一种多联管式脂肪干细胞提取方法技术

本发明专利技术公开了一种多联管式脂肪干细胞提取方法，包括清洗、剪碎、消化、再消化、再消化后清洗、过滤、培养、换液、传代等步骤。在上述步骤中，采用多联管式的操作方法，有效清除脂肪组织中的血细胞、油滴及其他杂质，保证提取的脂肪干细胞的纯度；剪碎步骤，能够最大限度的促进后续脂肪组织与消化酶的接触面，缩短消化时间，避免消化酶对细胞的损伤；再消化步骤增加脂肪干细胞的获得率；换液步骤减少油滴对细胞贴壁的影响同时促进更多细胞贴壁。本发明专利技术的脂肪干细胞提取方法简单易用，能够极大的降低红细胞和油滴等对脂肪干细胞的影响，同时最大程度的利用脂肪组织获得脂肪干细胞，脂肪干细胞获得率明显提高。

A method of extraction of adipose stem cells by multi tube method

【技术实现步骤摘要】
一种多联管式脂肪干细胞提取方法
本专利技术涉及干细胞提取领域，具体涉及一种多联管式脂肪干细胞提取方法。
技术介绍
间充质干细胞(mesenchymalstemcells，MSCs)来源于中胚层，是一种类似成纤维细胞样形态，贴壁生长，表达CD105、CD73、CD90，不表达CD45、CD34、CD14或CD11b、CD79a或CD19的细胞；它可以从骨髓、脂肪、脐带华通氏胶、胎盘、脐带血、牙髓、绒毛膜等多种组织中被分离出来；它是具有高度自我更新能力和多向分化潜能的多能干细胞，能体外培养并在特定条件下分化为神经细胞、成骨细胞、软骨细胞、脂肪细胞等。MSCs在细胞治疗中有广泛的用途，包括组织工程、再生医学和被用作基因治疗的载体。脂肪干细胞(adipose-derivedstemcells，ADSCs)是一种从脂肪组织中分离出来的间充质干细胞，具有多向分化潜能，能够在体外进行大规模培养，可向脂肪、骨、软骨、内皮等多种方向进行分化，且取材方便、创口小、不存在异体排斥性等特点，是一种理想的种子干细胞。脂肪干细胞能够分化成血管内皮细胞，促进血管生成本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种多联管式脂肪干细胞提取方法，其特征在于，包括以下步骤：/n(1)清洗：(1a)将无菌获取的脂肪组织加入离心管中，用等体积的生理盐水重悬脂肪组织，以转速400～600rpm离心4-8min；(1b)使用移液管将脂肪组织层挑取到另一空离心管中，加入等体积的生理盐水，震荡混匀后，以转速500～600rpm离心4-8min；/n(2)剪碎：将所述步骤(1b)清洗之后的脂肪组织挑入另一空的离心管中，剪切约5～10min，使之成为组织块匀浆，再重复上述步骤(1b)直至生理盐水呈透明；/n(3)消化：将上述清洗后的脂肪组织匀浆挑入空离心管中，并加入等体积的胶原酶，置于35-40℃水浴中、以转速100...

【技术特征摘要】
1.一种多联管式脂肪干细胞提取方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)清洗：(1a)将无菌获取的脂肪组织加入离心管中，用等体积的生理盐水重悬脂肪组织，以转速400～600rpm离心4-8min；(1b)使用移液管将脂肪组织层挑取到另一空离心管中，加入等体积的生理盐水，震荡混匀后，以转速500～600rpm离心4-8min；
(2)剪碎：将所述步骤(1b)清洗之后的脂肪组织挑入另一空的离心管中，剪切约5～10min，使之成为组织块匀浆，再重复上述步骤(1b)直至生理盐水呈透明；
(3)消化：将上述清洗后的脂肪组织匀浆挑入空离心管中，并加入等体积的胶原酶，置于35-40℃水浴中、以转速100～200rpm震荡消化20～50min，然后加入间充质干细胞无血清完全培养基终止消化，再以转速1300～1800rpm离心5～8min；
(4)再消化：将上述步骤(3)消化得到的上层溶液及组织，吸除上层油滴层后，将未完全消化组织收集到空离心管中，加入等体积的胶原酶，消化15～30min，然后通过加入生理盐水或间充质干细胞无血清完全培养基终止消化，再以转速1300～1800rpm离心5～6min，弃上层溶液；
(5)再消化后清洗：收集上述步骤(3)和(4)底部所得的所有脂肪组织及细胞匀浆，并向收集的脂肪组织及细胞匀浆中加入2～3倍体积的生理盐水重悬，以转速1000～1300rpm离心5～8min，弃上清溶液；
(6)过滤：将步骤(4)再清洗后的脂肪组织及细胞匀浆，用100μm过滤器过滤，再将过滤得到的下层滤液以转速1000～1300rpm离心5～8min，弃上层...

【专利技术属性】
技术研发人员：李伟强，邵文陶，邹桥，
申请(专利权)人：重庆赛托斯创生物科技发展有限公司，
类型：发明
国别省市：重庆;50