其中，所述rN7a株为保藏号为CCTCCNO:V201545的新城疫病毒N7a株的P蛋白基因序列经替换为SEQ ID No.1所示的P蛋白基因序列后得到的弱毒株。/n
【技术特征摘要】
1.一种重组基因VII型新城疫病毒弱毒株rN7a株，其中，所述rN7a株为保藏号为CCTCCNO:V201545的新城疫病毒N7a株的P蛋白基因序列经替换为SEQIDNo.1所示的P蛋白基因序列后得到的弱毒株。
2.一种预防和/或治疗新城疫病毒感染的疫苗组合物，其中，所述疫苗组合物包含免疫量的权利要求1所述的重组基因VII型新城疫病毒弱毒株rN7a株或其培养物的抗原，以及药学上可以接受的载体，其中，所述重组基因VII型新城疫病毒弱毒株N7a-FJ-02株或其培养物的抗原选自灭活全病毒抗原、活的减毒全病毒抗原、亚单位抗原、合成肽抗原或/和活载体抗原；优选地，所述重组基因VII型新城疫病毒弱毒株N7a-FJ-02株或其培养物的抗原为灭活全病毒抗原。
3.根据权利要求2所述的疫苗组合物，其中，所述重组基因VII型新城疫病毒弱毒株rN7a株的培养物为1～50代次的培养物；优选地，所述重组基因VII型新城疫病毒弱毒株rN7a株的培养物为1～40代次的培养物；更优选地，所述重组基因VII型新城疫病毒弱毒株rN7a株的培养物为1～35代次的培养物；进一步优选地，所述重组基因VII型新城疫病毒弱毒株rN7a株的培养物为1～30代次的培养物；进一步优选地，所述重组基因VII型新城疫病毒弱毒株rN7a株的培养物为1～25代次的培养物；进一步优选地，所述重组基因VII型新城疫病毒弱毒株rN7a株的培养物为1～20代次的培养物；最优选地，所述重组基因VII型新城疫病毒弱毒株rN7a株的培养物1～16代次的培养物。
4.根据权利要求2所述的疫苗组合物，其中，所述重组基因VII型新城疫病毒弱毒株rN7a株或其培养物灭活全病毒抗原含量为灭活前≥108.0EID50/0.1ml；优选地，所述重组基因VII型新城疫病毒弱毒株rN7a株或其培养物灭活全病毒抗原含量为灭活前108.0EID50/0.1ml～109.0EID50/0.1ml；更优选地，所述重组基因VII型新城疫病毒弱毒株rN7a株或其培养物灭活全病毒抗原含量为灭活前108.0EID50/0.1ml。
5.根据权利要求2所述的疫苗组合物，其中，所述药学上可以接受的载体包括佐剂，所述佐剂包括：(1)白油、铝胶佐剂、皂苷、阿夫立定、DDA；(2)油包水乳剂、水包油乳剂、水包油包水乳剂；或(3)丙烯酸或甲基丙...
【专利技术属性】
技术研发人员：田克恭，韩水仲，孙进忠，张许科，
申请(专利权)人：洛阳惠中生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：河南;41
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