一种双特异性抗体制造技术

本发明专利技术提出一种方法，该方法的核心是一个抗人PD‑L1的抗体，使用该抗人PD‑L1的抗体与抗人CD3的抗体组成一个双特异性抗体。此双特异抗体可同时结合T细胞和表达PD‑L1或诱导表达PD‑L1肿瘤细胞并杀伤结合的肿瘤细胞。该方法既可以绕过TCR和MHC‑I抗原的限制同时也解决PD‑L1诱导表达后与T细胞表面的PD‑1结合导致的免疫抑制。从而更有效地杀伤肿瘤细胞，抑制肿瘤的生长。

A bispecific antibody

【技术实现步骤摘要】
一种双特异性抗体相关申请本申请要求申请日为2018年09月17日，专利技术名称为“一种双特异性抗体”的中国专利申请201811082753.6的优先权。专利
本专利技术属于生物医药领域，具体的，涉及一种治疗表达PD-L1或可诱导表达PD-L1肿瘤的双特异抗体。专利技术背景高等动物的免疫系统被机体自身精密地控制稳定平衡状态，在这种状态下，免疫系统既能对外来入侵者或自体发生的异常快速反应并清除，又能在清除异常后减弱免疫反应并保持静息状态。参与调控维持免疫状态的有许多因子，其中包括一些免疫刺激因子，如CD40,CD137,OX40,CD28,CD27,CD3等等，以及一些免疫抑制因子，如PD-1,PD-L1,CTLA4,LAG-3,TIM-3等等。这些免疫抑制因子通常被称为免疫检查点。近几年，这些免疫检查点在肿瘤的发生发展及肿瘤的治疗中发挥的作用得到了长足的阐明和应用。PD-1是表达在T细胞表面的受体蛋白，当T细胞激活时，其表面的PD-1表达上调。当PD-1与其配体PD-L1结合时，PD-1开始发挥抑制作用使T细胞处于耗竭状态，不再能发挥免疫杀伤作用。PD-L1是表达在细胞表面的蛋白质，通常表达在正常的外周组织的细胞上，但许多肿瘤组织也组成型地表达PD-L1蛋白，从而经过PD-1/PD-L1信号轴心，有效地抑制了T细胞对肿瘤组织的杀伤，达到了肿瘤逃逸的目标。针对这一肿瘤逃逸机制，已经研发出若干单克隆抗体，阻止PD-1和PD-L1的结合，解除PD-1对T细胞的抑制，恢复T细胞对肿瘤组织的杀伤作用。这些单克隆抗体包括抗PD-1的抗体，如百时美施贵宝(Bristol-MyersSquibb)研发的纳武单抗(Nivolumab，商品名Opdivo)和默沙东(Merck&Co.Inc)研发的派姆单抗(Pembrolizumab，商品名Keytruda)，已分别于2015年和2016年获得美国FDA的临床使用许可，用于治疗黑色素瘤，肠癌，头颈癌，胃癌，宫颈癌，非霍金氏淋巴瘤，霍金氏淋巴瘤，非小细胞肺癌，Merkel细胞癌，尿道上皮癌，肾癌，肝细胞癌等等。针对PD-L1的抗体有基因泰克公司(Genentech)的Atezolizumab(商品名Tecentriq)，2016年获美国FDA批准，用于治疗尿道上皮癌和非小细胞肺癌；默克(MerckKGaA)和辉瑞(Pfizer)联合研制的Avelumab(商品名Bavencio)2017年批准用于Merkel细胞癌及尿道上皮癌；以及阿斯利康公司(AstraZeneca)研制的Durvalumab(商品名Imfinzi)2017年批准用于非小细胞肺癌和尿道上皮癌。单克隆抗体由于其对靶点的特异性和高亲和力，早已用于肿瘤，自身免疫等疾病。这方面的例子有基因泰克公司(Genentech)研制的针对血管内皮细胞生长因子(VEGF)的抗体贝伐单抗(Bevacizumab，商品名Avastin中文名安维汀)用于抗肿瘤的血管生成，针对肿瘤表面受体Her2的曲妥珠单抗(Trastuzumab,商品名Herceptin，中文名赫赛汀)，用于治疗Her2阳性乳腺癌，针对B细胞表面蛋白的利妥昔单抗(Rituximab,商品名Rituxan，中文名美罗华)，用于治疗B细胞淋巴瘤。雅培公司研制的针对肿瘤坏死因子(TNF)的阿达木单抗(Adalimumab,商品名Humira，中文名修美乐)，用于治疗风湿性关节炎和强直性脊柱炎。罗氏公司(Roche)研制的针对白介素6(IL-6)的托珠单抗(Tocilizumab，商品名Actemra),用于治疗风湿性关节炎，也用于治疗肿瘤免疫治疗过程中发生是细胞因子风暴。截止2017年，FDA已经批准超过50多个单克隆抗体药物。单克隆抗体只能识别一个单一的靶点，这既赋予单克隆抗体特异性的优势，也因此而受到靶点特异性的限制。近年来，抗体类药物研发的另一个趋势是双特异抗体。所谓双特异抗体是指一个抗体分子的可变区有两个特异性结构，可以同时结合两个抗原。双特异抗体除了极少数通过杂交瘤产生的“天然”分子如同时抗人EpCam和CD3的Catumaxomb之外，绝大部分都是通过基因工程的方法将两个单克隆抗体分子以某种融合蛋白的形式的表达和生产。双特异抗体的构成形式大致可以分成包含抗体Fc区域和不含Fc区域两种类型。包含Fc区域的结构形式因为保留了Fc的功能而具有Fc所带来的特点比如半衰期比较长，可以诱导ADCC和CDC，易于纯化等。不含Fc区域的结构形式具有比较小的分子量，可以在原核生物，并且具有比较好的组织穿透能力，可以达到病灶内部。包含Fc区域的双特异分子形式有Triomab,Knob-in-holeIgG,CrossMab,ortho-FabIgG,DVD-IgG，Two-in-oneIgG,IgG-scFv,scFv2-IgG,Y-Body,FIT-IG等形式，而不含Fc的结构形式有BiTE，DART，TandAbs,bi-Nanobody等等。在作用机制方面，双特异抗体大致可以分成三类，即双靶点信号阻断，连接蛋白形成功能性复合体，以及介导免疫细胞杀伤。在第一种机制中双特异抗体中的两个抗体可变区分别结合两个不同的靶点，阻断这两个靶点所驱动的信号通路，从而达到阻止肿瘤生长的目的。另一种机制是双特异抗体结合两个蛋白，使这两个蛋白接近并形成功能性复合体。这一机制的例子有罗氏代号为RG6013双特异抗体Emicizumab，商品名HemiLibra。该双特异抗体取代凝血因子VIII，一端结合凝血因子IXa,另一端结合凝血因子X,形成功能性复合体，可以有效地治疗凝血因子VIII功能缺陷所引起的甲型血友病。双特异性抗体还有一种重要的机制是介导免疫细胞的杀伤。这种双特异抗体一个可变区结合肿瘤细胞表面蛋白，一个可变区结合免疫细胞表面的分子，并激活相应的免疫细胞杀伤功能。免疫细胞的类型有T细胞，NK细胞和巨噬细胞，其结合的抗原分别是T细胞的CD3,NK细胞的CD16，巨噬细胞表面的CD47。这一类双特异抗体成功的例子有安进公司(Amgen)的Blinatumomab(商品名Blindcyto)。该抗体分子的一个可变区以scFv形式结合CD19，另一个可变区以scFv形式结合CD19，两个scFv以一段蛋白质连接子相连。当双特异抗体结合B细胞淋巴瘤表面的CD19并因其抗CD3的scFv结合T细胞从而在T细胞和B淋巴瘤细胞之间形成免疫突触，同时抗CD3的scFv激活T细胞释放穿孔素(Perforin),颗粒酶(Granzyme)和伽马干扰素(IFN)等活性分子杀死B淋巴瘤细胞。像Blincyto这样的双特异抗体被称为T细胞接触型双特异抗体。在人体自身对肿瘤细胞杀伤的各种手段中，CD8阳性T细胞的杀伤能力最为有效和特异。CD8+T细胞通过其表面特异的TCR(T细胞受体)识别肿瘤细胞表面由MHC-I复合体所递呈的抗原，然后再在T细胞和肿瘤细胞之间形成免疫突触，由TCR激活的T细胞释放穿孔素(Perforin),颗粒酶(Granzyme)和伽马干扰素(IFN)，肿瘤坏死因子(TN本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种双特异性抗体，该抗体由抗人PD-L1的抗体与抗人CD3抗体联合构建而成。/n

