The invention discloses a fast v \u2011 P test method and a kit for the method. The rapid V \u2011 P test method includes the following steps: (1) inoculate the test strain into the improved MR \u2011 VP broth medium, keep it at 37 \u2103 for 3 \u2011 4h, and keep it at 22 \u2011 25 \u2103; (2) add 2 drops of liquid a, 3 drops of liquid B and 2 drops of liquid C into the medium successively after heat preservation, and mix it fully for 2 \u2011 5min, and the red color will be judged as positive; if there is no red color, put it at room temperature or 37 \u2103 for constant temperature The box still does not show red within 15 minutes, so it is judged as negative. Among them, solution a is 0.5% w / W creatine solution; solution B is 95% (w / W) alcohol solution containing 5% w / w \u03b1 - naphthol (1 \u2011 naphthol); solution C is 40% w / V potassium hydroxide aqueous solution. This method can accelerate the rate of positive reaction, and the result can be interpreted in 3 \u2011 4 hours. Enhance the color effect, bright and intuitive. It can be applied to the detection of Enterobacteriaceae and Micrococcus at the same time. There is no special requirement for the colony to be detected. The amount of medium and reagent is small, the price is low, the formula is simple and the performance is stable.
【技术实现步骤摘要】
一种快速V-P试验法以及用于该方法的试剂盒
本专利技术涉及一种V-P试验法,还涉及用于该方法的试剂盒。本专利技术属于微生物检测
技术介绍
肠杆菌科和微球菌科细菌属种繁多、分布广泛、寄主范围大,有几十个与医学有关的菌属,占临床分离菌总数的50%,将近50%的败血症、70%以上的泌尿道感染是由此类菌引起的,另外由其引起的食物中毒事件已成为世界性的公共卫生问题,是人类健康的潜在杀手,如何避开设备条件的限制,利用快速简便的生化试验实现对肠杆菌科和微球菌科细菌的属种快速鉴别,是我们需要研究攻破的重点课题。V-P试验,又名二乙酰试验。其原理是某些细菌在糖代谢过程中,分解葡萄糖产生丙酮酸,丙酮酸脱羧产生乙酰甲基甲醇,乙酰甲基甲醇在碱性环境中,被空气中的氧氧化为二乙酰,进而与培养基内蛋白胨中精氨酸所含的胍基起作用,生成红色化合物,则为V-P试验阳性。V-P试验可以用于以下用途:①肠杆菌属与埃希菌属,葡萄球菌属与微球菌属的属间鉴别;②肺炎克雷伯菌、产酸克雷伯菌、臭鼻克雷伯菌、鼻硬结克雷伯菌间的菌种鉴别;③蜂房哈夫尼亚菌与小肠结肠炎耶尔森菌及单核细胞增生李斯特菌的菌种鉴定。国内外常用的V-P试验法有:O’Meara氏法、Barritt氏法、Coblentz氏法等,其中最快要24h,慢的要4天才能得出检测结果;在检测芽胞杆菌和葡萄球菌等其它细菌时,通用培养基中的磷酸盐会阻碍乙酰甲基甲醇的产生,造成假阴性结果;另外有些方法仅能检测产酸的培养物。不但检测时间长,试剂不稳定,适用范围也受到限制。 ...
【技术保护点】
1.一种快速V-P试验法,其特征在于,包括以下步骤:/n(1)将试验菌种接种于改良MR-VP肉汤培养基中,37℃保温3-4h,哈夫尼亚菌在22-25℃保温;/n所述的改良MR-VP肉汤通过以下方法制备:酵母膏1g、植物胨5g、多胨7g、氯化钠5g、葡萄糖10g、琼脂5g,加蒸馏水1000ml,调节pH7.0,121℃15min灭菌,试管分装;/n(2)保温结束后往培养基中依次加入A液2滴,B液3滴,C液2滴,充分混合2-5min,呈现红色判定为阳性;若无红色出现,置于室温或37℃恒温箱,15min内仍不显现红色、判定为阴性;/n其中,A液为0.5%w/w肌酸溶液;B液为含5%w/wα-萘酚(1-naphthol)的95%w/w酒精溶液;C液为40%w/v氢氧化钾水溶液。/n
【技术特征摘要】
1.一种快速V-P试验法,其特征在于,包括以下步骤:
(1)将试验菌种接种于改良MR-VP肉汤培养基中,37℃保温3-4h,哈夫尼亚菌在22-25℃保温;
所述的改良MR-VP肉汤通过以下方法制备:酵母膏1g、植物胨5g、多胨7g、氯化钠5g、葡萄糖10g、琼脂5g,加蒸馏水1000ml,调节pH7.0,121℃15min灭菌,试管分装;
(2)保温结束后往培养基中依次加入A液2滴,B液3滴,C液2滴,充分混合2-5min,呈现红色判定为阳性;若无红色出现,置于室温或37℃恒温箱,15min内仍不显现红色、判定为阴性;
其中,A液为0.5%w/w肌酸溶液;B液为含5%w/wα-萘酚(1-naphthol)的95%w/w酒精溶液;C液为40%w/v氢氧化钾水溶液。
2.如权利要求1所述的快速V-P试...
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。