浅白隐球酵母菌发酵培养基制造技术

本发明专利技术公开了一种浅白隐球酵母菌发酵培养基，所述培养基由YPD培养基和无机盐制备而成，其中：无机盐包括MgSO

Culture medium of Cryptococcus albicans

【技术实现步骤摘要】
浅白隐球酵母菌发酵培养基
本专利技术涉及一种酵母菌发酵培养基。
技术介绍
采后果蔬在贮藏和运输过程中，由于呼吸代谢活动、微生物作用及水分的流失常常会有萎蔫、霉变和腐烂的现象发生。其中由微生物侵染造成的腐烂并不少见，病原微生物通过在果蔬表面上的坏死组织和伤口入侵，利用入侵位点周围的营养和空间进行繁殖，使果蔬感染并且发病腐烂，造成果蔬品质下降甚至失去商品价值，带来的损失严重。长期以来，不同抑制采后病害的方法逐渐被应用到果蔬贮藏保鲜过程中，其中被应用得最为普遍是成本低、操作简便的化学方法，但是其不足之处在于化学药剂的残留威胁人类健康，对环境造成不利影响，以及长期的使用会造成采后病害病原菌产生抗性。低温贮藏等方式也存在着能耗大、成本高和果蔬品质不稳定等问题。越来越多的采后病害防治方法被应用到果蔬保鲜中，旨在弥补其他方式的不足。伴随生物技术的发展，利用生物手段对采后病害进行控制，降低果蔬腐烂的方式逐渐出现在人们视野中，开发安全而又有效抑制采后病害的新型生物菌剂应用到果蔬保鲜中已受到广泛关注。目前已有许多生防细菌和真菌被应用到病害防治中，其中，酵母菌因具有安全性高、抑菌谱广、生长迅速、遗传稳定性高、对营养要求低、对化学药物耐受性高，同时能与其他方法配合使用等特点而备受关注。拮抗酵母菌作为可防治果蔬采后病害拮抗菌中的一种，其主要优点在于对环境的要求低、抗逆性强、繁殖迅速、不产生毒素、受化学物质影响较小、抑菌谱较广且拮抗效果显著，且通过复合施用、与其它抑菌方法结合或是通过基因工程的手段可以的提高其生防效力。有研究发现，拮抗酵母菌可以产生分解真菌毒素的物质或降低毒素在果实上的积累，因而成为生物防治采后病害研究的主要菌种。目前报道存在的酵母菌约有600多种，研究发现具有生防能力的有几十种，这些生防酵母菌的种类主要集中于隐球酵母属(Cryptococcus)、假丝酵母属(Candida)、红酵母属(Rhodotorula)和毕赤酵母属(Pichia)。无机盐类是微生物的生命活动中不可缺少的物质，在维持其细胞形态和渗透压具有重要作用，无机盐浓度的改变会直接影响细胞形态。在微生物的生长活动中无机盐主要作用还包括调节细胞内的pH、参与细胞内酶的组成、一定程度上维持酶的活性和作为构成菌体的构成成分。通过在基础培养基中添加无机盐，仅以少量添加可进一步提高酵母菌菌数，为酵母菌扩大规模生产奠定基础。
技术实现思路
本专利技术为了提高浅白隐球酵母菌的菌量，通过对浅白隐球酵母菌的基础发酵培养基进行基础性的优化，提供了一种浅白隐球酵母菌发酵培养基。本专利技术的目的是通过以下技术方案实现的：一种浅白隐球酵母菌发酵培养基，由YPD培养基和无机盐制备而成，其中：无机盐包括MgSO4、K2HPO4、(NH4)2SO4、CaCl2，CaCl2的添加量为YPD培养基体积(ml)的0.05～0.2％，MgSO4的添加量为YPD培养基体积(ml)的0.02～0.1％，(NH4)2SO4的添加量为YPD培养基体积(ml)的0.05～0.3％，K2HPO4的添加量为YPD培养基体积(ml)的0.05～0.3％。本专利技术中，YPD培养基由葡萄糖20g、蛋白陈20g、酵母膏10g、蒸馏水1000mL制备而成。本专利技术中，浅白隐球酵母为浅白隐球酵母菌(Cryptococcusalbidus)WY-1(简称Ca64)，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为CGMCCNo.1976。相比于现有技术，本专利技术具有如下优点：1、本专利技术在基础培养基中将无机盐以合适比例添加，满足了酵母菌生命活动中对无机盐的需求。2、相比于基础培养基酵母菌菌量得到提高，优化后的配方菌量为基础培养基的2.15倍。