人类Y染色体35个STR基因座的荧光标记复合扩增试剂盒及其应用制造技术

本发明专利技术公开了人类Y染色体35个STR基因座的荧光标记复合扩增试剂盒及其应用，所述试剂盒包括扩增35个Y‑STR基因座的特异性引物，其中包括28个低突变Y‑STR基因座，7个快速突变Y‑STR基因座。本发明专利技术所述试剂盒包括28个低突变率和7个快速突变、多态性较高的Y‑STR基因座，兼顾了男性家系排查和同一父系不同男性个体之间的区分；本发明专利技术所述试剂盒中引物具有特异性强，灵敏度高，分型结果准确的优点，完全能够满足实际案件检验、DNA数据库建设以及亲子鉴定的需要；本发明专利技术所述试剂盒具有很强的检材适应性。

Fluorescence labeled multiplex amplification kit of 35 STR loci on human Y chromosome and its application

【技术实现步骤摘要】
人类Y染色体35个STR基因座的荧光标记复合扩增试剂盒及其应用
本专利技术属于法医遗传学领域，涉及一种荧光标记复合扩增检验系统，具体为人类Y染色体35个STR基因座的荧光标记复合扩增试剂盒及其应用。
技术介绍
上世纪90年代，荧光标记的短串联重复序列基因座(shorttandemrepeat，STR)被首次提出，并作为遗传标记进行法医物证学相关方面的研究及鉴定。STR标记与其他遗传标记物相比，STR基因座片段小、容易扩增，更适用于微量和降解检材，多个STR基因座可以同时进行复合扩增，混合检材、DNA分子降解的检材和微量生物检材等疑难生物检材能够成功进行DNA检验及分型，因而具有快速、高效、准确、灵敏、信息量大等优点。近年来，STR分型技术被广泛的应用于法医物证中的个体识别和亲子鉴定，尤其是在DNA数据库的建设方面，与以往RFLP等技术相比，STR复合扩增技术具有极大的优越性。Y染色体STR遗传标记是指存在于人类Y染色体非重组区域的短串联重复序列。Y染色体STR遗传标记与常染色体STR遗传标记相比，具有男性特有、父系遗传及单倍型遗传等三大特征，将其独特性与STR位点分型检测的优越性相结合，可进行法医学个体识别、亲子鉴定及DNA家谱构建等。Y-STR独特的优势在于同一父系所有男性样本分型一致，可以作为家系排查的工具，从而有效缩小侦查范围，低突变基因座更加适用于家系排查，但低突变基因座往往多态性较低，不利于家系之间的区分。法医上将突变率高于1％的基因座称为快速突变基因座(RapidlyMutatingY-STR)。快速突变基因座具有较高的相关男性区分能力，而且一般具有较高的多态性。因此，Y-STR试剂盒需要基因座的数量要多，同时基因座的多态性要高，以保证试剂盒具有足够高的整体多态性。
技术实现思路
为了克服现有技术的缺陷，获得一种具有高分辨率且能够满足Y-STR数据库建设及男性个体家系排查的试剂盒，本专利技术提供了人类Y染色体35个STR基因座的荧光标记复合扩增试剂盒及其应用。其技术方案是这样的，人类Y染色体35个STR基因座的荧光标记复合扩增试剂盒，35个STR基因座包括28个低突变Y-STR基因座DYS392、DYS389I、DYS447、DYS389II、DYS438、DYS527a、DYS527b、DYS596、DYS391、DYS456、DYS19、DYS448、DYS385a、DYS385b、DYS549、DYS437、DYS481、DYS533、DYS390、DYS458、DYS460、DYS393、Y_GATA_H4、DYS439、DYS635、DYS444、DYS643、DYS557，以及7个快速突变Y-STR基因座DYS627、DYS576、DYS570、DYF387S1a、DYF387S1b、DYS449、DYS518；所述试剂盒共包括31对特异性引物，用于扩增所述35个STR基因座，所述特异性引物的序列为：DYS392、SEQIDNO:1～2；DYS389I和DYS389II、SEQIDNO:3～4；DYS447、SEQIDNO:5～6；DYS438、SEQIDNO:7～8；DYS527a和DYS527b、SEQIDNO:9～10；DYS596、SEQIDNO:11～12；DYS391、SEQIDNO:13～14；DYS456、SEQIDNO:15～16；DYS19、SEQIDNO:17～18；DYS448、SEQIDNO:19～20；DYS385a和DYS385b、SEQIDNO:21～22；DYS549、SEQIDNO:23～24；DYS437、SEQIDNO:25～26；DYS481、SEQIDNO:27～28；DYS533、SEQIDNO:29～30；DYS390、SEQIDNO:31～32；DYS627、SEQIDNO:33～34；DYS458、SEQIDNO:35～36；DYS460、SEQIDNO:37～38；DYS393、SEQIDNO:39～40；Y_GATA_H4、SEQIDNO:41～42；DYS439、SEQIDNO:43～44；DYS635、SEQIDNO:45～46；DYS444、SEQIDNO:47～48；DYS643、SEQIDNO:49～50；DYS557、SEQIDNO:51～52；DYS576、SEQIDNO:53～54；DYS570、SEQIDNO:55～56；DYF387S1a和DYF387S1b、SEQIDNO:57～58；DYS449、SEQIDNO:59～60；DYS518、SEQIDNO:61～62；所述特异性扩增引物分为五组：DYS392、DYS389I、DYS447、DYS389II、DYS438、DYS527a、DYS527b和DYS596为第一组，DYS391、DYS456、DYS19、DYS448、DYS385a、DYS385b和DYS549为第二组，DYS437、DYS481、DYS533、DYS390、DYS627、DYS458和DYS460为第三组，DYS393、Y_GATA_H4、DYS439、DYS635、DYS444、DYS643和DYS557为第四组，DYS576、DYS570、DYF387S1a、DYF387S1b、DYS449和DYS518为第五组；每对引物中至少一条采用荧光染料标记其5’端。