在薄膜培养装置中快速检测大肠杆菌制造方法及图纸

本发明专利技术提供一种用于差分计数大肠菌群和大肠杆菌(Escherichia coli)微生物的菌落的装置。所述装置包括不透水的第一片；不透水的第二片，所述第二片附接到所述第一片；干燥的可再水合培养基，所述培养基包含乳糖发酵指示剂体系、β‑D‑葡糖苷酸酶指示剂体系和粘附到所述第一片的第一冷水可溶性胶凝剂，所述培养基设置在微生物生长区中；和第二冷水可溶性胶凝剂，所述第二冷水可溶性胶凝剂粘附到所述第二片。所述微生物生长区设置在所述第一片和所述第二片之间。所述第一片和所述第二片被构造成阻滞二氧化碳从其中穿过。还提供使用所述装置的方法。

Rapid detection of Escherichia coli in membrane culture device

The invention provides a device for differential counting of coliforms and colonies of Escherichia coli microorganisms. The device comprises an impermeable first sheet, an impermeable second sheet attached to the first sheet, a dry rehydrable medium comprising a lactose fermentation indicator system, a \u03b2 \u2011 D \u2011 glucosidase indicator system and a first cold water soluble gelling agent attached to the first sheet, wherein the medium is arranged in a microbial growth area, and The second cold water soluble gelling agent adheres to the second piece. The microbial growth area is arranged between the first piece and the second piece. The first piece and the second piece are configured to block carbon dioxide from passing through them. A method of using the device is also provided.

