一种同步检测22个基因位点的五色荧光STR分型方法及其专用试剂盒技术

本发明专利技术公开了一种同步检测22个基因位点的五色荧光STR分型方法及其专用试剂盒。该方法包括如下步骤：以待测个体的基因组DNA为模板，采用试剂盒进行PCR扩增，获得PCR扩增产物；取PCR扩增产物，变性，然后毛细管电泳检测，得到待测个体的基因组DNA的22个基因位点的基因型，进而获得待测个体的STR分型结果。试剂盒包括引物对组合，组成引物对组合的44条引物的核苷酸序列依次如序列表中序列1至44所示，每个引物对中的一条引物的用荧光标记。本发明专利技术提供的试剂盒采用五色荧光标记复合扩增技术，可一次性扩增分析22个基因位点，包含更多的遗传信息量。该试剂盒与市面上主流CODIS位点联用，可以提高全同胞关系中的鉴定能力，提高试剂盒的兼容性和鉴定的准确性。本发明专利技术具有重大的应用价值。

A five color fluorescence STR typing method for simultaneous detection of 22 loci and its special kit

【技术实现步骤摘要】
一种同步检测22个基因位点的五色荧光STR分型方法及其专用试剂盒
本专利技术属于生物
，具体涉及一种同步检测22个基因位点的五色荧光STR分型方法及其专用试剂盒。
技术介绍
短串联重复序列(shorttandemrepeat，STR)是一类广泛存在于真核生物基因组中的分子遗传标记，属于第二代遗传标记。在人类基因组中，大约每15-20kb就有一个STR位点，它们占人类基因组总量的10％。这些STR通常由2-6个碱基组成串联重复单元，由于重复单元及重复次数的不同，它们在不同种族、地域的人群中显示出较大的差异性，表现为遗传多态性。与其它遗传标记相较，STR遗传标记不仅信息量大，在不同个体间差异大、多态性高、片段较小，易于扩增，尤其适用于一些微量或降解检材。因此，基于STR的扩增检测技术被广泛应用于法医个体识别、亲权鉴定、群体遗传学分析及人类DNA数据库的构建等。基于STR分型技术的上述优点，自1980年代中期以来,STR分型技术已经成为司法鉴定中最常用、发展最成熟的技术，为各类民事及刑事案件提供了有利的证据支持。STR数据也成为各国法庭科学数据库的主要构成，为犯罪分子的最终伏法提供了数据支撑。目前司法鉴定所采用的试剂盒主要以美国FBI选择的13个CODIS位点(包括CSF1PO、D3S1358、D5S818、D7S820、D8S1179、D13S317、D16S539、D18S51、D21S11、FGA、TH01、TPOX和vWA)为基础的STR位点检测试剂盒，其位点数较少且不同试剂盒之间相互兼容、位点同质化非常严重，即便不同试剂盒相互联用，提供的位点信息也有限。然而在实际情况中往往会遇到双亲去世背景下的兄弟姐妹生物关系鉴定的案例，或者在案发现场获得高度降解等疑难检材的刑事案件，另外基因组上还存在大量的SNP或其它突变干扰STR分型结果，因此位点信息太少很可能会导致误判的发生。2014年，中华人民共和国司法部司法鉴定管理局发布了《生物学全同胞关系鉴定实施规范》，提供了必检的19个位点(包括vWA、D21S11、D18S51、D5S818、D7S820、D13S317、D16S539、FGA、D8S1179、D3S1358、CSF1PO、TH01、TPOX、PentaE、PentaD、D2S1338、D19S433、D12S391和D6S1043)和可供增加的常染色体位点(如D1S1656、D2S441、D3S1744、D3S3045、D4S2366、D5S2500、D6S477、D7S1517、D7S3048、D8S1132、D10S1248、D10S1435、D10S2325、D11S2368、D13S325、D14S608、D15S659、D17S1290、D18S535、D19S253、D21S2055、D22-GATA198B05)。因此，为了在个体识别或者兄弟姐妹生物关系鉴定中提高个体识别能力，开发出一种用于补充与市面上主流试剂盒所含位点外的常染色体STR试剂盒具有重要的应用价值。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种用于补充与市面上主流试剂盒所含位点外的STR试剂盒，从而提高个体识别能力。