一种天然化合物Egenine用于制备抗肾纤维化药物的用途制造技术

本发明专利技术公开了一种天然化合物Egenine用于制备抗肾纤维化药物的用途。绝大多数慢性肾脏疾病均可导致肾纤维化，如原发性肾小球疾病、慢性肾盂肾炎、系统性疾病导致的肾脏损害(如狼疮性肾炎和糖尿病肾病等)和遗传因素导致的肾病(如Alport综合征)等。肾纤维化是多因素驱动的病理过程，涉及炎症、氧化应激、多种细胞因子的作用及信号级联、细胞凋亡、成纤维细胞增殖和活化，以及上皮细胞向成纤维细胞转化等。本发明专利技术研究发现，天然化合物Egenine具有显著的抗肾纤维化活性，具有开发成抗肾纤维化药物的应用前景。

The use of a natural compound egene in the preparation of anti renal fibrosis drugs

【技术实现步骤摘要】
一种天然化合物Egenine用于制备抗肾纤维化药物的用途
本专利技术属于医药领域，涉及已知化合物的新用途，具体涉及一种天然化合物Egenine用于制备抗肾纤维化药物的用途。
技术介绍
慢性肾脏疾病已成为继心脑血管病、肿瘤、糖尿病之后的又一严重威胁人类健康的疾病。多数慢性肾脏疾病患者在发展为终末期肾病前可以得到正确的诊断，但遗憾的是目前还没有切实有效的治疗手段完全阻止慢性肾脏疾病导致的肾功能进行性下降。绝大多数慢性肾脏疾病均可导致肾纤维化，如原发性肾小球疾病、慢性肾盂肾炎、系统性疾病导致的肾脏损害(如狼疮性肾炎和糖尿病肾病等)和遗传因素导致的肾病(如Alport综合征)等。肾纤维化是多因素驱动的病理过程，涉及炎症、氧化应激、多种细胞因子的作用及信号级联、细胞凋亡、成纤维细胞增殖和活化，以及上皮细胞向成纤维细胞转化等。多数慢性肾纤维化的发病机制很复杂。虽然可根据疾病的进展将其发生机制分为炎症、凋亡和纤维化等阶段，但这些阶段不是截然分开，而是相互交错的。因此与之相应的肾纤维化治疗也不可能使用单一靶点策略。事实也证明，如单独使用血管紧张素转换酶抑制剂虽然能减缓肾衰的进程，但对疾病的逆转没有显著的效果；单一细胞因子抗体也不能完全阻滞或逆转纤维化发生，有时还会出现不良反应。Egenine为一种天然来源的生物碱化合物，CAS登录号6883-44-9，其活性研究极少，没有现有技术公开过其抗肾纤维化活性。为了丰富抗肾纤维化的药物，基于Egenine的活性研究结果，特提出本专利技术。专利技术内容本专利技术的目的在于提供一种天然化合物Egenine用于制备抗肾纤维化药物的用途。本专利技术上述目的通过如下技术方案实现：一种天然化合物Egenine用于制备抗肾纤维化药物的用途。一种抗肾纤维化的药物，以天然化合物Egenine为活性成分。进一步地，还含有药学上可以接受的辅料，制成药学上可以接受的剂型。进一步地，所述辅料为液体、固体或半固体辅料。进一步地，所述剂型包括片剂、胶囊、注射剂。有益效果：本专利技术研究发现，天然化合物Egenine具有显著的抗肾纤维化活性，具有开发成抗肾纤维化药物的应用前景。附图说明图1为各组小鼠血清中甘油三酯、尿素氮、肌酐及尿酸的含量比较柱状图；图2为各组小鼠肾脏组织切片H&E染色和Masson染色图；图3为各组小鼠肾脏组织中纤维化蛋白WB条带图；图4为各组小鼠肾脏组织中纤维化蛋白灰度扫描柱状图。具体实施方式下面结合附图和实施例具体介绍本专利技术实质性内容，但并不以此限定本专利技术的保护范围。一、实验材料1、实验材料Egenine纯度不低于95％；SPF级ICR小鼠购自南京市江宁区青龙山动物繁殖场(江苏省实验动物质量合格证编号：NO.201926974)。2、主要实验试剂多聚甲醛(天津市光复精细化工研究所)、二甲苯(国药集团化学试剂有限公司)、H&E染液(北京索来宝生物)、masson染液套装(北京索来宝生物)、中性树胶(国药集团化学试剂有限公司)、Fibronectin抗体(Abcam,ab45688)、CollagenⅠ抗体(Abcam,ab34710)、CollagenⅢ抗体(Proteintech,22734-1-AP)、α-SMA抗体(Abcam,ab124964)、甘氨酸及Tris(上海生工生物科技有限公司)、SDS(生兴生物)、吐温20(南京化学试剂有限公司)。