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】在薄膜培养装置中快速检测大肠杆菌相关申请的交叉引用本申请要求2017年4月3日提交的美国临时专利申请62/480,630的权益，该专利申请的公开内容以引用方式全文并入本文。
技术介绍
在食品和饮料安全测试中，大肠型细菌的存在或不存在被认为是质量的重要证据。在世界许多国家，饮料和某些食品(例如乳制品)中允许的大肠型细菌的量受到控制。大肠型细菌包括粪便大肠菌群，诸如大肠杆菌(Escherichiacoli)。食品或水样品中存在的粪便大肠菌群被用作食品或水的粪便污染以及可能存在的其他病原微生物的主要指示剂。用于检测、鉴定和/或计数食品样品中的微生物的方法通常根据食品的性质以及可能存在于样品中的微生物的类型而有所不同。用于测试食品样品的方法概要包括由美国公共卫生协会(华盛顿特区(Washington,D.C.))公布的第27版增刊“StandardMethodsfortheExaminationofDairyProducts(乳品检验标准方法)”，以及由美国食品药品监督管理局(华盛顿特区(Washington,D.C.))公布的“BacteriologicalAnalyticalManual(细菌学分析手册)”(“BAM”)。通常将固体食品悬浮于含水介质中，并混合和/或研磨以得到可用于微生物定量分析方法中的食品材料的匀浆液。然而，上述方法通常相对昂贵，涉及多个步骤，需要约24小时至48小时的温育时间段才能计数菌落，并且/或者需要相对复杂的仪器和/或相对高度训练的人员。需要用于计数食品和饮料样品中的活大肠菌群和大肠杆菌(E.coli)微生物的更快的方法。
技术实现思路
一般来讲，本公开涉及检测和计数样品中的微生物。具体地，本公开涉及可用于在半固体培养基中使大肠型细菌的菌落形成单位(CFU)生长以及差分计数大肠菌群CFU和大肠杆菌CFU的培养装置。本专利技术培养装置尤其可用于检测和区分弱产气的大肠杆菌的菌落，从而提供对样品中存在的微生物的更准确计数。此外，该装置中使用的培养基比先前的薄膜培养装置更快地检测和计数大肠型细菌和大肠杆菌。本公开还提供了使用培养装置的方法。本文所公开的本专利技术方法提供大肠菌群和大肠杆菌细菌的生长、检测和区分。与使用薄膜培养装置计数大肠菌群和大肠杆菌菌落的先前方法相比，该方法允许更快且更准确地计数大肠菌群和大肠杆菌菌落。在一个方面，本公开提供一种用于差分计数大肠菌群和大肠杆菌微生物的菌落的装置。该装置可包括不透水的第一片；不透水的第二片，该第二片附接到第一片；干燥的可再水合培养基，该培养基包含粘附到第一片的第一冷水可溶性胶凝剂；微生物生长区，该微生物生长区设置在第一片和第二片之间；乳糖发酵指示剂体系，该乳糖发酵指示剂体系设置在微生物生长区中；β-D-葡糖苷酸酶指示剂体系，该β-D-葡糖苷酸酶指示剂体系设置在生长区中；氧化还原指示剂体系和第二冷水可溶性胶凝剂，该第二冷水可溶性胶凝剂粘附到第二片。培养基可包含促进大肠菌群微生物生长的有机氮营养物质、乳糖发酵指示剂体系、β-D-葡糖苷酸酶指示剂体系、氧化还原指示剂、和有效量的至少一种选择性地抑制非大肠菌群微生物生长的试剂。培养基的粘附到第一片的区域限定生长区。乳糖发酵指示剂体系包含D-乳糖、增强β-半乳糖苷酶产生的第一诱导剂化合物和pH指示剂。β-D-葡糖苷酸酶指示剂体系包含5-溴-4-氯-3-吲哚基-β-D-葡糖苷酸和增强β-葡糖苷酸酶酶活性产生的至少一种化合物。氧化还原指示剂体系优选地包含氯化四唑(TTC)。第一片附接到第二片，使得培养基面向第二冷水可溶性胶凝剂。第一片和第二片被构造成阻滞二氧化碳从其中穿过。在上述实施方案中的任一个实施方案中，该装置包括增强大肠杆菌中的β-葡糖苷酸酶活性的多种化合物，其中多种化合物设置在微生物生长区中。在上述实施方案中的任一个实施方案中，第一片和/或第二片可包括聚酯膜。在上述实施方案中的任一个实施方案中，第二片可包含聚对苯二甲酸乙二醇酯。在上述实施方案中的任一个实施方案中，生长区可由粘附到第一片的间隔物限定。在上述实施方案中的任一个实施方案中，培养基还包含当用含水液体复水时，在介于约6.5和约7.5之间的pH下缓冲培养基的试剂。在上述实施方案中的任一个实施方案中，有机氮营养物质选自酵母提取物、猪蛋白胨、明胶的酶消化物、动物蛋白胨的酶消化物以及上述有机氮营养物质中的任何两种或更多种的组合物。在上述实施方案中的任一个实施方案中，试剂可选自胆汁盐、十二烷基硫酸钠以及它们的组合物。在另一个方面，本公开提供一种差分计数大肠菌群和大肠杆菌微生物的菌落的方法。该方法可包括词语“优选的”和“优选地”是指在某些情况下可提供某些有益效果的本专利技术实施方案。然而，在相同的情况或其它情况下，其它实施方案也可以是优选的。此外，对一个或多个优选实施方案的表述并不暗示其它实施方案是不可用的，且并非旨在将其它实施方案排除在本专利技术范围之外。术语“包括”及其变型在说明书和权利要求书中出现这些术语的地方不具有限制的含义。如本文所用，“一个”、“一种”、“所述”、“至少一种(个)”以及“一种(个)或多种(个)”可互换使用。因此，例如，营养素可被理解为“一种或多种”营养素。术语“和/或”意指所列要素中的一个或全部，或者所列要素中的任何两个或更多个的组合。另外，在本文中，通过端点表述的数值范围包含该范围内所含的所有数值(例如，1至5包含1、1.5、2、2.75、3、3.80、4、5等)。本专利技术的上述
技术实现思路
并非旨在描述本专利技术的每个公开的实施方案或每种实施方式。以下描述更为具体地举例说明了例示性实施方案。在本申请全文的若干处，通过实施例列表提供了指导，这些实施例能够以各种组合使用。在每种情况下，所引用的列表都只用作代表性的组，并且不应被理解为排他性列表。这些及其它实施方案的附加细节在下文附图和描述中示出。通过具体实施方式、附图和权利要求书，其它特征、目标和优点将变得显而易见。附图说明参考附图可以进一步说明本专利技术，其中：图1为本公开的优选微生物生长装置的局部剖视顶部透视图；图2为图1的装置的剖视图；图3为可印刷在图1的装置的第一片或第二片上的网格图案的顶视图。尽管上述各图示出了本公开的若干个实施方案，但是如讨论所述，还可以想到其它实施方案。在所有情况下，本公开通过示例性而非限制性的方式介绍本专利技术。应当理解，本领域的技术人员可以设计出大量其它修改形式和实施方案，这些修改形式和实施方案均落在本专利技术的范围内并符合本专利技术原理的实质。附图可不按比例绘制。具体实施方式在详细解释本公开的任何实施方案之前，应当理解，本专利技术在其应用中不限于下文说明中所提及或下文附图中所示出的构造细节和部件布置方式。本专利技术能够具有其它实施方案，并且能够以各种方式实践或实施。而且，应当理解，本文使用的措辞和术语是用于说明目的而不应视为限制性的。本文中“包括”、“包含”或“具有”及其变型的使用意指涵盖其后所列举的项目及其等同形式以及附加的项目。除非另外说明或限定，本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种用于差分计数大肠菌群和大肠杆菌微生物的菌落的装置，所述装置包括：/n不透水的第一片；/n不透水的第二片，所述第二片附接到所述第一片；/n干燥的可再水合培养基，所述培养基粘附到所述第一片；/n其中所述培养基包含：/n有机氮营养物质，所述有机氮营养物质促进大肠菌群微生物生长；/n乳糖发酵指示剂体系，所述乳糖发酵指示剂体系包含D-乳糖、增强β-半乳糖苷酶产生的第一诱导剂化合物和pH指示剂；/nβ-D-葡糖苷酸酶指示剂体系，所述β-D-葡糖苷酸酶指示剂体系包含5-溴-4-氯-3-吲哚基-β-D-葡糖苷酸和增强大肠杆菌中的β-葡糖苷酸酶活性的至少一种化合物；/n氧化还原指示剂；/n有效量的至少一种试剂，所述试剂选择性地抑制非大肠菌群微生物生长；和/n第一冷水可溶性胶凝剂；/n微生物生长区，所述微生物生长区设置在所述第一片和所述第二片之间，其中所述培养基的粘附到所述第一片的区域限定所述生长区；和/n第二冷水可溶性胶凝剂，所述第二冷水可溶性胶凝剂粘附到所述第二片；/n其中所述第一片附接到所述第二片，使得所述培养基面向所述第二冷水可溶性胶凝剂；/n其中所述第一片和所述第二片被构造成阻滞二氧化碳从其中穿过。/n...