优选的，所述特异性引物在扩增体系中的终浓度为：DYS392、0.072μM；DYS389I和DYS389II、0.078μM；DYS447、0.096μM；DYS438、0.06μM；DYS527a和DYS527b、0.06μM；DYS596、0.12μM；DYS391、0.06μM；DYS456、0.054μM；DYS19、0.144μM；DYS448、0.054μM；DYS385a和DYS385b、0.084μM；DYS549、0.36μM；DYS437、0.072μM；DYS481、0.084μM；DYS533、0.12μM；DYS390、0.12μM；DYS627、0.264μM；DYS458、0.36μM；DYS460、0.42μM；DYS393、0.09μM；Y_GATA_H4、0.144μM；DYS439、0.084μM；DYS635、0.12μM；DYS444、0.18μM；DYS643、0.42μM；DYS557、0.48μM；DYS576、0.108μM；DYS570、0.156μM；DYF387S1a和DYF387S1b、0.192μM；DYS449、0.3μM；DYS518、0.528μM。该试剂盒包括的35个基因座对应的引物及其浓度具体如表1所示：表1.35个YSTR基因座引物信息优选的，所述荧光染料为：6-FAM、HEX、TAMRA、ROX、ATTO中任意一种，且每组采用的荧光标记不同，内标选用橙色荧光SIZ。优选的，所述试剂盒包括反应混合液(ReactionMix)、特异性复合扩增引物、热启动Taq酶、DNA标准品本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.人类Y染色体35个STR基因座的荧光标记复合扩增试剂盒，其特征在于，/n35个STR基因座包括28个低突变Y-STR基因座DYS392、DYS389I、DYS447、DYS389II、DYS438、DYS527a、DYS527b、DYS596、DYS391、DYS456、DYS19、DYS448、DYS385a、DYS385b、DYS549、DYS437、DYS481、DYS533、DYS390、DYS458、DYS460、DYS393、Y_GATA_H4、DYS439、DYS635、DYS444、DYS643、DYS557，以及7个快速突变Y-STR基因座DYS627、DYS576、DYS570、DYF387S1a、DYF387S1b、DYS449、DYS518；/n所述试剂盒共包括31对特异性引物，用于扩增所述35个STR基因座，所述特异性引物的序列为：DYS392、SEQ ID NO:1～2；DYS389I和DYS389II、SEQ ID NO:3～4；DYS447、SEQ IDNO:5～6；DYS438、SEQ ID NO:7～8；DYS527a和DYS527b、SEQ ID NO:9～10；DYS596、SEQ IDNO:11～12；DYS391、SEQ ID NO:13～14；DYS456、SEQ ID NO:15～16；DYS19、SEQ ID NO:17～18；DYS448、SEQ ID NO:19～20；DYS385a和DYS385b、SEQ ID NO:21～22；DYS549、SEQ IDNO:23～24；DYS437、SEQ ID NO:25～26；DYS481、SEQ ID NO:27～28；DYS533、SEQ ID NO:29～30；DYS390、SEQ ID NO:31～32；DYS627、SEQ ID NO:33～34；DYS458、SEQ ID NO:35～36；DYS460、SEQ ID NO:37～38；DYS393、SEQ ID NO:39～40；Y_GATA_H4、SEQ ID NO:41～42；DYS439、SEQ ID NO:43～44；DYS635、SEQ ID NO:45～46；DYS444、SEQ ID NO:47～48；DYS643、SEQ ID NO:49～50；DYS557、SEQ ID NO:51～52；DYS576、SEQ ID NO:53～54；DYS570、SEQ ID NO:55～56；DYF387S1a和DYF387S1b、SEQ ID NO:57～58；DYS449、SEQ IDNO:59～60；DYS518、SEQ ID NO:61～62；/n所述特异性扩增引物分为五组：DYS392、DYS389I、DYS447、DYS389II、DYS438、DYS527a、DYS527b和DYS596为第一组，DYS391、DYS456、DYS19、DYS448、DYS385a、DYS385b和DYS549为第二组，DYS437、DYS481、DYS533、DYS390、DYS627、DYS458和DYS460为第三组，DYS393、Y_GATA_H4、DYS439、DYS635、DYS444、DYS643和DYS557为第四组，DYS576、DYS570、DYF387S1a、DYF387S1b、DYS449和DYS518为第五组；每对引物中至少一条采用荧光染料标记其5’端。/n...

