用于核酸提取的裂解液、核酸提取试剂盒及核酸提取方法技术

本发明专利技术公开了一种用于核酸提取的裂解液、核酸提取试剂盒及核酸提取方法。本发明专利技术的核酸提取裂解液包括0.5～2M钠盐、2～5M胍盐、1～5mM金属离子络合剂、0.25％～1％非离子表面活性剂和1％～3％PEG，其中，所述PEG的分子量为6000～10000Da，优选为8000Da。本发明专利技术的裂解液配比合理，能够充分有效地裂解细胞，裂解效率高，使得细胞中的核酸能够充分释放，得到浓度和纯度更高的核酸，有利于提高核酸的质量和提取效率；并且本发明专利技术的裂解液和试剂盒在整个核酸提取过程中不需要借助蛋白酶K进行蛋白质的消化去除，以及不使用醇类沉淀核酸，获得的核酸纯度高，片段完整。

【技术实现步骤摘要】
用于核酸提取的裂解液、核酸提取试剂盒及核酸提取方法
本专利技术属于核酸提取
，具体涉及一种用于核酸提取的裂解液、核酸提取试剂盒及核酸提取方法。
技术介绍
核酸是一类生物聚合物，是所有已知生命必不可少的组成物质，广泛存在于动植物细胞、微生物体内，分为脱氧核糖核酸(DNA)和核糖核酸(RNA)。目前，在分子生物学科的各个研究检测领域都离不开核酸的检测，核酸的提取纯化是分子生物学研究和临床检测的基础。现有的核酸提取方法主要包括碱裂解法、酚氯仿抽提法、螯合树脂法、离心柱膜吸附法以及磁珠法等。其中，碱裂解法等由于在提取过程中使用了有毒有害的有机溶剂，具有核酸质量不佳、操作步骤繁琐、耗时较长的缺陷。相较于其他方法，磁珠法操作更为简便，适用于多种样品类型，并且对样品要求较低。表面经过修饰的纳米磁珠，能够在高盐低PH的溶液环境中对核酸进行特异性的吸附，在外部磁场和洗涤液的作用下将核酸与蛋白质、多糖、脂肪等生物大分子物质分开，再通过改变溶液的pH值将磁珠与核酸进行分离，即可获得高质量的核酸；并且利用磁珠法进行核酸的提取纯化还能配合自动化核酸提取仪器进行，使得核酸的提取实现自动化、高通量化。现有的利用磁珠进行核酸提取的方法虽然取得了进步，但仍存在较多缺陷。首先，磁珠法提取核酸普遍使用的裂解液中通常含有蛋白酶K，需要借助蛋白酶K对生物样本中的蛋白质进行消化，尤其对于全血类样本，必须要加蛋白酶K才能保证能够提取得到高质量的核酸，蛋白酶K容易残留，提取时间较长，并且提取过程还需进行加热。其次，现有技术的核酸提取操作中，往往将样本的裂解和磁珠与DNA的结合分步进行，相对应的试剂盒往往包括独立分装的裂解液和结合液，这不仅使得核酸提取过程复杂，而且很大程度上增加了核酸污染的机率，不利于后续的检测以及检测的准确性。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种用于核酸提取的裂解液、核酸提取试剂盒及核酸提取方法，以期实现快速，高效，安全的提取生物样品中的核酸。作为本专利技术的第一方面，本专利技术提供了一种核酸提取裂解液。作为优选，所述裂解液包括0.5～2M钠盐、2～5M胍盐、1～5mM金属离子络合剂、0.25％～1％非离子表面活性剂和1％～3％PEG。其中，所述钠盐能够给溶液环境提供钠离子，促使带负电的核酸能与核酸吸附物特异性的结合在一起，并且钠盐能够改变生物样品的渗透压，以使生物样品更容易裂解，所述钠盐可以为醋酸钠、氯化钠、碘化钠等；所述胍盐是一种强蛋白质变性剂，采用胍盐来裂解细胞，能使核酸从蛋白质中释放出来；所述PEG能够选择性的沉淀核酸，使得核酸在溶液中集聚，更利于核酸核酸吸附物对核酸的吸附作用。在本专利技术中，核酸吸附物是指能够将核酸特异性地吸附在其表面，并在特定的条件下能够特异性地与核酸相分离的物质。在一些优选的方式中，所述核酸吸附物为磁珠。在另一些优选的方式中，所述核酸吸附物为吸附膜，例如硅胶吸附膜。作为优选，所述PEG的分子量为6000～10000Da。作为优选，所述PEG的分子量为8000Da。作为优选，所述钠盐为醋酸钠，所述胍盐为盐酸胍，所述金属离子络合剂为EDTA，所述非离子表面活性剂为TritonX-100。盐酸胍不仅能够快速的破坏细胞膜，还能够变性蛋白质，使得蛋白质变性沉淀，从而让核酸能够摆脱蛋白质的缠绕；EDTA即乙二胺四乙酸，其能够与Mg2+、Ca2+、Mn2+、Fe2+等金属离子结合，而减少金属离子对核酸质量的影响；TritonX-100即聚乙二醇辛基苯基醚-100，能够溶解脂质以增加细胞膜的通透性。作为优选，所述裂解液的pH值为7.0～7.5。作为优选，所述裂解液的pH值为7.4。作为本专利技术的第二方面，本专利技术提供一种核酸提取试剂盒。作为优选，所述试剂盒包括如上所述的裂解液。作为优选，所述裂解液包括0.5～2M钠盐、2～5M胍盐、1～5mM金属离子络合剂、0.25％～1％非离子表面活性剂和1％～3％PEG。作为优选，所述PEG的分子量为6000～10000Da。作为优选，所述PEG的分子量为8000Da。作为优选，所述钠盐为醋酸钠，所述胍盐为盐酸胍，所述金属离子络合剂为EDTA，所述非离子表面活性剂为TritonX-100。作为优选，所述裂解液的pH值为7.0～7.5。作为优选，所述裂解液的pH值为7.4。作为优选，所述试剂盒还包括第一洗涤缓冲液，所述第一洗涤缓冲液包括15～30mMTris-base，10～20mMEDTA，150～200mM氯化钠和50～60％无水乙醇，pH＝9.6。其中，Tris-base能够维持待提取样品裂解后释放的核酸的稳定性，以避免核酸的降解，提高核酸的浓度和纯度；所述无水乙醇能够使DNA在溶液中呈不融解状态，并能够增强核酸吸附物对核酸的吸附，保证核酸不溶解到水中；所述氯化钠和EDTA能够除去核酸表面的多余的蛋白质，并使核酸保持稳定。作为优选，所述试剂盒还包括第二洗涤缓冲液，所述第二洗涤缓冲液包括75％无水乙醇。其中，所述75％的无水乙醇能够充分的解离核酸表面的盐离子以及杂质。作为优选，所述试剂盒还包括洗脱液，所述洗脱液包括DEPC处理过的超纯水溶液。所述DEPC处理过的超纯水溶液不含醇类物质，能够很好保护核酸不被降解。需要说明的是，洗脱液不限于DEPC处理过的超纯水溶液，还可以为其他洗脱液，只要能够将核酸从核酸吸附物上洗脱下即可作为优选，所述试剂盒还包括核酸吸附物，该核酸吸附物能够特异性地吸附生物样品裂解后所释放的核酸，并且能够借助外力将核酸与生物样品的其他物质或生物样品裂解后所释放的其他物质进行分离。作为优选，所述核酸吸附物为磁珠或吸附膜；当吸附物为磁珠时，可以将裂解后的生物样品与磁珠混合而使核酸吸附到磁珠上，再通过磁力将携带核酸的磁珠从裂解后的生物样品中分离出；当吸附物为吸附膜时，以将裂解后的生物样品与吸附膜混合而使核酸吸附到吸附膜上，再通过外力，例如给与吸附膜一定压力将携带核酸的吸附膜与裂解后的生物样品分离。作为优选，所述磁珠为直径100～500nm超顺羟基纳米磁性，所述吸附膜为硅胶吸附膜。作为优选，所述磁珠的直径为200nm。示例性地，当所述核酸吸附物为磁珠时，所述试剂盒的使用方法包括如下步骤：(1)向裂解液中加入一定量的生物样本和磁珠，样本细胞在裂解液的作用下破碎，释放核酸，让核酸与蛋白质分离并且聚集，同时特异性地与磁珠相结合，在外部磁场作用下，将磁珠与含有生物样本碎片的裂解液分离；(2)向吸附有核酸的磁珠中加入第一洗涤缓冲液进行洗涤，以除去核酸表面多余的蛋白质，在外部磁场作用下，将磁珠与第一洗涤缓冲液分离；(3)向吸附有核酸的磁珠中加入第二洗涤缓冲液进行洗涤，以除去核酸表面的盐离子，在外部磁场作用下，将纳米磁珠与第二洗涤缓冲液分离；(4)向洗涤后的吸附有核酸的磁珠中加入洗脱液，让核酸与磁珠分离，回收溶液，即得核酸。作为本专利技术的第三方面，本专利技术本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种核酸提取裂解液，其特征在于，所述裂解液包括0.5～2M钠盐、2～5M胍盐、1～5mM金属离子络合剂、0.25％～1％非离子表面活性剂和1％～3％PEG。/n