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20170403 US 62/480,6301.一种用于差分计数大肠菌群和大肠杆菌微生物的菌落的装置，所述装置包括：
不透水的第一片；
不透水的第二片，所述第二片附接到所述第一片；
干燥的可再水合培养基，所述培养基粘附到所述第一片；
其中所述培养基包含：
有机氮营养物质，所述有机氮营养物质促进大肠菌群微生物生长；
乳糖发酵指示剂体系，所述乳糖发酵指示剂体系包含D-乳糖、增强β-半乳糖苷酶产生的第一诱导剂化合物和pH指示剂；
β-D-葡糖苷酸酶指示剂体系，所述β-D-葡糖苷酸酶指示剂体系包含5-溴-4-氯-3-吲哚基-β-D-葡糖苷酸和增强大肠杆菌中的β-葡糖苷酸酶活性的至少一种化合物；
氧化还原指示剂；
有效量的至少一种试剂，所述试剂选择性地抑制非大肠菌群微生物生长；和
第一冷水可溶性胶凝剂；
微生物生长区，所述微生物生长区设置在所述第一片和所述第二片之间，其中所述培养基的粘附到所述第一片的区域限定所述生长区；和
第二冷水可溶性胶凝剂，所述第二冷水可溶性胶凝剂粘附到所述第二片；
其中所述第一片附接到所述第二片，使得所述培养基面向所述第二冷水可溶性胶凝剂；
其中所述第一片和所述第二片被构造成阻滞二氧化碳从其中穿过。


2.根据前述权利要求中任一项所述的装置，所述装置还包括设置在所述微生物生长区中的D-葡糖醛酸。


3.根据前述权利要求中任一项所述的装置，其中所述第一片包括聚酯膜。


4.根据前述权利要求中任一项所述的装置，其中所述第二片包括聚酯膜。


5.根据权利要求4所述的装置，其中所述第二片包含聚对苯二甲酸乙二醇酯。


6.根据前述权利要求中任一项所述的装置，其中所述生长区由粘附到所述第一片的间隔物限定。


7.根据前述权利要求中任一项所述的装置，其中所述冷水可溶性胶凝剂包括瓜尔胶。


8.根据前述权利要求中任一项所述的装置，其中粘附到所述第一片的所述培养基具有约130mg/100cm2至约195mg/100cm2的涂布量。


9.根据前述权利要求中任一项所述的装置，其中乳糖设置在粘附到所述第一片的所述干燥培养基中，其中所述乳糖以约8.5mg/100cm2至约27mg/1...

【专利技术属性】
技术研发人员：塞拉嘉·常德拉帕蒂，阿莱克·J·蒂加登，黑利·A·萨多里斯，
申请(专利权)人：三M创新有限公司，
类型：发明
国别省市：美国;US