【技术实现步骤摘要】
一种鱼肉腐败菌氨基酸脱羧能力的检测方法
本专利技术属于水产品贮藏保鲜技术与质量安全领域，具体涉及一种鱼肉腐败菌氨基酸脱羧能力的检测方法。
技术介绍
鱼肉由于营养丰富、易于消化、味道鲜美等特点，一直以来是我国居民日常膳食的重要组成部分；然而，鱼肉自身水分活度高、营养丰富，因而其在贮运过程中极易因腐败菌的生长繁殖而发生腐败变质，最终影响鱼肉产品的加工和消费。生物胺是鱼肉腐败过程中的重要腐败产物和品质指标。部分生物胺，如腐胺、尸胺等具有较强烈的刺激性气味，可严重影响鱼肉感官品质。其他生物胺，如组胺、酪胺、苯乙胺等具有一定的生理毒性，严重威胁消费者健康和食品安全。鱼肉中的生物胺主要是在腐败菌氨基酸脱羧酶的作用下，由相应氨基酸脱羧生成，如鸟氨酸脱羧生成腐胺，赖氨酸脱羧生成尸胺，组氨酸脱羧生成组胺等。有研究发现，不同腐败菌的氨基酸脱羧能力各不相同，同一腐败菌对不同种氨基酸底物的脱羧活性也有差异。可见，鱼肉腐败菌氨基酸脱羧能力的强弱对鱼肉中各种生物胺的生成有重要影响。研究和评价鱼肉腐败菌的氨基酸脱羧能力，有助于掌握各类腐败...
【技术保护点】
1.一种鱼肉腐败菌氨基酸脱羧能力的检测方法，其特征在于，包括：用磷酸盐缓冲液溶解待测氨基酸底物配制得到待测氨基酸的底物溶液，将含待测腐败菌的菌悬液加入到所述待测氨基酸的底物溶液中作为评价组，将含待测腐败菌的菌悬液加入到磷酸盐缓冲液中作为对照组，将无菌生理盐水加入到所述待测氨基酸的底物溶液中作为空白组，分别在相同条件下培养并提取评价组、对照组和空白组的生物胺，检测得到生物胺浓度C
【技术特征摘要】
1.一种鱼肉腐败菌氨基酸脱羧能力的检测方法，其特征在于，包括：用磷酸盐缓冲液溶解待测氨基酸底物配制得到待测氨基酸的底物溶液，将含待测腐败菌的菌悬液加入到所述待测氨基酸的底物溶液中作为评价组，将含待测腐败菌的菌悬液加入到磷酸盐缓冲液中作为对照组，将无菌生理盐水加入到所述待测氨基酸的底物溶液中作为空白组，分别在相同条件下培养并提取评价组、对照组和空白组的生物胺，检测得到生物胺浓度C评价、C对照和C空白，计算得到腐败菌对待测氨基酸的脱羧能力。
2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述腐败菌对待测氨基酸的脱羧能力采用下式计算：
DCA＝(T×V)×(C评价-C对照-C空白)/(M×TVC×t)；
式中：
DCA为腐败菌氨基酸的脱羧能力，μmol/h；
T为提取生物胺时的稀释倍数；
V为检测生物胺时反应体系的总体积；
M为生物胺的分子量，g/mol；
TVC为菌悬液的菌落总数，logCFU/mL；
t为反应时间，h。
3.根据权利要求1或2所述的检测方法，其特征在于，所述生物胺浓度的检测采用HPLC法。
4.根据权利要求3所述的检测方法，其特征在于，所述生物胺浓度的检测具体包括以下步骤：
(1)生物胺的衍生
0.4mL生物胺提取液中依次加入80uL2M的NaOH溶液和120uL的饱和NaHCO3溶液，摇匀后加入0.8mL10mg/mL的丹磺酰氯丙酮溶液，混合均匀后40℃避光反应45min，之后加入20uL浓度为25％的浓氨水终止反应，室温下静置30min后用乙腈定容至2.0mL，随后用有机相滤膜过滤；
(2)液相色谱检测滤液中各生物胺的峰面积
检测条件如下：
色谱柱为COSMOSIL5C18-PAQ(4.6ID×250mm)等C18填料的反相液相色谱柱；
流动相为，A相：0.1mol/L醋酸铵，B相：乙腈；
洗脱梯度，0min50％B，25min90％B，3...
【专利技术属性】
技术研发人员：罗永康，庄帅，洪惠，
申请(专利权)人：中国农业大学，
类型：发明
国别省市：北京;11
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