抗登革热病毒抗体及其应用制造技术

本发明专利技术涉及抗登革热病毒抗体及其应用。特定而言，本发明专利技术的抗病毒登革病毒抗体为血清型专一性，可用于生物样本中各种登革病毒血清型的专一性检测及分化。本发明专利技术还提供了用于检测登革病毒的方法及套组，以及使用如本文所述的抗病毒登革病毒抗体诊断及治疗登革病毒病的方法及组合物。

Anti dengue virus antibody and its application

【技术实现步骤摘要】
抗登革热病毒抗体及其应用相关申请案本申请案主张2018年6月12日申请之美国专利技术专利申请案第16/006,000号之优先权，其内容在此全部并入作为参考资料。
本专利技术涉及抗登革病毒抗体及其应用。特定而言，本专利技术之抗病毒登革病毒抗体为血清型专一性，可用于生物样本中各种登革病毒血清型的专一性检测及分化。本专利技术还提供了用于检测登革病毒之方法及套组，以及使用如本文所述之抗病毒登革病毒抗体诊断及治疗登革病毒病之方法及组合物。
技术介绍
现今世界上约有39亿人口生活在有登革热传播危险的地区。估计每年有1亿例登革热感染，包括250,000-500,000例重症病例及约25,000例死亡。登革热为一种由蚊子传播的病毒性疾病，由四种登革病毒血清型(DENV1、DENV2、DENV3及DENV4)中的任何一种传播所引起。在全球范围内，登革热大多由两种主要的蚊子传播：埃及斑蚊(Aedesaegypti)(适应城市)及白线斑蚊(Aedesalbopictus)。登革热的迅速蔓延归因于热带及亚热带国家的城市化、登革热流行地区的国家内部及国家之间的旅行增加，以及无效的病媒控制策略。实际上，登革热的疾病及经济负担已成为全球公共卫生问题。迄今为止，尚未有有效的抗病毒药物可用于治疗登革感染，且疫苗仍处于评估阶段。此外，一种登革病毒血清型的感染赋予相同血清型终身免疫力，但当感染另一种血清型时，增加了发生严重登革热的风险。因此，早期诊断DENV对于疾病管理非常重要。登革病毒感染的早期诊断将干涉治疗患者及控制流行病。感染登革病毒的人类表现出广泛的临床表现，从无症状感染到严重的登革热，使得准确的诊断变得困难。目前登革热的实验室诊断测试包括分离病毒、病毒RNA检测、抗原检测及血清学方法。病毒分离及病毒RNA检测在疾病的前五(5)天内有效；这两种方法都可以识别登革病毒的血清型。然而，病毒分离很耗时，且病毒RNA检测需要特殊设备及培训人员。抗DENVIgM或IgG抗体仅在疾病发作后5天出现在血液中，且可能与其他黄病毒交叉反应；因此，在症状出现的前5天内检测抗DENVIgM或IgG无法确认病毒的存在，并且可能经常发生伪阳性结果。在该疾病的急性期(即，疾病发作后第1天及第7天之间)，登革病毒非结构蛋白1(nonstructuralprotein1，NS1)，一种50kDa糖蛋白，在患者血清中分泌并积聚至高浓度。在感染后1至9天内可确认人类血清中NS1的存在。此外，当以RT-PCR检测不到病毒RNA且在IgM抗体出现之前，可以检测到NS1蛋白。NS1蛋白为早期诊断标记物的良好目标。NS1蛋白的抗原检测试验可以简单、低成本、处理大量样本，以及快速的方式进行DENV的早期诊断。然而，虽然有几种市售NS1检测试验可用于在疾病的早期阶段诊断登革热，但它们都不能区分各种登革热的血清型。仍然需要开发能够检测及区分各种登革热血清型的诊断技术。
技术实现思路