二、实验方法1、动物分组、造模及给药ICR小鼠适应环境一周后，随机分为对照组、模型组和给药组三组，每组6只。其中模型组和给药组进行单侧输尿管结扎(UUO)手术，对照组仅造成手术创口不结扎(Sham)，给药组结扎后每天腹腔注射给予5mg/kgEgenine(UUO+5mg/kgEgenine)，对照组和模型组给予等量溶媒。2、动物处死、取样及样品处理持续给药7天后，处死小鼠，取全血及结扎侧肾脏组织。全血以3000rpm、4℃离心10min，小心吸取上层清亮血清液体于无菌离心管中，标记后放入-80℃冰箱储存备用；迅速摘取肾脏组织后于生理盐水中洗涤，剥去表面脂肪组织及黏膜，取1/3固定于4％多聚甲醛，用于组织病理检查；其余部分标记后放入-80℃冰箱，用于相关蛋白水平检测。3、血清生化及组织病理检测3.1、血清生化检测全自动生化分析仪是上样之后仪器自动检测，指标结果由仪器自动生成样本浓度，导出excel即可；依照生化按试剂盒说明书进行操作，再按照说明书上的公式将测量的样本吸光度换算成浓度。3.2、组织切片及H&E、masson染色固定好的肾脏组织脱水后石蜡包埋、切片。H&E染色：依次将切片放入二甲苯Ⅰ20min、二甲苯Ⅱ20min、无水乙醇Ⅰ5min、无水乙醇Ⅱ5min、75％酒精5min，自来水洗；切片入苏木素染液染3-5min，自来水洗，分化液分化，自来水洗，返蓝液返蓝，流水冲洗；切片依次入85％、95％的梯度酒精脱水各5min，入伊红染液中染色5min；切片依次放入无水乙醇I5min、无水乙醇II5min、无水乙醇Ⅲ5min、二甲苯Ⅰ5min、二甲苯Ⅱ5min透明，中性树胶封片。masson染色：依次将切片放入二甲苯Ⅰ20min、二甲苯Ⅱ20min、无水乙醇Ⅰ5min、无水乙醇Ⅱ5min、75％酒精5min，自来水洗；切片入重铬酸钾浸泡过夜，自来水洗；铁苏木素A液与B液等比混合成铁苏木素染液，切片入铁苏木素3min，自来水洗，分化液分化，自来水洗，返蓝液返蓝，流水冲洗；切片入丽春红酸性品红浸染5-10min，自来水漂洗；磷钼酸水溶液浸染1-3min；磷钼酸之后不用水洗，直接入苯胺蓝染液染3-6min；切片用1％冰醋酸分化，两缸无水乙醇脱水；切片放入第三缸无水乙醇5min，二甲苯5min透明，中性树胶封片。3.3、显微镜镜检、图像采集分析病理切片经镜检后评价打分，并摄取具有代表性的图像。4、肾脏组织中纤维化相关蛋白的表达运用蛋白免疫印迹法(westernblot)检测肾脏组织中纤维化相关蛋白Fibronectin、CollagenⅠ、CollagenⅢ、α-SMA的相对表达。4.1、组织蛋白样品制备根据组织蛋白提取试剂盒的操作说明，称取适量组织加入含蛋白酶抑制剂的裂解液，冰浴匀浆裂解；高速冷冻离心后吸取上层清液，得蛋白溶液；根据BCA蛋白定量试剂盒的操作说明，对所得组织蛋白进行定量；调整浓度后，加入上样缓冲液，煮沸得组织蛋白样品，用于凝胶电泳。4.2、凝胶电泳及转膜按照配方制备聚丙烯酰胺凝胶，放入电泳槽后上样，加满电泳液，先60V使蛋白样品压平，后120V进行电泳；电泳完成后进行湿法转膜，按照海绵-滤纸-胶-PVDF膜-滤纸-海绵的顺序固定在转膜槽中，加满转膜液，冰浴转膜(280mA，约90mi本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种天然化合物Egenine用于制备抗肾纤维化药物的用途。/n

【技术特征摘要】
1.一种天然化合物Egenine用于制备抗肾纤维化药物的用途。


2.一种抗肾纤维化的药物，其特征在于：以天然化合物Egenine为活性成分。


3.根据权利要求2所述的药物，其特征在于：还含有药学上...

【专利技术属性】
技术研发人员：周伟，张之昊，何俊秋，张春磊，殷爱玲，
申请(专利权)人：中国药科大学，
类型：发明
国别省市：江苏;32