检测血清中四种孕激素的方法技术

本发明专利技术提供了一种血清中四种孕激素的检测方法，所述四种孕激素为：17α‑羟基孕烯醇酮、17α‑羟基孕酮、孕酮和孕烯醇酮；包括以下步骤：向血清样品中加入含内标物的甲醇溶液，进行蛋白沉淀，离心、取上清，加入衍生化试剂进行衍生化反应，冷却至室温后加入叔丁基甲醚，离心、取上清，得待测样品；所述内标物为17α‑羟基孕烯醇酮内标物、17α‑羟基孕酮内标物、孕酮内标物和孕烯醇酮内标物；富集、分离和检测：对所述待测样品采用二维液相色谱串联四级杆质谱联用仪进行富集、分离和检测。该方法可以有效去除基质干扰，具有特异性、抗基质干扰能力强、定量限低，灵敏度高的特点。

Detection of four progesterones in serum

【技术实现步骤摘要】
检测血清中四种孕激素的方法
本专利技术属于分析检测
，特别涉及一种检测血清中四种孕激素的方法。
技术介绍
胆固醇在C20和C22副链羟化酶作用下生成孕烯醇酮，孕烯醇酮首先通过3β-羟化类固醇脱氢酶和Δ异构酶，将C5和C4间双键去除，生成孕酮，由孕酮继续通过Δ途径，继续生成17α-羟基孕酮；孕烯醇酮也可通过17α-羟化酶(CYP17A1)作用下转化为17α-羟基孕烯醇酮、孕烯醇酮、孕酮、17α-羟基孕酮有着重要的生理作用。孕酮，是由卵巢黄体分泌的一种天然孕激素，在体内对雌激素激发过的子宫内膜有显著形态学影响，为维持妊娠所必需。孕酮分子量为314.469g/mol，结构式如式(Ⅰ)：17α-羟基孕酮是一种与孕酮相关的内分泌孕激素内固醇激素，它也是其他内分泌类固醇激素生物合成的重要中间产物，包括雄性激素，雌性激素，糖皮质激素和盐皮质激素和神经类固醇激素等。17α-羟基孕酮分子量为330.468g/mol，结构式如式(Ⅱ)：检测17α-羟基孕烯醇酮、孕烯醇酮、孕酮和17α-羟基孕酮不仅可以评估其各自的水平，还可了解四种激素之间的代谢情况。目前国内17α-羟基孕烯醇酮、孕烯醇酮的检测方法本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种血清中四种孕激素的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：所述四种孕激素为：17α‑羟基孕烯醇酮、17α‑羟基孕酮、孕酮和孕烯醇酮；前处理：向血清样品中加入含内标物的甲醇溶液，进行蛋白沉淀，离心、取上清，加入衍生化试剂进行衍生化反应，冷却至室温后加入叔丁基甲醚，离心、取上清，得待测样品；所述内标物为17α‑羟基孕烯醇酮内标物、17α‑羟基孕酮内标物、孕酮内标物和孕烯醇酮内标物；富集、分离和检测：对所述待测样品采用二维液相色谱串联四级杆质谱联用仪进行富集、分离和检测。

【技术特征摘要】
1.一种血清中四种孕激素的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：所述四种孕激素为：17α-羟基孕烯醇酮、17α-羟基孕酮、孕酮和孕烯醇酮；前处理：向血清样品中加入含内标物的甲醇溶液，进行蛋白沉淀，离心、取上清，加入衍生化试剂进行衍生化反应，冷却至室温后加入叔丁基甲醚，离心、取上清，得待测样品；所述内标物为17α-羟基孕烯醇酮内标物、17α-羟基孕酮内标物、孕酮内标物和孕烯醇酮内标物；富集、分离和检测：对所述待测样品采用二维液相色谱串联四级杆质谱联用仪进行富集、分离和检测。2.根据权利要求1所述的血清中四种孕激素的检测方法，其特征在于，所述富集、分离和检测的步骤包括：采用第一流动相洗脱第一维色谱柱，对所述待测样品进行富集，得富集后的样品；采用第二流动相将所述富集后的样品从所述第一维色谱柱洗脱至第二维色谱柱，分离、检测；所述第一流动相包括A相和B相，所述A相为水，所述B相为甲醇；所述第二流动相包括C相和D相，所述C相为含体积百分比为(0.1±0.01)％甲酸的去离子水溶液，所述D相为含体积百分比为(0.1±0.01)％甲酸的甲醇溶液。3.根据权利要求2所述的血清中四种孕激素的检测方法，其特征在于，所述第一维色谱柱为C6-Phenyl柱，所述第二维色谱柱为C18柱；和/或所述第一流动相的流速为0.5～1.5ml/min；所述第二流动相的流速为0.2～1.0ml/min。4.根据权利要求1-3任一项所述的血清中四种孕激素的检测方法，其特征在于，二维液相色谱采用梯度洗脱的模式：0min～0.2min时，采用所述第一流动相洗脱所述第一维色谱柱，对所述待测样品进行富集，所述第一流动相中A相与B相的体积比为(60±3):(40±3)；0.2min时，将所述第一维色谱柱与所述第二维色谱柱连通；0.2min～0.5min时，采用所述第二流动相将富集后的样品从所述第一维色谱柱洗脱至所述第二维色谱柱；所述第二流动相中C相与D相的体积比为(60±3):(40±3)；0.5min～2min时，所述第二流动相中C相与D相的体积比为(60±3):(40±3)；2min～3.6min时，所述第二流动相中C相与D相的体积比为(50±3):(50±3)；3.6min～4.4min时，所述第二流动相中C相与D相的体积比为(30±3):70±3)；4.4min～7.1min时，所述第二流动相中C相与D相的体积比为(5±3):(95±3)；7.1min后，所述第二流动相中C相与D相的体积比为(60±3):(40±3)；洗脱至第8.0-9.0min。5.根据权利要求1-3任一项所述的血清中四种孕激素的检测方法，其特征在于，所述17α-羟基孕烯醇酮内标物为17α-羟基孕烯醇酮的C13标记物或氘代标记物；所述17α-羟基孕酮内标物为17α-羟基孕酮的C13标记物或氘代标记物；所述孕酮内标物为孕酮的C13标记物或氘代标记物；所述孕烯醇酮为孕烯醇酮的C13标记物或氘代标记物。6.根据权利要求1-3任一项所述的血清中四种孕激素的检测方法，其特征在于，所述前处理中：所述血清样品与所述含内标物的甲醇溶液的体积比为1：1～4；及/或所述血清样品与所述叔丁基甲醚的体积比为1：2～4；及/或所述叔丁基甲醚与所述血清样品经蛋白沉淀后的上清液的体积比为1：1～2；及/或所述衍生化试剂为盐酸羟胺；及/或所述衍生化反应的条件为：温度60-90℃，时间30-60min。7.根据权利要求6所述的血清中四种孕激素的检测方法，其特征在于，所述盐酸羟胺溶液的浓度为1.0-2.0mol/L。8.根据...

【专利技术属性】
技术研发人员：何翠红，卢章准，麦嘉颖，叶顺兰，汤习锋，
申请(专利权)人：广州博厚健康科技有限公司，
类型：发明
国别省市：广东,44