一种基于多重微阵列的食物不耐受特异性IgG检测试剂盒制造技术

本发明专利技术公开了一种基于多重微阵列的食物不耐受特异性IgG检测试剂盒，属于免疫检测领域。本发明专利技术的基于多重微阵列的食物不耐受特异性IgG检测试剂盒包括：包被有食物抗原蛋白的微孔板、清洗缓冲液、封闭液、酶标抗体、人IgG标准品、显色液。本发明专利技术的检测试剂盒可以同时检测几十种食物过敏原，具有精确度高、灵敏度高的优点，同时也解决了单一指标的检测费事费力、成本高的问题，大大提高了检测效率，具有很好的临床应用价值。

A food intolerance specific IgG detection kit based on multiple microarray

【技术实现步骤摘要】
一种基于多重微阵列的食物不耐受特异性IgG检测试剂盒
本专利技术属于免疫检测领域，特别涉及一种基于多重微阵列的食物不耐受特异性IgG检测试剂盒。
技术介绍
变态反应性疾病是一种常见的疾病，它是由广泛存在的变应原引发的，大约有5-10％的人受变应原的侵扰。引发过敏反应的物质称为变应原，其中食物是重要的变应原之一。人体对食物敏感可引起食物变态反应，目前认为主要有两种类型：由IgE介导的速发型过敏反应，病发迅速，病症明显；由IgG介导的迟发型变态反应，反应通常在接触食物几小时或几天后才会出现反应症状，如消化道症状(腹痛、腹泻、口臭、口腔溃疡、胃肠胀气等肠胃功能失调)、皮肤症状(湿疹、荨麻疹)、呼吸症状(哮喘、慢性咳嗽、慢性鼻炎、鼻窦炎)、神经方面(头晕、头痛、偏头痛、睡眠障碍)、精神方面(焦虑、犹豫、注意力涣散、暴躁易怒、坐立不安)及其它慢性症状。通常情况下，由食物引起的IgG介导的异常反应称之为食物不耐受，这是一种复杂的免疫反应性疾病。当肠胃分泌的消化酶不足，胃肠道动力不足时，食物无法被完全消化。一些食物被分解成多肽类的中分子，这些中分子容易被吸收进入血液循环。免疫系统将进入血液的某种或多种中分子物质当成有害物质，从而产生过度的保护性免疫反应，产生食物特异性IgG抗体，IgG抗体与食物颗粒形成免疫复合物(Ⅲ型变态反应)。这些IgG免疫复合物随着血液循环，在身体内不同部位沉积，进而引起一系列相关部位的病症。因此，通过检测血清中食物特异性IgG，对于确定不耐受食物与过敏性疾病轻重程度的诊断具有重要价值。目前，临床上食物不耐受检测最成熟的是酶联免疫吸附试验(ELISA法)，主要通过ELISA法定量检测食物特异性IgG抗体水平来反应食物不耐受状况，可针对性检测不同食物的IgG抗体浓度。但传统酶联免疫吸附法(ELISA)的局限是单个反应器中只能检测一种生物指标。对于多指标筛查，传统ELISA就需要进行多项独立检测，增加了时间成本和费用。而在食物不耐受检测领域中，筛查的食物种类多达几十种，甚至上百种。传统的ELISA很难降低食物不耐受筛查的时间和制造成本，不能满足现场快速检测和普及推广的要求。多重微阵列是上世纪九十年代的前沿技术，是一种“微型化”技术。微阵列是一种装置，将大量样本(核酸或者蛋白质等生物分子)附着或固定于适合的未反应基底表面(如聚丙烯、聚苯乙烯、环烯等塑料、硅树脂和玻璃)。如果基底表面相对平直，生物分子可以被“印刷”到表面上，使用含有生物分子作为“测定点位”的缓冲液印刷。将固定于基底表面上的已知位置的生物分子暴露于生物化学/化学试剂，用于检测、定性和定量分析。针对现有问题，目前急需开发一种基于多重微阵列的食物不耐受特异性IgG检测试剂盒。
技术实现思路