本专利技术首先提供了引物对组合，可包括用于扩增性别鉴定位点AMEL的引物对1、用于扩增STR基因位点D1S1656的引物对2、用于扩增STR基因位点D20S482的引物对3、用于扩增STR基因位点D3S1744的引物对4、用于扩增STR基因位点D16S539的引物对5、用于扩增STR基因位点D17S1290的引物对6、用于扩增STR基因位点D10S1435的引物对7、用于扩增STR基因位点D12ATA63的引物对8、用于扩增STR基因位点D11S2368的引物对9、用于扩增STR基因位点D15S659的引物对10、用于扩增STR基因位点D9S925的引物对11、用于扩增STR基因位点D18S535的引物对12、用于扩增STR基因位点D6S477的引物对13、用于扩增STR基因位点D22-GATA198B05的引物对14、用于扩增STR基因位点D2S1776的引物对15、用于扩增STR基因位点D9S1122的引物对16、用于扩增STR基因位点D7S3048的引物对17、用于扩增STR基因位点D4S2366的引物对18、用于扩增STR基因位点D3S3045的引物对19、用于扩增STR基因位点D10S1248的引物对20、用于扩增STR基因位点D8S1132的引物对21和用于扩增STR基因位点D21S2055的引物对22；每个引物对可由位于相应基因位点两侧的一对引物组成。上述引物对组合中，每对引物对中的一条引物可用荧光标记。所述引物对1可由序列表中序列1所示的引物和序列表中序列2所示的引物组成。所述引物对2可由序列表中序列3所示的引物和序列表中序列4所示的引物组成。所述引物对3可由序列表中序列5所示的引物和序列表中序列6所示的引物组成。所述引物对4可由序列表中序列7所示的引物和序列表中序列8所示的引物组成。所述引物对5可由序列表中序列9所示的引物和序列表中序列10所示的引物组成。所述引物对6可由序列表中序列11所示的引物和序列表中序列12所示的引物组成。所述引物对7可由序列表中序列13所示的引物和序列表中序列14所示的引物组成。所述引物对8可由序列表中序列15所示的引物和序列表中序列16所示的引物组成。所述引物对9可由序列表中序列17所示的引物和序列表中序列18所示的引物组成。所述引物对10可由序列表中序列19所示的引物和序列表中序列20所示的引物组成。所述引物对11可由序列表中序列21所示的引物和序列表中序列22所示的引物组成。所述引物对12可由序列表中序列23所示的引物和序列表中序列24所示的引物组成。所述引物对13可由序列表中序列25所示的引物和序列表中序列26所示的引物组成。所述引物对14可由序列表中序列27所示的引物和序列表中序列28所示的引物组成。所述引物对15可由序列表中序列29所示的引物和序列表中序列30所示的引物组成。所述引物对16可由序列表中序列31所示的引物和序列表中序列32所示的引物组成。所述引物对17可由序列表中序列33所示的引物和序列表中序列34所示的引物组成。所述引物对18可由序列表中序列35所示的引物和序列表中序列36所示的引物组成。所述引物对19可由序列表中序列37所示的引物和序列表中序列38所示的引物组成。所述引物对20可由序列表中序列39所示的引物和序列表中序列40所示的引物组成。所述引物对21可由序列表中序列41所示的引物和序列表中序列42所示的引物组成。所述引物对22可由序列表中序列43所示的引物和序列表中序列44所示的引物组成。上述任一所述引物对组合中，所述引物对1、所述引物对2、所述引物对3、所述引物对4、所述引物对5和所述引物对6中每对引物对中的一条引物的5’末端可用6’-FAM标记。所本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.引物对组合，包括用于扩增性别鉴定位点AMEL的引物对1、用于扩增STR基因位点D1S1656的引物对2、用于扩增STR基因位点D20S482的引物对3、用于扩增STR基因位点D3S1744的引物对4、用于扩增STR基因位点D16S539的引物对5、用于扩增STR基因位点D17S1290的引物对6、用于扩增STR基因位点D10S1435的引物对7、用于扩增STR基因位点D12ATA63的引物对8、用于扩增STR基因位点D11S2368的引物对9、用于扩增STR基因位点D15S659的引物对10、用于扩增STR基因位点D9S925的引物对11、用于扩增STR基因位点D18S535的引物对12、用于扩增STR基因位点D6S477的引物对13、用于扩增STR基因位点D22-GATA198B05的引物对14、用于扩增STR基因位点D2S1776的引物对15、用于扩增STR基因位点D9S1122的引物对16、用于扩增STR基因位点D7S3048的引物对17、用于扩增STR基因位点D4S2366的引物对18、用于扩增STR基因位点D3S3045的引物对19、用于扩增STR基因位点D10S1248的引物对20、用于扩增STR基因位点D8S1132的引物对21和用于扩增STR基因位点D21S2055的引物对22；/n每个引物对由位于相应基因位点两侧的一对引物组成。/n...

