IgM-FC片段、IgM-FC抗体及制备方法和应用技术

本发明专利技术提供了一种IgM‑FC片段、IgM‑FC抗体及制备方法和应用，涉及生物化学技术领域，本发明专利技术提供了IgM‑FC片段作为免疫原在制备能够与IgM特异性结合的抗体中的应用，以IgM‑FC片段为免疫原免疫动物产生的抗体能够与IgM特异性结合。

Igm-fc fragment, igm-fc antibody, preparation method and Application

【技术实现步骤摘要】
IgM-FC片段、IgM-FC抗体及制备方法和应用
本专利技术涉及生物化学
，尤其是涉及一种IgM-FC片段、IgM-FC抗体及制备方法和应用。
技术介绍
免疫球蛋白M(IgM)是人的免疫球蛋白之一，根据结构不同将免疫球蛋白分为五种，分别为IgA、IgG、IgD、IgE和IgM。IgM占血清免疫球蛋白总量的5％～10％，血清浓度约1mg/ml，是免疫球蛋白中分子量最大的Ig，一般不能通过血管壁，主要存在于血液中。它是免疫应答中首先分泌的抗体，是机体抗感染的先头部队，一经感染快速产生，经过一段时间，IgM抗体量逐渐减少而消失。母体中的IgM不能通过胎盘，如果胎儿或新生儿的血液中发现有IgM，说明已发生过宫内感染。血清中检出IgM，提示近期发生感染，可用于感染的早期诊断。目前国内对于感染性疾病的早期诊断一般使用抗人IgM的单抗或者是多抗，当然单抗比多抗更具特异性，减少了假阳性的发生。μ链作为IgM特有的重链，抗μ链的抗体更具有特异性，μ链分为恒定区和可变区，恒定区序列相对保守并具有抗原结合位点，以恒定区作为抗原免疫动物产生的抗体可以与大多数的IgM特异性结合，因此选择恒定区的肽段序列作为全分子IgM的替代物，可得到特异性与IgM结合的抗IgMμ链的抗体。尽管抗IgMμ链的单克隆抗体组为酶标二抗已广泛的用于感染性疾病的早期诊断及免疫学的研究等方面，但制备抗IgMμ链的单克隆抗体的过程繁琐、成本较高。有鉴于此，特提出本专利技术。
技术实现思路
本专利技术的第一个目的在于提供IgM-FC片段作为免疫原在制备能够与IgM特异性结合的抗体中的应用，以至少缓解现有技术中存在的技术问题之一。本专利技术的第二个目的在于提供一种IgM-FC片段的制备方法，该方法工艺简单，所用的纯化工艺及酶切工艺均便于操作，普适性广，且无需依赖昂贵的实验仪器，成本较低，适合大规模的推广应用。本专利技术的第三个目的在于提供应用上述制备方法制备得到的IgM-FC片段，该片段为IgM特异性片段，与全长IgM比跟其他免疫球蛋白类抗体只有弱交叉反应。本专利技术的第四个目的在于提供一种IgM-FC抗体的制备方法，该方法工艺简单，操作方便，适合大规模推广应用。本专利技术的第五个目的在于提供一种IgM-FC抗体，该抗体可以与IgM特异性结合。本专利技术的第六个目的在于提供上述的IgM-FC抗体在胶乳增强平台作为阻断剂中的应用。本专利技术提供了IgM-FC片段作为免疫原在制备能够与IgM特异性结合的抗体中的应用；优选的IgM-FC片段是五聚体的蛋白。本专利技术还提供了一种IgM-FC片段的制备方法，所述制备方法包括：将预处理后的阴性血清依次经粗分离处理及蛋白除杂处理后，得到IgM，酶切所述IgM，得到IgM-FC片段。进一步地，所述预处理包括去除阴性血清中的脂蛋白。进一步地，所述粗分离处理包括沉淀法处理；优选地，所述沉淀法包括硫酸铵沉淀法、聚乙二醇沉淀法、丙酮沉淀法、苦味酸沉淀法、磷钨酸盐沉淀法或三氯乙酸沉淀法。进一步地，蛋白除杂处理包括层析处理；优选地，所述层析处理包括亲和层析处理和离子交换层析处理；优选地，所述亲和层析处理包括使用ProteinG去除IgG；优选地，所述离子交换层析处理包括使用羟基磷灰石去除杂蛋白；优选地，先使用ProteinG去除IgG，然后再使用羟基磷灰石去除杂蛋白。进一步地，利用胰蛋白酶酶切所述IgM，得到IgM-FC片段；优选的，胰蛋白酶酶切是在55℃～60℃条件下酶切1小时。进一步地，酶切所述IgM后，还包括对得到的IgM-FC片段进行纯化的步骤；优选地，通过层析法对IgM-FC片段进行纯化；优选地，所述层析法包括离子交换层析法和凝胶过滤层析法；优选地，所述离子交换层析法包括使用DEAE阴离子交换介质进行层析；优选地，所述凝胶过滤层析法包括使用superdex200凝胶介质进行层析；优选地，先使用DEAE阴离子交换介质对IgM-FC片段进行一次纯化，然后再使用superdex200凝胶介质对IgM-FC片段进行二次纯化。本专利技术还提供了上述的制备方法制备得到的IgM-FC片段。本专利技术还提供了一种IgM-FC抗体的制备方法，使用上述的IgM-FC片段免疫实验动物，得到所述IgM-FC抗体。本专利技术还提供了上述的制备方法制备得到的IgM-FC抗体。另外，本专利技术还提供了上述的IgM-FC抗体在生化检测试剂盒作为阻断剂中的应用和/或在免疫诊断试剂盒中的应用。本专利技术提供了IgM-FC片段作为免疫原在制备能够与IgM特异性结合的抗体中的应用，IgM-FC片段属于IgMμ链的一部分，是IgM特异性片段，以IgM-FC片段为免疫原免疫动物产生的抗体能够与IgM特异性结合，避免了使用全分子IgM作为免疫原和其他Ig类抗体有严重交叉反应；IgM的μ链包含Fab成份，有可能结合一些难以去除的杂蛋白，而导致干扰IgMμ链的特异性的问题。并且，IgM-FC片段的制备工艺相对简单，且成本较低，适合大规模的推广应用。本专利技术提供的IgM-FC片段的制备方法，包括将预处理后的阴性血清依次经粗分离处理及蛋白除杂处理后，得到IgM，酶切所述IgM，得到IgM-FC片段。该方法通过对纯化技术进行合理的选择和组合、并确定各纯化技术的先后顺序来对血清原料进行纯化处理，从而得到纯度大于95％的IgM，然后通过对IgM酶切制备IgM-FC片段，得到五聚体IgM-Fc蛋白。并且，该方法工艺简单，所用的纯化工艺及酶切工艺均便于操作，普适性广，且无需依赖昂贵的实验仪器，成本较低，适合大规模的推广应用。本专利技术的提供的应用上述制备方法制备得到的IgM-FC片段，为IgM特异性片段，与全长IgM相比，跟其他免疫球蛋白类抗体只有弱交叉反应，抗体特异性强，免疫效果佳。具体实施方式下面将结合实施例对本专利技术的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。除非本文另有定义，连同本专利技术使用的科学和技术术语应具有本领域普通技术人员通常理解的含义。术语的含义和范围应当清晰，然而，在任何潜在不明确性的情况下，本文提供的定义优先于任何字典或外来定义。在本申请中，除非另有说明，术语“包括”及其他形式的使用是非限制性的。一般地，连同本文描述的细胞和组织培养、分子生物学、免疫学、微生物学、遗传学以及蛋白和核酸化学和杂交使用的命名法和其技术是本领域众所周知和通常使用的那些。除非另有说明，本专利技术的方法和技术一般根据本领域众所周知，且如各种一般和更具体的参考文献中所述的常规方法来进行，所述参考文献在本说明书自始至终引用和讨论。酶促反应和纯化技术根据制造商的说明书、如本领域通常实现的或如本文所述来进行。连同本文描述本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.IgM-FC片段作为免疫原在制备能够与IgM特异性结合的抗体中的应用；/n优选的IgM-FC片段是五聚体的蛋白。/n

