一种TNF-α的高敏Elisa检测试剂盒及其使用方法与应用技术

本发明专利技术公开了一种TNF‑α的高敏Elisa检测试剂盒及其使用方法与应用，属于生物医疗检测技术领域。Elisa检测试剂盒包括：包被有TNF‑α捕获抗体的酶标板、TNF‑α检测抗体、TNF‑α抗体标准品、亲和素‑辣根过氧化物酶、ECL试剂、PBS缓冲液、清洗液、封闭液及样品稀释液；本试剂盒及使用方法与应用基于利用ECL具有敏感度高等特点，将其用于TNF‑α抗体的ELISA荧光检测，有效提高TNF‑α抗体在Elisa检测试剂盒中最低检测限，使之适用于临床待检样本量低或TNF‑α含量低的样本检测；同时，保证本检测试剂盒能有效的提高检测灵敏度及检测限。

【技术实现步骤摘要】
一种TNF-α的高敏Elisa检测试剂盒及其使用方法与应用
本专利技术涉及一种TNF-α的Elisa检测试剂盒及其使用方法与应用，尤其涉及一种样品中含量低且量少TNF-α的高敏Elisa的化学发光检测试剂盒及其使用方法与应用，属于生物医疗检测

技术介绍
TNF-α（肿瘤坏死因子α），是一种能够直接杀伤肿瘤细胞而对正常细胞无明显毒性的细胞因子，是迄今为止所发现的直接杀伤肿瘤作用最强的生物活性因子之一。Elisa检测原理包括向载体酶标板孔中加入捕获抗体，捕获抗体包被在该载体上，形成固相抗体，保持其免疫活性；然后向酶标板孔中加入样品，样品中待检测蛋白与固相抗体特异性结合，形成固相抗原复合物，洗涤除去杂质；再向酶标板孔中加入带有生物素的检测抗体，检测抗体与固相抗原复合物结合；最后向酶标板孔中加入带有亲和素的辣根过氧化酶。再加入底物后，底物被酶催化变为有色产物，有色产物的量与样品中待检测蛋白的量直接相关，故可根据颜色反应的深浅进行定量分析。目前，采用的TNF-αElisa检测试剂盒一般依据TMB底物显色原理，对待检样品进行检测，本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种TNF-α的高敏Elisa检测试剂盒，其特征在于，包括：/n（1）包被有TNF-α捕获抗体的酶标板；/n（2）TNF-α检测抗体；/n（3）TNF-α标准品；/n（4）亲和素-辣根过氧化物酶；/n（5）ECL试剂；/n（6）PBS缓冲液、清洗液、封闭液及样品稀释液。/n

【技术特征摘要】
1.一种TNF-α的高敏Elisa检测试剂盒，其特征在于，包括：
（1）包被有TNF-α捕获抗体的酶标板；
（2）TNF-α检测抗体；
（3）TNF-α标准品；
（4）亲和素-辣根过氧化物酶；
（5）ECL试剂；
（6）PBS缓冲液、清洗液、封闭液及样品稀释液。


2.根据权利要求1所述的TNF-α的高敏Elisa检测试剂盒，其特征在于，所述TNF-α捕获抗体浓度为0.5mg/mL；
包被TNF-α捕获抗体的捕获抗体包被液为浓度15mmol/L的Na2CO3与浓度34.9mmol/L的NaHCO3的混合溶液，pH为9.6；
TNF-α检测抗体浓度为0.2mg/mL；
TNF-α标准品浓度为0.1mg/mL；
清洗液为包括有0.5‰吐温-20的PBS缓冲液，pH为7.2～7.4；
封闭液为包括有4%蔗糖、3%BSA及2%FBS的PBS缓冲液；
样品稀释液为包括有0.2%吐温-20及1%BSA的PBS缓冲液。


3.根据权利要求2所述的TNF-α的高敏Elisa检测试剂盒，其特征在于，所述PBS缓冲液为包括浓度为137mmol/L的NaCl、浓度为2.7mmol/L的KCl、浓度为10mmol/L的Na2HPO4及浓度为2mmol/L的KH2PO4的混合溶液，pH为7.4。


4.根据权利要求1所述的TNF-α的高敏Elisa检测试剂盒，其特征在于，所述酶标板为96孔的白色酶标板或黑色酶标板。


5.根据权利要求1所述的TNF-α的高敏Elisa检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒的最低检测限为70fg/mL，灵敏度为70fg/mL，稳定性CV值为0.19～14.17%。


6.一种根据权利要求1-5中任意一项所述的TNF-α的高敏Elisa检测试剂盒使用方法，包括如下步骤：
A.前处理
制备包被有TNF-α捕获抗体的酶标板：将TNF-α捕获抗体用捕获抗体包被液稀释，得浓度为1μg/mL的TNF-α捕获抗体工作液；将所得TNF-α捕获抗体工作液向酶标板每孔中加200μL，并在4℃条件下孵育过夜，或者，在37℃条件下孵育1h；去孵育液，向酶标板每孔中加300μLPBS缓冲液，清洗1次，滤纸印干；再向酶标板每孔中加300μL封闭液，于37℃条件下封闭2h，去封闭液，滤纸印干，在37℃条件下于干燥箱中风干2h，并在4℃条...

【专利技术属性】
技术研发人员：吕姣，单旭东，文雨婷，田东梅，许文明，朱明辉，
申请(专利权)人：四川大学华西第二医院，成都中医药大学，
类型：发明
国别省市：四川;51