本专利技术的首要目的提供一种基于多重微阵列的食物不耐受特异性IgG检测试剂盒。为达到上述目的，本专利技术所采取的技术方案是：将微阵列和ELISA结合成为“微型化”ELISA技术，用于实施ELISA型免疫分析。固定于基底的生物分子为抗体(或抗原)，基底表面被暴露于含有抗原(或抗体)的测试溶液。然后使用缓冲溶液布满基底表面并使其暴露于第二抗体，该第二抗体选择与可检测标签(如放射性标签或荧光染料)配对，选择与酶(该酶对反应进行催化，对该反应的反应产物进行染色且因此可被检测到)配对。本专利技术第一个方面，提出了一种基于多重微阵列的食物不耐受特异性IgG检测试剂盒。根据本专利技术的实施例，所述试剂盒包括：包被有食物抗原蛋白的微孔板、清洗缓冲液、封闭液、酶标抗体、人IgG标准品、显色液；所述食物抗原蛋白包括肉禽类、海鲜水产类、坚果类、蛋奶类、水果类、蔬菜类、豆类、谷物类、调味品及饮料类的一种或多种。根据本专利技术的实施例，试剂盒能够同时检测多种食物抗原蛋白，大大提高了检测效率。根据本专利技术的实施例，所述包被有食物抗原蛋白的微孔板材质为聚苯乙烯，包含可拆卸式的96个微孔，所述每个微孔含有一个10×10的矩阵微阵列，包含食物抗原蛋白，6个校准点，2个阳性控制，2个阴性控制。根据本专利技术的实施例，所述肉禽类选自：羊肉、牛肉、猪肉、鸡肉、鸭肉的至少一种；所述海鲜水产类选自：鳕鱼、墨鱼、龙虾、蟹肉、生蚝、鲤鱼、虾、扇贝的至少一种；所述坚果类选自：板栗、芝麻、花生、榛子、杏仁、腰果、核桃的至少一种；所述蛋奶类选自：蛋白、蛋黄、牛奶、羊奶、酸奶、酪蛋白的至少一种；所述水果类选自：香蕉、芒果、桃子、奇异果、苹果、梨、樱桃、李子、葡萄、草莓、木瓜、柚子、橙子、柠檬、菠萝、哈密瓜、西瓜、甜瓜、椰子、橄榄的至少一种；所述蔬菜类选自：西兰花、茄子、苦瓜、黄瓜、甜椒、芦笋、菠菜、西红柿、西葫芦、胡萝卜、土豆、大蒜、红薯、萝卜、芹菜、洋葱、芋头、南瓜、蘑菇、卷心菜、竹笋、茴香、薄荷、香菜、绿菜椒的至少一种；所述豆类选自：扁豆、豌豆、腰豆、四季豆、黄豆、绿豆的至少一种；所述谷物类选自：荞麦、麦麸、玉米、大米、燕麦、小麦的至少一种；所述调味品及饮料类选自：蜂蜜、咖啡、可可、绿茶、红茶、酵母、胡椒的至少一种。根据本专利技术的实施例，所述6个校准点的IgG浓度依次为：校准点1为62.5μg/mL、校准点2为15.6μg/mL、校准点3为31.3μg/mL、校准点4为62.5μg/mL、校准点5为125μg/mL、校准点6为125μg/mL；所述阳性控制点的IgG浓度为7.8μg/mL。根据本专利技术的实施例，提出了所述包被有食物抗原蛋白的微孔板制备方法为：将食物粉碎、脱脂、提取蛋白，并SDS-PAGE电泳，洗脱干燥得食物抗原蛋白，溶解，冲匀，点样到微孔板的聚苯乙烯表面，点样的直径为150～200微米。根据本专利技术的实施例，所述封闭液为1％牛血清白蛋白-PBS；所述显色液为1-StepTMB；所述清洗缓冲液为含0.05％吐温20的TBST溶液；酶标抗体为HRP抗人IgG、浓度为0.4～0.8mg/L。本专利技术第二个方面，提出了一种如前面所述食物不耐受特异性IgG检测试剂盒的检测方法，包括以下步骤：1)量取血清稀释于封闭液；2)将稀释的血清加入至前面所述试剂盒中包被有食物抗原蛋白微孔板的微孔内孵育，静置；3)弃去反应液体；4)洗涤；5)加入封闭液稀释的酶标抗体，孵育，静置；6)弃去孔内反应液，洗涤；7)加入TMB显色液后，避光孵育，静置；8)分析仪读数判定。根据本专利技术的实施例，步骤(2)22～25℃孵育1小时；步骤(5)孵育30～60分钟；步骤(7)孵育15～20分钟。根据本专利技术的实施例，所述分析仪读数判定标准为：浓度小于10U/mL为阴性(0级)，浓度10-30U/mL为阳性(1级)，浓度30-60U/mL为阳性(2级)，浓度大于60U/ml为阳性(3级)。本专利技术的有益效果是：1、本专利技术的食物抗原蛋白是直接打印在聚苯乙烯材质的表面，也可以用芯片取代，芯片可以选用玻璃载体，硅晶片载体和膜载体等材料。...

