海龟骨骼DNA的提取方法技术

本发明专利技术涉及生物技术领域，特别涉及海龟骨骼DNA的提取方法。本发明专利技术提供的海龟骨骼DNA的提取方法包括以下步骤：样品机械粉碎，然后加入EDTA溶液后置于56℃水浴锅中进行6h脱钙，其次加入裂解液和蛋白酶K后置于58℃水浴锅中进行12h消化，最后利用dBIZOL试剂盒提取DNA。该方法对骨骼的DNA提取效率高且完整性好，操作简便，成本低廉。还能为打击海龟类动物非法贸易(海龟类工艺品、非法贩卖)提供物种鉴定的技术补充；也能为海龟保护的科学研究提供无损伤取样技术。

Extraction of DNA from turtle skeleton

【技术实现步骤摘要】
海龟骨骼DNA的提取方法
本专利技术涉及生物
，特别涉及海龟骨骼DNA的提取方法。
技术介绍
世界现存海龟仅有2科(海龟科和棱皮龟科)6属7种，即绿海龟(C.mydas)、红海龟(C.caretta)、太平洋丽龟(L.olivacea)、大西洋丽龟(L.kempii)、玳瑁(E.imbricata)、平背海龟(Natatordepressus)和棱皮龟(Dermochelyscoriacea)，都被列入CITES公约附录I名录。我国有2科5属5种，即绿海龟、红海龟、玳瑁、太平洋丽龟和棱皮龟，主要分布于黄海、东海及南海等海域。所有海龟种类都具有经济价值和观赏价值，国内外都存在过猎的现象，越来越多的海龟类艺术品在市面上出现。越来越多的不法商贩铤而走险，海龟被捕杀和肢解，物种鉴定是在量刑之前首要完成的工作，那么最大范围的DNA获取样品来源将是物种鉴定的关键。而且近些年随着对海龟保护力度的加大，对它们的科学研究也从形态学和解剖学扩展到了分子生物学，所以无损伤取样获得高质量的DNA将为推动海龟科学研究具有重要意义。>专利技术内本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.海龟骨骼DNA的提取方法，其特征在于，包括如下步骤：/n步骤1：取待测样品粉碎后与浓度为0.1mol/L～0.5mol/L的EDTA溶液混合脱钙6h；/n步骤2：取步骤1制得的脱钙后的待测样品与裂解液和蛋白酶K溶液混合消化；/n步骤3：取步骤2制得的消化产物提取DNA。/n

【技术特征摘要】
1.海龟骨骼DNA的提取方法，其特征在于，包括如下步骤：
步骤1：取待测样品粉碎后与浓度为0.1mol/L～0.5mol/L的EDTA溶液混合脱钙6h；
步骤2：取步骤1制得的脱钙后的待测样品与裂解液和蛋白酶K溶液混合消化；
步骤3：取步骤2制得的消化产物提取DNA。


2.如权利要求1所述的提取方法，其特征在于，所述骨骼包括龟甲、头骨和/或附肢骨骼，所述龟甲包括背甲和/或腹甲。


3.如权利要求1或2所述的提取方法，其特征在于，所述海龟包括绿海龟(Cheloniamydas)，太平洋丽龟(Lepidochelysolivacea)，玳瑁(Eretmochelysimbricate)或红海龟(Carettacaretta)中的一种或多种。


4.如权利要求1至3任一项所述的提取方法，其特征在于，步骤1中，以g/mL计，粉碎后的待测样品与所述EDTA溶液的质量体积比为1:15，所述脱钙的温度为50℃～60℃。


5.如权利要求1至4任一项所述的提取方法，其特征在于，步骤1与步骤2之间还包括离心去上清的步骤，所述离心的转速为13000rp，所述离心的时间为5min。

【专利技术属性】
技术研发人员：杜宇，郭坤，吴延庆，姚运涛，刘其则，陈忠荫，王婉婷，吕缙威，林炽贤，计翔，
申请(专利权)人：海南热带海洋学院，
类型：发明
国别省市：海南;46