本专利技术基于许多分离的抗体的鉴定，这些抗体出乎意料地表现出对各登革病毒血清型的优异专一性。本专利技术之每种血清型专一性抗体能够检测登革病毒的一种特定血清型而基本上不与其他血清型交叉反应。本专利技术提供了这样的抗体及其抗原结合片段，以及包含它们的组合物及套组，以及使用它们的方法。本专利技术可用于专一性检测样本中的一种或多种登革病毒血清型，具体而言是来自怀疑被病毒感染的患者的样本。本专利技术还提供了对登革病毒专一的交叉反应性抗体(所有血清型)，其可以与本文所述之任何血清型专一性抗体配对，用于免疫测定以检测样本中的登革病毒。于一方面，本专利技术提供分离的抗体或其抗原结合片段，其中该分离的抗体系选自由下列所组成之群组：(i)专一于登革病毒血清型第1型(DENV1)之第一抗体，包含(a)重链可变区(VH)，包含如SEQIDNO:2所示之重链互补决定区1(HCCDR1)、如SEQIDNO:4所示之重链互补决定区2(HCCDR2)，以及SEQIDNO:6所示之重链互补决定区3(HCCDR3)；以及(b)一轻链可变区(VL)，包含SEQIDNO:9所示之轻链互补决定区1(LCCDR1)、SEQIDNO:11所示之轻链互补决定区2(LCCDR2)，以及SEQIDNO:13所示之轻链互补决定区3(LCCDR3)；(ii)专一于登革病毒血清型第2型(DENV2)之第二抗体，包含(a)重链可变区(VH)，包含SEQIDNO:16所示之重链互补决定区1(HCCDR1)、SEQIDNO:18所示之重链互补决定区2(HCCDR2)，以及SEQIDNO:20所示之重链互补决定区3(HCCDR3)；以及(b)轻链可变区(VL)，包含SEQIDNO:23所示之轻链互补决定区1(LCCDR1)、SEQIDNO:25所示之轻链互补决定区2(LCCDR2)，以及SEQIDNO:27所示之轻链互补决定区3(LCCDR3)；(iii)专一于登革病毒血清型第3型(DENV3)之第三抗体，包含(a)重链可变区(VH)，包含SEQIDNO:30所示之重链互补决定区1(HCCDR1)、SEQIDNO:32所示之重链互补决定区2(HCCDR2)，以及SEQIDNO:34所示之重链互补决定区3(HCCDR3)；以及(b)轻链可变区(VL)，包含SEQIDNO:37所示之轻链互补决定区1(LCCDR1)、SEQIDNO:39所示之轻链互补决定区2(LCCDR2)，以及SEQIDNO:41所示之轻链互补决定区3(LCCDR3)；(iv)专一于登革病毒血清型第4型(DENV4)之第四抗体，包含(a)重链可变区(VH)，包含SEQIDNO:44所示之重链互补决定区1(HCCDR1)、SEQIDNO:46所示之重链互补决定区2(HCCDR2)，以及SEQIDNO:48所示之重链互补决定区3(HCCDR3)；以及(b)轻链可变区(VL)，包含SEQIDNO:51所示之轻链互补决定区1(LCCDR1)、SEQIDNO:53所示之轻链互补决定区2(LCCDR2)，以及SEQIDNO:55所示之轻链互补决定区3(LCCDR3)；(v)与登革病毒血清型第1型、第2型、第3型，以及第4型(DENV1、DENV2、DENV3，以及DENV4)交叉反应之第五抗体，包含(a)重链可变区(VH)，一如SEQIDNO:58所示之重链互补决定区1(HCCDR1)、SEQIDNO:60所示之重链互补决定区2(HCCDR2)，以及SEQIDNO:62所示之重链互补决定区3(HCCDR3)；以及(b)轻链可变区(VL)，包含SEQIDNO:65所示之轻链互补决定区1(LCCDR1)、SEQIDNO:67所示之轻链互补决定区2(LCCDR2)，以及SEQIDNO:69所示之轻链互补决定区3(LCCDR3)；以及(vi)任何(i)至(v)之组合。于某些具体实施例中，该第一抗体包含包含SEQIDNO:71的重链可变区(VH)以及包含SEQIDNO:72的轻链可变区(VL)。于某些本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种专一于登革病毒的分离的抗体或其抗原结合片段，其中该分离的抗体选自由下列所组成之群组：/n(i)第一抗体，其专一于登革病毒血清型第1型(DENV1)，包含/n(a)重链可变区(V