【技术特征摘要】
1.一种核酸提取裂解液，其特征在于，所述裂解液包括0.5～2M钠盐、2～5M胍盐、1～5mM金属离子络合剂、0.25％～1％非离子表面活性剂和1％～3％PEG。


2.根据权利要求1所述的裂解液，其特征在于，所述PEG的分子量为6000～10000Da。


3.根据权利要求2所述的裂解液，其特征在于，所述PEG的分子量为8000Da。


4.根据权利要求1所述的裂解液，其特征在于，所述钠盐为醋酸钠，所述胍盐为盐酸胍，所述金属离子络合剂为EDTA，所述非离子表面活性剂为TritonX-100。


5.一种核酸提取试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括权利要求1～4之一所述的裂解液。


6.根据权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括第一洗涤缓冲液，所述第一洗涤缓冲液包括15～30mMTris-base，10～20mMEDTA，150～200mM氯化钠和50～60％无水乙醇，pH＝9.6。


7.根据权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括第二洗涤缓冲液，所述第二洗涤缓冲液包括75％无水乙醇。


8.根据权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括洗脱液，所述洗脱液包括DEPC处理过的...

【专利技术属性】
技术研发人员：黄宵，谢廉毅，李明，
申请(专利权)人：杭州比格飞序生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：浙江;33