【技术特征摘要】
20180917 CN 20181108275361.一种双特异性抗体，该抗体由抗人PD-L1的抗体与抗人CD3抗体联合构建而成。


2.根据权利要求1所述的抗体，所述的抗人PD-L1抗体含有SEQIDNO：1所示重链可变区序列。


3.根据权利要求1所述的抗体，所述的抗人PD-L1抗体含有SEQIDNO：2所示轻链可变区序列。


4.根据权利要求1所述的抗体，所述的抗体可以含有SEQIDNO：3所示抗人CD3抗体重链可变区序列。


5.根据权利要求1所述的抗体，所述的抗体含有SEQIDNO：4所示抗人CD3抗体轻链可变区序列。


6.根据权利要求1所述的抗体，抗人PD-L1抗体重链可变区由SEQIDNO：5所示DNA序列编码。


7.根据权利要求1所述的抗体，抗人PD-L1抗体轻链可变区由SEQIDNO：6所示DNA序列编码。


8.根据权利要求6所述的抗体，所述抗人PD-L1抗体重链可变区由根据氨基酸编码的简并原则所推演的与SEQIDNO：5所示DNA序列相似的DNA序列编码。


9.根据权利要求7所述的抗体，所述抗人PD-L1抗体轻链可变区由根据氨基酸编码的简并原则所推演的与SEQIDNO：6所示DNA序列相似的DNA序列编码。


10.根据权利要求4所述的抗体，所述抗人C...

【专利技术属性】
技术研发人员：孟坤，周骏马，
申请(专利权)人：北京盛诺基医药科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：北京;11