【技术特征摘要】
20180612 US 16/006,0001.一种专一于登革病毒的分离的抗体或其抗原结合片段，其中该分离的抗体选自由下列所组成之群组：
(i)第一抗体，其专一于登革病毒血清型第1型(DENV1)，包含
(a)重链可变区(VH)，包含如SEQIDNO:2所示之重链互补决定区1(HCCDR1)、如SEQIDNO:4所示之重链互补决定区2(HCCDR2)，以及如SEQIDNO:6所示之重链互补决定区3(HCCDR3)；以及
(b)轻链可变区(VL)，包含如SEQIDNO:9所示之轻链互补决定区1(LCCDR1)、如SEQIDNO:11所示之轻链互补决定区2(LCCDR2)，以及如SEQIDNO:13所示之轻链互补决定区3(LCCDR3)；
(ii)第二抗体，其专一于登革病毒血清型第2型(DENV2)，包含
(a)重链可变区(VH)，包含如SEQIDNO:16所示之重链互补决定区1(HCCDR1)、如SEQIDNO:18所示之重链互补决定区2(HCCDR2)，以及如SEQIDNO:20所示之重链互补决定区3(HCCDR3)；以及
(b)轻链可变区(VL)，包含SEQIDNO:23所示之轻链互补决定区1(LCCDR1)、如SEQIDNO:25所示之轻链互补决定区2(LCCDR2)，以及如SEQIDNO:27所示之轻链互补决定区3(LCCDR3)；
(iii)第三抗体，其专一于登革病毒血清型第3型(DENV3)，包含
(a)重链可变区(VH)，包含如SEQIDNO:30所示之重链互补决定区1(HCCDR1)、如SEQIDNO:32所示之重链互补决定区2(HCCDR2)，以及如SEQIDNO:34所示之重链互补决定区3(HCCDR3)；以及
(b)轻链可变区(VL)，包含SEQIDNO:37所示之轻链互补决定区1(LCCDR1)、如SEQIDNO:39所示之轻链互补决定区2(LCCDR2)，以及如SEQIDNO:41所示之轻链互补决定区3(LCCDR3)；
(iv)第四抗体，其专一于登革病毒血清型第4型(DENV4)，包含
(a)重链可变区(VH)，包含如SEQIDNO:44所示之重链互补决定区1(HCCDR1)、如SEQIDNO:46所示之重链互补决定区2(HCCDR2)，以及如SEQIDNO:48所示之重链互补决定区3(HCCDR3)；以及
(b)轻链可变区(VL)，包含SEQIDNO:51所示之轻链互补决定区1(LCCDR1)、如SEQIDNO:53所示之轻链互补决定区2(LCCDR2)，以及如SEQIDNO:55所示之轻链互补决定区3(LCCDR3)；
(v)第五抗体，其与登革病毒血清型第1型、第2型、第3型，以及第4型(DENV1、DENV2、DENV3，以及DENV4)交叉反应，包含
(a)重链可变区(VH)，包含如SEQIDNO:58所示之重链互补决定区1(HCCDR1)、如SEQIDNO:60所示之重链互补决定区2(HCCDR2)，以及如SEQIDNO:62所示之重链互补决定区3(HCCDR3)；以及
(b)轻链可变区(VL)，包含SEQIDNO:65所示之轻链互补决定区1(LCCDR1)、如SEQIDNO:67所示之轻链互补决定区2(LCCDR2)，以及如SEQIDNO:69所示之轻链互补决定区3(LCCDR3)；以及
(vi)任何(i)至(v)之组合。