【技术特征摘要】
1.IgM-FC片段作为免疫原在制备能够与IgM特异性结合的抗体中的应用；
优选的IgM-FC片段是五聚体的蛋白。


2.一种IgM-FC片段的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括：
将预处理后的阴性血清依次经粗分离处理及蛋白除杂处理后，得到IgM，酶切所述IgM，得到IgM-FC片段。


3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述预处理包括去除阴性血清中的脂蛋白；
优选地，所述粗分离处理包括沉淀法处理；
优选地，所述沉淀法包括硫酸铵沉淀法、聚乙二醇沉淀法、丙酮沉淀法、苦味酸沉淀法、磷钨酸盐沉淀法或三氯乙酸沉淀法。


4.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，蛋白除杂处理包括层析处理；
优选地，所述层析处理包括亲和层析处理和离子交换层析处理；
优选地，所述亲和层析处理包括使用ProteinG去除IgG；
优选地，所述离子交换层析处理包括使用羟基磷灰石去除杂蛋白；
优选地，先使用ProteinG去除IgG，然后再使用羟基磷灰石去除杂蛋白。


5.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，利用胰蛋白酶酶切所述IgM，得到IgM-FC片段；
优选的，胰蛋白酶酶...

【专利技术属性】
技术研发人员：韩玉婷，柯拓，唐佳，
申请(专利权)人：广东菲鹏生物有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44