【技术保护点】
1.一种基于多重微阵列的食物不耐受特异性IgG检测试剂盒，其特征在于，包括：包被有食物抗原蛋白的微孔板、清洗缓冲液、封闭液、酶标抗体、人IgG标准品、显色液；所述食物抗原蛋白包括肉禽类、海鲜水产类、坚果类、蛋奶类、水果类、蔬菜类、豆类、谷物类、调味品及饮料类的一种或多种。/n

【技术特征摘要】
1.一种基于多重微阵列的食物不耐受特异性IgG检测试剂盒，其特征在于，包括：包被有食物抗原蛋白的微孔板、清洗缓冲液、封闭液、酶标抗体、人IgG标准品、显色液；所述食物抗原蛋白包括肉禽类、海鲜水产类、坚果类、蛋奶类、水果类、蔬菜类、豆类、谷物类、调味品及饮料类的一种或多种。


2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述包被有食物抗原蛋白的微孔板材质为聚苯乙烯，包含可拆卸式的96个微孔；所述微孔各含有一个10×10的矩阵微阵列；所述矩阵微阵列包括食物抗原蛋白，6个校准点，2个阳性控制，2个阴性控制。


3.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，
所述肉禽类选自：羊肉、牛肉、猪肉、鸡肉、鸭肉的至少一种；
所述海鲜水产类选自：鳕鱼、墨鱼、龙虾、蟹肉、生蚝、鲤鱼、虾、扇贝的至少一种；
所述坚果类选自：板栗、芝麻、花生、榛子、杏仁、腰果、核桃的至少一种；
所述蛋奶类选自：蛋白、蛋黄、牛奶、羊奶、酸奶、酪蛋白的至少一种；
所述水果类选自：香蕉、芒果、桃子、奇异果、苹果、梨、樱桃、李子、葡萄、草莓、木瓜、柚子、橙子、柠檬、菠萝、哈密瓜、西瓜、甜瓜、椰子、橄榄的至少一种；
所述蔬菜类选自：西兰花、茄子、苦瓜、黄瓜、甜椒、芦笋、菠菜、西红柿、西葫芦、胡萝卜、土豆、大蒜、红薯、萝卜、芹菜、洋葱、芋头、南瓜、蘑菇、卷心菜、竹笋、茴香、薄荷、香菜、绿菜椒的至少一种；
所述豆类选自：扁豆、豌豆、腰豆、四季豆、黄豆、绿豆的至少一种；
所述谷物类选自：荞麦、麦麸、玉米、大米、燕麦、小麦的至少一种；
所述调味品及饮料类选自：蜂蜜、咖啡、可可、绿茶、红茶、酵母、胡椒的至少一种。


4.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述6个校准点的IgG浓度依...

【专利技术属性】
技术研发人员：张凯东，刘旭昭，卢章准，何翠红，李文哲，任立芬，熊晓明，
申请(专利权)人：广州博厚健康科技有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44