【技术特征摘要】
1.引物对组合，包括用于扩增性别鉴定位点AMEL的引物对1、用于扩增STR基因位点D1S1656的引物对2、用于扩增STR基因位点D20S482的引物对3、用于扩增STR基因位点D3S1744的引物对4、用于扩增STR基因位点D16S539的引物对5、用于扩增STR基因位点D17S1290的引物对6、用于扩增STR基因位点D10S1435的引物对7、用于扩增STR基因位点D12ATA63的引物对8、用于扩增STR基因位点D11S2368的引物对9、用于扩增STR基因位点D15S659的引物对10、用于扩增STR基因位点D9S925的引物对11、用于扩增STR基因位点D18S535的引物对12、用于扩增STR基因位点D6S477的引物对13、用于扩增STR基因位点D22-GATA198B05的引物对14、用于扩增STR基因位点D2S1776的引物对15、用于扩增STR基因位点D9S1122的引物对16、用于扩增STR基因位点D7S3048的引物对17、用于扩增STR基因位点D4S2366的引物对18、用于扩增STR基因位点D3S3045的引物对19、用于扩增STR基因位点D10S1248的引物对20、用于扩增STR基因位点D8S1132的引物对21和用于扩增STR基因位点D21S2055的引物对22；
每个引物对由位于相应基因位点两侧的一对引物组成。


2.如权利要求1所述的引物对组合，其特征在于：每对引物对中的一条引物用荧光标记。


3.如权利要求1或2所述的引物对组合，其特征在于：
所述引物对1由序列表中序列1所示的引物和序列表中序列2所示的引物组成；
所述引物对2由序列表中序列3所示的引物和序列表中序列4所示的引物组成；
所述引物对3由序列表中序列5所示的引物和序列表中序列6所示的引物组成；
所述引物对4由序列表中序列7所示的引物和序列表中序列8所示的引物组成；
所述引物对5由序列表中序列9所示的引物和序列表中序列10所示的引物组成；
所述引物对6由序列表中序列11所示的引物和序列表中序列12所示的引物组成；
所述引物对7由序列表中序列13所示的引物和序列表中序列14所示的引物组成；
所述引物对8由序列表中序列15所示的引物和序列表中序列16所示的引物组成；
所述引物对9由序列表中序列17所示的引物和序列表中序列18所示的引物组成；
所述引物对10由序列表中序列19所示的引物和序列表中序列20所示的引物组成；
所述引物对11由序列表中序列21所示的引物和序列表中序列22所示的引物组成；
所述引物对12由序列表中序列23所示的引物和序列表中序列24所示的引物组成；
所述引物对13由序列表中序列25所示的引物和序列表中序列26所示的引物组成；
所述引物对14由序列表中序列27所示的引物和序列表中序列28所示的引物组成；
所述引物对15由序列表中序列29所示的引物和序列表中序列30所示的引物组成；
所述引物对16由序列表中序列31所示的引物和序列表中序列32所示的引物组成；
所述引物对17由序列表中序列33所示的引物和序列表中序列34所示的引物组成；
所述引物对18由序列表中序列35所示的引物和序列表中序列36所示的引物组成；
所述引物对19由序列表中序列37所示的引物和序列表中序列38所示的引物组成；
所述引物对20由序列表中序列39所示的引物和序列表中序列40所示的引物组成；
所述引物对21由序列表中序列41所示的引物和序列表中序列42所示的引物组成；
所述引物对22由序列表中序列43所示的引物和序列表中序列44所示的引物组成。


4.如权利要求1至3任一所述的引物对组合，其特征在于：
所述引物对1、所述引物对2、所述引物对3、所述引物对4、所述引物对5和所述引物对6中每对引物对中的一条引物的5’末端用6’-FAM标记；
所述引物对7、所述引物对8、所述引物对9、所述引物对10、所述引物对11和所述引物对12中每对引物对中的一条引物的5’末端用HEX标记；
所述引物对13、所述引物对14、所述引物对15、所述引物对16和所述引物对17中每对引物对中的一条引物的5’末端用TAMRA标记；
所述引物对18、所述引物对19、所述引物对20、所述引物对21和所述引物对22中每对引物对中的一条引物...

【专利技术属性】
技术研发人员：李生斌，杨日华，伏东科，沈瑞霖，
申请(专利权)人：深圳华大法医科技有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44