一种水凝胶包被的微组织块培养药敏检测方法技术

本发明专利技术公开了一种水凝胶包被的微组织块培养药敏检测方法，还可以称为“果冻”药敏检测法，其主要包括以下步骤：肿瘤标本采集，肿瘤样本处理，组织块接种，药物处理，敏感性检测和和结果分析，分析时根据吸光度值换算公式进行换算得出，将孔板各孔的吸光度值进行换算，进而计算出每种药物对肿瘤组织块活性的影响。本发明专利技术保存了肿瘤的异质性和微环境，操作简单，实验条件要求低，可以快速、准确的筛选出最适合患者的肿瘤化疗方案，本发明专利技术的方法也可以也可以用于移植瘤小鼠（含PDX模型）肿瘤组织的微组织块培养和药敏检测，还可用于检测正常组织对各种干预措施的反应，如正常肝脏组织毒理学检测。

A method for detecting drug sensitivity of microgel block coated with hydrogel

【技术实现步骤摘要】
一种水凝胶包被的微组织块培养药敏检测方法
本专利技术涉及肿瘤药物敏感性检测
，尤其涉及一种水凝胶包被的微组织块培养药敏检测方法。
技术介绍
2018年2月，国家癌症中心发布了最新一期的全国癌症统计数据。2014年全国恶性肿瘤估计新发病例数380.4万例(男性211.4万例,女性169.0万万例)，平均每天超过1万人被确诊为癌症，每分钟有7个人被确诊为癌症[1,2]。目前,大多数恶性肿瘤疗效欠佳，其中一个很重要的原因是肿瘤的异质性。所谓的肿瘤异质性就是，同一肿瘤类型的不同病人间或者同一病人肿瘤内部不同细胞之间存在着多种生物学差异。这种差异决定了同一种肿瘤不同患者之间对同一治疗方案存在着显著的疗效差异。目前大部分医生都是根据NCCN等行业指南的标准方案对患者进行治疗，对于个体而言这种标准化疗方案就缺乏相应针对性，具有一定的盲目性。研究表明目前平均化疗有效率仅有25-30%，因此利用药物敏感性实验指导个性化精准用药，来提高治疗的效果、减轻药品不良反应，已成为国内外研究的热点。肿瘤微环境是指肿瘤细胞与肿瘤局部浸润的免疫细胞、基质细胞、内皮本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种水凝胶包被的微组织块培养药敏检测方法，其特征在于，包括以下步骤：/na）肿瘤标本采集：手术中切取肿瘤边缘生长比较旺盛、无溃疡坏死的肿瘤组织，迅速装入含有组织保存液的离心管中，离心管装入冰包低温运输；/nb）肿瘤样本处理：在实验室生物安全柜内用0.4%的台盼蓝染液检测肿瘤组织活性，剔除没有活性的组织，然后将组织放入0.2%的碘伏溶液中浸泡30秒钟消毒，再用含有3%双抗的PBS冲洗组织，将肿瘤组织分割成2×2×2mm

【技术特征摘要】
1.一种水凝胶包被的微组织块培养药敏检测方法，其特征在于，包括以下步骤：
a）肿瘤标本采集：手术中切取肿瘤边缘生长比较旺盛、无溃疡坏死的肿瘤组织，迅速装入含有组织保存液的离心管中，离心管装入冰包低温运输；
b）肿瘤样本处理：在实验室生物安全柜内用0.4%的台盼蓝染液检测肿瘤组织活性，剔除没有活性的组织，然后将组织放入0.2%的碘伏溶液中浸泡30秒钟消毒，再用含有3%双抗的PBS冲洗组织，将肿瘤组织分割成2×2×2mm3的组织块，96孔细胞培养板每一个孔内放一块切割后组织块，细胞培养板放在冰上或者蓝冰冰砖上预冷；
c）组织块接种：将一定量4℃预冷的I型胶原蛋白溶液加入到在含有组织块的细胞培养孔中，将全部组织块淹没，然后盖上盖子，放入37℃二氧化碳含量为5%的细胞培养箱中孵育2-3小时，待胶原蛋白凝固后，将培养板取出在生物安全柜里加入适量的组织培养基，再放入细胞培养箱中培养；
d）药物处理：组织块在细胞培养箱内培养24小时候后吸弃原来的培养基，加入含有测试药物的完全培养基，每24小时更换一次含有测试药物的完全培养基；
e）敏感性检测：组织块在使用含有测试药物的完全培养基药培养了3至7天后，吸弃含药培养基，用PBS缓冲液洗涤3次，然后加入MTT溶液，6小时后将MTT溶液吸去，用眼科镊将组织块从水凝胶中取出，放入新的细胞培...

【专利技术属性】
技术研发人员：何远桥，陈传军，
申请(专利权)人：南昌乐悠生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：江西;36