【技术特征摘要】
1.人类Y染色体35个STR基因座的荧光标记复合扩增试剂盒，其特征在于，
35个STR基因座包括28个低突变Y-STR基因座DYS392、DYS389I、DYS447、DYS389II、DYS438、DYS527a、DYS527b、DYS596、DYS391、DYS456、DYS19、DYS448、DYS385a、DYS385b、DYS549、DYS437、DYS481、DYS533、DYS390、DYS458、DYS460、DYS393、Y_GATA_H4、DYS439、DYS635、DYS444、DYS643、DYS557，以及7个快速突变Y-STR基因座DYS627、DYS576、DYS570、DYF387S1a、DYF387S1b、DYS449、DYS518；
所述试剂盒共包括31对特异性引物，用于扩增所述35个STR基因座，所述特异性引物的序列为：DYS392、SEQIDNO:1～2；DYS389I和DYS389II、SEQIDNO:3～4；DYS447、SEQIDNO:5～6；DYS438、SEQIDNO:7～8；DYS527a和DYS527b、SEQIDNO:9～10；DYS596、SEQIDNO:11～12；DYS391、SEQIDNO:13～14；DYS456、SEQIDNO:15～16；DYS19、SEQIDNO:17～18；DYS448、SEQIDNO:19～20；DYS385a和DYS385b、SEQIDNO:21～22；DYS549、SEQIDNO:23～24；DYS437、SEQIDNO:25～26；DYS481、SEQIDNO:27～28；DYS533、SEQIDNO:29～30；DYS390、SEQIDNO:31～32；DYS627、SEQIDNO:33～34；DYS458、SEQIDNO:35～36；DYS460、SEQIDNO:37～38；DYS393、SEQIDNO:39～40；Y_GATA_H4、SEQIDNO:41～42；DYS439、SEQIDNO:43～44；DYS635、SEQIDNO:45～46；DYS444、SEQIDNO:47～48；DYS643、SEQIDNO:49～50；DYS557、SEQIDNO:51～52；DYS576、SEQIDNO:53～54；DYS570、SEQIDNO:55～56；DYF387S1a和DYF387S1b、SEQIDNO:57～58；DYS449、SEQIDNO:59～60；DYS518、SEQIDNO:61～62；
所述特异性扩增引物分为五组：DYS392、DYS389I、DYS447、DYS389II、DYS438、DYS527a、DYS527b和DYS596为第一组，DYS391、DYS456、DYS19、DYS448、DYS385a、DYS385b和DYS549为第二组，DYS437、DYS481、DYS533、DYS390、DYS627、DYS458和DYS460为第三组，DYS393、Y_GATA_H4、DYS439、DYS635、DYS444、DYS643和DYS557为第四组，DYS576、DYS570、DYF387S1a、DYF387S1b、DYS449和DYS518为第五组；每对引物中至少一条采用荧光染料标记其5’端。


2.根据权利要求1所述的人类Y染色体35个STR基因座的荧光标记复合扩增试剂盒，其特征在于，所述特异性引物在扩增体系中的终浓度为：DYS392、0...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈林，郑卫红，王留柳，张科，耿学磊，史明浩，张雷，梅兴林，郑卫国，
申请(专利权)人：安徽省公安厅物证鉴定中心，安徽安科生物工程集团股份有限公司，无锡中德美联生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：安徽;34