附图说明图1为浅白隐球酵母菌的生长曲线；图2为浅白隐球酵母菌基础发酵培养基的筛选；图3为不同浓度的MgSO4对浅白隐球酵母菌生长的影响；图4为不同浓度的K2HPO4对浅白隐球酵母菌生长的影响；图5为不同浓度的(NH4)2SO4对浅白隐球酵母菌生长的影响图6为不同浓度的CaCl2对浅白隐球酵母菌生长的影响；图7为不同浓度的NaCl对浅白隐球酵母菌生长的影响；图8为不同浓度的FeSO4对浅白隐球酵母菌生长的影响；图9为不同浓度的ZnSO4对浅白隐球酵母菌生长的影响。具体实施方式下面结合附图对本专利技术的技术方案作进一步的说明，但并不局限于此，凡是对本专利技术技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本专利技术技术方案的精神和范围，均应涵盖在本专利技术的保护范围中。本专利技术为了提高浅白隐球酵母菌的菌量，利用单因素方法探究了不同浓度的7种无机盐对浅白隐球酵母菌生长的影响，得出MgSO4、K2HPO4、(NH4)2SO4、CaCl2对浅白隐球酵母菌生物量有明显地促进的作用，NaCl在浓度梯度内对浅白隐球酵母菌的生长影响不大，高浓度的FeSO4、ZnSO4对酵母菌生长表现为抑制作用。正交试验方法对浅白隐球酵母菌发酵基础进行了无机盐添加优化，得到浅白隐球酵母菌基于YPD培养基正交试验无机盐最佳添加组合为：CaCl20.1％，MgSO40.02％，(NH4)2SO40.1％，K2HPO40.3％。具体实验过程如下：一、浅白隐球酵母菌种子液的制备将浅白隐球酵母菌菌种于PDB培养基中活化，次日划线于PDA平板上，挑取单菌落转接于YPD液体种子培养基中，28℃下200r/min摇瓶培养24h，作为种子液备用。二、浅白隐球酵母菌生长动态的测定为了确定培养基优化过程中浅白隐球酵母菌种子液培养时间和发酵液优化的培养时间，浅白隐球酵母菌的生长动态测定方法如下：将浅白隐球酵母菌种子液接于50mL的YPD液体培养基中，接种量为2％，28℃下200r/min摇瓶培养，每隔4h(0h为灭菌的YPD液体培养基)测定一次，测定浅白隐球酵母菌在560nm下的OD值。以OD560为纵坐标，以培养时间为横坐标，绘制浅白隐球酵母菌的生长动态曲线，对浅白隐球酵母菌的生长规律进行分析。三、发酵初始培养基的筛选供试培养基为豆芽蔗糖培养基、沙氏培养基、麦芽培养基、YPD、PDB、NYDB。将浅白隐球酵母菌种子液以2％的接种量分别接入不同的培养基中，28℃，200r/min振荡培养36h，在显微镜下利用血球计数板直接测定计算各发酵液的菌数，选择产菌量最多的培养基为基本培养基。NYDB：葡萄糖10g，酵母浸粉5g，牛肉膏8g，馏水1000mL。麦芽培养基：麦芽粉130g，蒸馏水70mL，调PH至6.4。PDB：葡萄糖20g，马铃薯200g，蒸馏水1000mL。黄豆芽汁：黄豆芽100g，葡萄糖5g，蒸馏水1000mL。YPD：葡萄糖20g，蛋白陈20g，酵母膏10g，蒸馏水1000mL。沙氏培养基：蛋白的10g，葡萄糖40g，蒸馏水1000mL。四、不同浓度的无机盐对浅白隐球酵母菌菌数影响的单因本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种浅白隐球酵母菌发酵培养基，其特征在于所述培养基由YPD培养基和无机盐制备而成，其中：无机盐包括MgSO

【技术特征摘要】
1.一种浅白隐球酵母菌发酵培养基，其特征在于所述培养基由YPD培养基和无机盐制备而成，其中：无机盐包括MgSO4、K2HPO4、(NH4)2SO4、CaCl2，CaCl2的添加量为YPD培养基体积的0.05～0.2％，MgSO4的添加量为YPD培养基体积的0.02～0.1％，(NH4)2SO4的添加量为YPD培养基体积的0.05～0.3％，K2HPO4的添加量为YPD培养基质量的0.05～0.3％。


2.根据...

【专利技术属性】
技术研发人员：王傲雪，吕游，刘佳音，陈秀玲，张瑶，张贺，冯明芳，郭兰，
申请(专利权)人：东北农业大学，
类型：发明
国别省市：黑龙;23