2.如权利要求1的分离的抗体或抗原结合片段，其中
(i)该第一抗体包含包含SEQIDNO:71的重链可变区(VH)以及包含SEQIDNO:72的轻链可变区(VL)；
(ii)该第二抗体包含包含SEQIDNO:73的重链可变区(VH)以及包含SEQIDNO:74的轻链可变区(VL)；
(iii)该第三抗体包含包含SEQIDNO:75的重链可变区(VH)以及包含SEQIDNO:76的轻链可变区(VL)；
(iv)该第四抗体包含包含SEQIDNO:77的重链可变区(VH)以及包含SEQIDNO:78的轻链可变区(VL)；及/或
(v)该第五抗体包含包含SEQIDNO:79的重链可变区(VH)以及包含SEQIDNO:80的轻链可变区(VL)。


3.如权利要求1的分离的抗体或抗原结合片段，其中该抗原结合片段选自由所述之专一于登革病毒的分离的抗体的scFv、(scFv)2、Fab、Fab'，以及F(ab')2所组成之群组。


4.一种组合物，包含如权利要求1的分离的抗体或其抗原结合片段。


5.如权利要求4的组合物，其医药或诊断组合物，用于治疗或诊断登革病毒疾病。


6.如权利要求4的组合物，其包含医药上可接受之载体。


7.一种在怀疑含有登革病毒的样本中检测登革病毒的方法，包含使该样本与专一于登革病毒的分离的抗体或其抗原结合片段接触，并测定该抗体与该样本的结合，其中该分离的抗体选自由下列所组成之群组：
(i)第一抗体，其专一于登革病毒血清型第1型(DENV1)，其包含重链可变区(VH)，该重链可变区(VH)包含如SEQIDNO:2所示之重链互补决定区1(HCCDR1)、如SEQIDNO:4所示之重链互补决定区2(HCCDR2)，以及如SEQIDNO:6所示之重链互补决定区3(HCCDR3)；以及轻链可变区(VL)，该轻链可变区(VL)包含SEQIDNO:9所示之轻链互补决定区1(LCCDR1)、如SEQIDNO:11所示之轻链互补决定区2(LCCDR2)，以及如SEQIDNO:13所示之轻链互补决定区3(LCCDR3)；
(ii)第二抗体，其专一于登革病毒血清型第2型(DENV2)，其包含重链可变区(VH)，该重链可变区(VH)包含如SEQIDNO:16所示之重链互补决定区1(HCCDR1)、如SEQIDNO:18所示之重链互补决定区2(HCCDR2)，以及如SEQIDNO:20所示之重链互补决定区3(HCCDR3)；以及轻链可变区(VL)，该轻链可变区(VL)包含SEQIDNO:23所示之轻链互补决定区1(LCCDR1)、如SEQIDNO:25所示之轻链互补决定区2(LCCDR2)，以及如SEQIDNO:27所示之轻链互补决定区3(LCCDR3)；
(iii)第三抗体，其专一于登革病毒血清型第3型(DENV3)，其包含重链可变区(VH)，该重链可变区(VH)包含如SEQIDNO:30所示之重链互补决定区1(HCCDR1)、如SEQIDNO:32所示之重链互补决定区2(HCCDR2)，以及如SEQIDNO:34所示之重链互补决定区3(HCCDR3)；以及轻链可变区(VL)，该轻链可变区(VL)包含SEQIDNO:37所示之轻链互补决定区1(LCCDR1)、如SEQIDNO:39所示之轻链互补决定区2(LCCDR2)，以及如SEQIDNO:41所示之轻链互补决...

【专利技术属性】
技术研发人员：赖思佳，黄郁茵，林昌棋，魏俊杰，蔡孟宏，
申请(专利权)人：赖思佳，
类型：发明
国别省市：中国台湾;TW